宮頸病變中凋亡調(diào)控因子Bcl-2、Survivin及Fas的表達(dá)與意義

楊崢莉 趙 揚(yáng) 劉榮霞 張 霞

河北省石家莊市第四醫(yī)院婦產(chǎn)科 050011

宮頸癌是全球婦女中僅次于乳腺癌的第二個(gè)常見的惡性腫瘤,其發(fā)病是多種因素作用導(dǎo)致多基因改變的結(jié)果。近年來發(fā)現(xiàn)腫瘤發(fā)生除與細(xì)胞過度增殖有關(guān)外,細(xì)胞凋亡的抑制也參與了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。Bcl-2、Survivin、Fas是重要的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)基因,它們不僅對維持細(xì)胞的正常生理功能與生存繁殖有著重要意義,而且在許多自身免疫性疾病及某些腫瘤的病理發(fā)生中具有重要作用。筆者應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測Bcl-2、Survivin、Fas在正常宮頸、CIN、宮頸癌中的表達(dá),揭示三者在宮頸癌的發(fā)展過程中的臨床意義,為宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制提供理論依據(jù),為宮頸癌的預(yù)防和治療提供監(jiān)測指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 材料 所有標(biāo)本為我院2000年1月-2007年4月間存檔石蠟標(biāo)本共195份,其中正常子宮頸組織(來源于因子宮肌瘤或卵巢腫瘤行子宮全切的宮頸組織)30份,CINⅠ42份,CINⅡ38份,CINⅢ45份,宮頸浸潤鱗癌40份?；颊咝g(shù)前均未接受化療、放療和性激素治療。年齡38～77歲,平均年齡52.6歲。

1.2 方法 所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋,4μ m連續(xù)切片,HE染色,光鏡觀察。免疫組化采用SP法,鼠抗人Bcl-2單克隆抗體試劑盒、兔抗人Survivin多克隆抗體試劑盒、兔抗人Fas多克隆抗體試劑盒、SP(鼠/兔)免疫組化試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)步驟均按試劑盒說明書進(jìn)行。光學(xué)顯微鏡下觀察,細(xì)胞漿和/或細(xì)胞膜呈棕黃色者為Bcl-2、Survivin、Fas陽性細(xì)胞。每例隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,計(jì)算其陽性細(xì)胞比率(%)記分:1～25為1分,26～50為2分,51～75為3分,76～100為4分;染色程度記分:淡黃為1分,棕黃為2分,棕褐為3分。評定結(jié)果:陽性細(xì)胞比率+染色程度總分?jǐn)?shù),陰性0～3分,陽性4～7分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,各樣本率差異的比較采用χ2檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Bcl-2、Survivin及Fas在正常宮頸上皮、CIN和宮頸癌中的表達(dá)情況 Bcl-2及Survivin陽性染色均主要定位于細(xì)胞漿,Fas表達(dá)陽性染色主要定位于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)和胞膜中,呈淡黃色或棕黃色顆粒。正常宮頸上皮,Bcl-2、Fas有表達(dá)而Survivin無表達(dá)。Bcl-2、Survivin及Fas在CIN和宮頸癌中均有不同程度的表達(dá),Bcl-2及Survivin在CIN中的陽性表達(dá)率顯著高于正常宮頸上皮(P＜0.05),在宮頸癌的陽性表達(dá)率顯著高于CIN組(P＜0.05)。而Fas在正常宮頸中的陽性表達(dá)高于CIN和宮頸癌組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);CIN與宮頸癌組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

2.2 Bcl-2、Survivin及Fas在CIN各期組織中的表達(dá) 在CIN組織中,隨著宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變的進(jìn)展(CINⅠ～Ⅲ),Bcl-2表達(dá)陽性率分別為21.4%、31.6%和60.0%,CINⅠ、CINⅡ和 CINⅢ組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Survivin陽性率分別為23.8%、57.9%和86.7%,CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ組兩兩相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Fas表達(dá)陽性率,分別為 76.19%、44.70%和40.0%,CINⅠ分別與CINⅡ、CINⅢ組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而CINⅡ與CINⅢ組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 Bc1-2、Survivin、Fas蛋白在正常宮頸、CIN及宮頸癌中的表達(dá)〔n(%)〕

2.3 Survivin與Bcl-2、Fas的相關(guān)性 經(jīng)等級相關(guān)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn):在宮頸病變組織中,Survivin與Bcl-2的表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05);Survivin與Fas的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。

3 討論

Bcl-2(B-celllymphoma/leukemia-2)為發(fā)現(xiàn)較早的凋亡抑制因子。Bcl-2基因定位在18q21,Bcl-2蛋白含239個(gè)氨基酸,分子量為26KD。轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)表明,Bcl-2基因有致癌性,其致癌機(jī)制并非通過促進(jìn)細(xì)胞增殖引起,而是由于其抑制細(xì)胞凋亡造成腫瘤細(xì)胞的堆積[1]?？赡艿臋C(jī)制是通過封閉細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn),抑制細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高,發(fā)揮抗氧化作用和抗凋亡作用。研究證實(shí)多種腫瘤組織中存在Bcl-2的過度表達(dá)[2～4],Bcl-2基因表達(dá)異常增加可使已有基因異常改變的細(xì)胞逃避凋亡,由此引起的基因異常事件的累積是導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤形成的必要前提[5]。本研究采用免疫組化技術(shù)對正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和宮頸癌組織中的Bcl-2蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的陽性率逐漸增加,同時(shí)隨著CIN病變加重而逐漸升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示Bcl-2蛋白過度表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生有關(guān),在宮頸癌變的早期階段,各種致癌因子如高危型HPV感染,引發(fā)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2基因活化,導(dǎo)致其基因產(chǎn)物的過度表達(dá),Bcl-2通過抑制細(xì)胞凋亡,延長細(xì)胞壽命使遺傳物質(zhì)突變率增加,從而增加腫瘤發(fā)生的機(jī)會(huì)。因此在臨床工作中,對Bcl-2陽性的患者一定要注意其病變的進(jìn)展,給予適當(dāng)?shù)奶幚怼?/p>

