梔子黃芩配伍前后梔子中主要化學(xué)成分的含量變化規(guī)律研究*

畢志明，郭井妹，張 珊，李 萍

中國(guó)藥科大學(xué) 現(xiàn)代中藥教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210009

中藥復(fù)方配伍是中醫(yī)藥文化的精髓，梔子常與黃芩配伍，在許多古方及中成藥制劑中都有應(yīng)用，如黃連解毒湯、黃芩清肺湯、龍膽瀉肝湯、清開靈注射液、茵梔黃注射液、梔子金花丸等。梔子配黃芩，可增強(qiáng)清熱解毒除燥之效，起到相須相使的作用。因主治病證的不同，梔子、黃芩常以不同比例配伍出現(xiàn)在各古方及中成藥制劑中，其中最常用的配伍比例為1︰1，而 3︰1、2︰1、1︰2、1︰3 等也較常見。

梔子苷與西紅花苷-1是中藥梔子中的主要化學(xué)成分[1]。梔子苷為《中國(guó)藥典》（2010版）中梔子的指標(biāo)性成分[2]，其主要藥理活性有保肝利膽、免疫增強(qiáng)等[3]；西紅花苷-1在抗炎、抗氧化、心血管保護(hù)等方面具有廣泛活性[4-6]。本文采用高效液相色譜法對(duì)不同比例的梔子、黃芩配伍前后煎煮液中梔子苷和西紅花苷-1的含量進(jìn)行了測(cè)定，以觀察配伍對(duì)成分煎出量的影響。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（Aglient 1200），包括四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，紫外檢測(cè)器；十萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)賽多利斯公司，BP211D型）；數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司，HH-4型)。

梔子與黃芩飲片購(gòu)于南京先聲藥店，經(jīng)李萍教授鑒定分別為：茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實(shí)：唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。

梔子苷（geniposide）和西紅花苷-1（crocin-1）均自制，并經(jīng)各種理化常數(shù)和MS、NMR鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC法測(cè)定純度均大于98%；水為超純水；甲醇為色譜純 （江蘇漢邦科技有限公司）；甲酸為分析純（江蘇漢邦科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Dikma Diamonsil C18色譜柱 （4.6 mm×250 mm,5 μm）。流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸水溶液，B相為甲醇，梯度洗脫條件為 0～5 min，10～25%B；5～22 min，25%～38%B；22～26 min，38%～55%B；26～38 min，55%～70%B；38～43 min，70%～100%B；43～48 min，100%B。檢測(cè)波長(zhǎng)程序設(shè)定為0～22 min，238 nm；22.01～48 min，440 nm。流速 0.8 mL·min-1；柱溫 25℃；進(jìn)樣量 5 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取梔子苷、西紅花苷-1對(duì)照品適量于5 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度分別為1.1、0.21 mg·mL-1的混標(biāo)儲(chǔ)備液。

2.2.2 供試品溶液的制備將梔子、黃芩分別粉碎，過60目篩，備用。分別精密稱取梔子0.5 g（梔子單味藥），梔子 0.5 g、黃芩 0.167 g（質(zhì)量比為 3︰1），梔子 0.5 g、黃芩 0.25 g（質(zhì)量比為 2︰1），梔子 0.5 g、黃芩 0.5 g（質(zhì)量比為 1︰1），梔子 0.5 g、黃芩 1 g（質(zhì)量比為 1︰2），梔子 0.5 g、黃芩 1.5 g（質(zhì)量比為 1︰3）各4份，置具塞錐形瓶中加水50 mL，稱重，分別煎煮回流 0.5、1、2、3 h，冷卻后純水補(bǔ)重，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備精密稱取黃芩0.5 g，4份，按“2.2.2”項(xiàng)下操作，制成黃芩單煎陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

依照上述色譜條件，分別吸取四個(gè)不同提取時(shí)間供試品溶液(1︰1)、陰性對(duì)照品溶液及混標(biāo)溶液各5 μL，進(jìn)樣分析，色譜峰分離良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，HPLC色譜圖見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取混標(biāo)儲(chǔ)備液，分別稀釋成一系列不同濃度的混標(biāo)溶液，按“2.1”項(xiàng)下，進(jìn)行分析測(cè)定，以峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸計(jì)算，其回歸方程分別為：Y=1848.7X+120.01，r=0.9999；Y=9780.1X-17.493，r=0.9998。 表明梔子苷在0.343～5.48 μg范圍內(nèi)，西紅花苷-1在0.0328～0.525 μg 范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.5 精密度考察