Survivin基因位于人類17號染色體q25區(qū),屬于凋亡抑制蛋白家族(IAP),是IAP家族中迄今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凋亡抑制因子。具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂的雙重功能,是聯(lián)系細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡界面的重要因子。在生理狀態(tài)下,凋亡途徑清除體內(nèi)衰老和異常的細(xì)胞,有利于保持體內(nèi)組織的動(dòng)態(tài)平衡。在腫瘤發(fā)生的早期,Survivin過表達(dá)直接或間接抑制了凋亡,利于異?；虻倪M(jìn)一步積聚,促使細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,從而有助于腫瘤的進(jìn)展。Branca等[6]研究表明Survivin是一種早期宮頸癌發(fā)生的標(biāo)志,Survivin的抗凋亡功能是通過人乳頭狀瘤病毒(HPV)E6阻斷野生型P53的正常轉(zhuǎn)錄實(shí)現(xiàn)的。

Survivin是腫瘤特異性凋亡抑制因子,在幾乎人類所有的腫瘤中高表達(dá)[7]。Kim等[8]通過免疫組化的方法對41例CIN及宮頸浸潤癌的研究發(fā)現(xiàn),隨著病變的發(fā)展,Survivin的表達(dá)逐漸升高。本研究結(jié)果在30例正常子宮頸組織中,Survivin表達(dá)均為陰性。在子宮頸上皮內(nèi)瘤樣變中檢測到了Survivin的表達(dá),而且隨子宮頸上皮內(nèi)病變的進(jìn)展,從正常子宮頸發(fā)展到CINⅠ、CINⅡ,再到CINⅢ,浸潤癌,Survivin的表達(dá)率逐漸升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),提示Survivin作為凋亡抑制蛋白在子宮頸從癌前病變到癌的演變進(jìn)程中扮演了重要角色。Survivin在宮頸中的過度表達(dá),通過抑制細(xì)胞凋亡,為存在基因缺陷的細(xì)胞提供生存優(yōu)勢,促使基因突變的積聚和細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,最終導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生發(fā)展。因此,臨床上對于宮頸病理診斷CINⅠ～Ⅱ,同時(shí)Survivin表達(dá)陽性的病例,應(yīng)嚴(yán)密隨訪并積極治療。

Fas是一種由319個(gè)氨基酸組成的分子量為45 000的Ⅰ型跨膜糖蛋白,在多種組織中均有表達(dá),組織細(xì)胞類型不同表達(dá)程度也不同。Fas基因位于人染色體10q23上,Fas抗原屬于神經(jīng)生長因子/腫瘤超家族的成員之一[9]。FasL是Fas抗原TNF家族,兩者結(jié)合可導(dǎo)致細(xì)胞調(diào)亡[10]。免疫研究發(fā)現(xiàn),正常的Fas系統(tǒng)能有效地去除過度激活的免疫活性細(xì)胞,從而下調(diào)免疫反應(yīng)及細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞的功能。如果Fas或其配體FasL出現(xiàn)表達(dá)異常,即可逃避機(jī)體免疫細(xì)胞的攻擊而不斷增殖,最終形成一個(gè)實(shí)體瘤[11]。Das等[12]觀察Fas在宮頸癌中的表達(dá)明顯下調(diào)。杜俊瑤等[13]研究顯示,Fas在正常宮頸、CIN及宮頸癌中表達(dá)差異有顯著性,隨腫瘤的形成有明顯降低的趨勢,并且與宮頸癌細(xì)胞的分化程度有關(guān)。本研究顯示,Fas在正常宮頸的陽性表達(dá)率86.67%,CIN的陽性表達(dá)率53.60%,而在宮頸癌中Fas表達(dá)率為45%。Fas在正常宮頸中表達(dá)顯著高于CIN及宮頸癌組(P＜0.05),CIN與宮頸癌組差異無顯著性(P＞0.05)。提示Fas的異常表達(dá)可能參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。宮頸癌細(xì)胞由于某種原因而降低了Fas的表達(dá),細(xì)胞逃逸了機(jī)體的免疫監(jiān)而難以凋亡,最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移?？梢?Fas是免疫系統(tǒng)自穩(wěn)的重要分子學(xué)基礎(chǔ),增強(qiáng)Fas抗原表達(dá)及活化有望成為腫瘤治療新手段。

總之,宮頸癌的發(fā)生是多基因損傷的復(fù)雜過程,它的發(fā)生、發(fā)展與凋亡相關(guān)基因的異常表達(dá)、癌基因激活、抑癌基因的突變等有關(guān)。Bcl-2及Survivin在宮頸組織中的過表達(dá)及Fas的表達(dá)缺失而導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系,對宮頸癌的診斷預(yù)后具有重要參考價(jià)值。

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