取混標(biāo)溶液5 μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算2個(gè)成分峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），其 RSD 分別為：1.41%、1.33%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性及穩(wěn)定性考察

取1︰1配比的梔子-黃芩混合粉末5份，平行操作，煎煮1 h，按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣，梔子苷和西紅花苷-1色譜峰面積的RSD分別為0.60%、1.05%，表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。取其中1份樣品，分別于 0、4、8、12、24 h 后進(jìn)行測(cè)定，兩成分的色譜峰面積RSD分別為0.92%、2.21%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 樣品的測(cè)定

將不同煎煮時(shí)間、不同配比的梔子-黃芩供試品溶液在相同色譜條件下分別進(jìn)樣5 μL，并計(jì)算梔子苷和西紅花苷-1的含量，結(jié)果見表1。

表1 不同煎煮時(shí)間梔子-黃芩不同配比樣品中梔子苷和西紅花苷-1的含量（mg·g-1)

3 討 論

中藥湯劑一直是中醫(yī)用藥的主要方式，湯劑的煎煮過程主要是有效成分的溶出及其可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的過程。本實(shí)驗(yàn)考察了梔子與黃芩配伍前后中梔子中主要化學(xué)成分——梔子苷和西紅花苷-1的含量變化情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，梔子與黃芩配伍后，梔子苷的含量略有增加，西紅花苷-1的含量增加較明顯。梔子苷在煎煮0.5 h時(shí)溶出基本達(dá)到平衡，繼續(xù)煎煮含量變化不大；而西紅花苷-1在煎煮0.5 h時(shí)含量達(dá)到最大，繼續(xù)煎煮則含量降低。配伍后，各個(gè)不同配比中西紅花苷-1的含量均有增加，在煎煮時(shí)間為0.5 h到2 h時(shí)各配比中西紅花苷-1的含量增加沒有明顯差異，但在煎煮時(shí)間達(dá)到3 h時(shí)，各配比中西紅花苷-1的含量差異較明顯。

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，由于西紅花苷-1受熱不穩(wěn)定，故西紅花苷-1的回收率很低；而梔子苷很穩(wěn)定，當(dāng)提取時(shí)間為1 h時(shí)，梔子苷的平均回收率為98.22%，RSD為0.75%?？紤]西紅花苷-1的穩(wěn)定性較差，應(yīng)低溫、避光保存，最好現(xiàn)配現(xiàn)用；藥材水提液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，但放置時(shí)間超過24 h，西紅花苷-1的含量將減少。

我們比較梔子與黃芩配伍前后提取液的色譜圖，沒有新的色譜峰出現(xiàn)。研究中還發(fā)現(xiàn)，除梔子苷和西紅花苷-1外，梔子中還有多個(gè)色譜峰面積都有所改變，其中西紅花苷-2和西紅花苷-3的含量增加明顯，其變化規(guī)律有待進(jìn)一步研究。另外，此次實(shí)驗(yàn)只考察了常用的5個(gè)配比，而梔子與黃芩還有很多不同的配比，需進(jìn)一步考察各種配比的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并對(duì)其進(jìn)行反復(fù)驗(yàn)證。

[1] 謝學(xué)建，張俊慧，馬愛華，等.中藥梔子研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2000，11(10)：943-5.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：231-2.

[3] 彭 婕，錢之玉，劉同征，等.京尼平苷和西紅花酸保肝利膽作用的比較[J].中國(guó)新藥雜志,2003,12(2):105-8.

[4] 馬世平，周素娣，舒 斌，等.西紅花總苷的藥理學(xué)研究：對(duì)炎癥及免疫功能的影響[J].中草藥，1998，29(8)：536-9.

[5] 陳 陽(yáng)，楊 婷，黃 娟，等.西紅花苷和西紅花酸在小鼠體內(nèi)抗氧化活性對(duì)比研究 [J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2010，26(2)：248-51.

[6] 緒廣林，錢之玉.西紅花苷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用研究[J]. 中草藥，2002，33(5)：439-42.