大戟狼毒提取物對(duì)朱砂葉螨生物活性的研究

顧雅靜 ，高寶巖 ，周廣錄 ，許厚博 ，云澤順

（1.寶坻區(qū)王卜莊鎮(zhèn)政府，天津 寶坻 301805；2.天津市農(nóng)業(yè)環(huán)境與資源研究所，天津 300192；3.寶坻區(qū)農(nóng)業(yè)局，天津 寶坻301800）

近30年來(lái),由于大量重復(fù)使用非專一性化學(xué)殺螨劑，加之螨類世代周期短，年發(fā)生代數(shù)多，許多螨類已迅速產(chǎn)生抗藥性，對(duì)作物造成的損失有增無(wú)減。因此，使用選擇性新型殺螨劑成為防治植食性螨類的主要措施。而植物源殺蟲(chóng)劑具有對(duì)害蟲(chóng)作用譜廣，對(duì)天敵干擾少，無(wú)明顯脊椎動(dòng)物毒性和環(huán)境中降解迅速、資源豐富、可再生等優(yōu)點(diǎn)。在對(duì)川楝素等多種植物源殺蟲(chóng)物質(zhì)的研究中發(fā)現(xiàn)，它們對(duì)害蟲(chóng)的作用不同于常規(guī)化學(xué)農(nóng)藥，其作用靶標(biāo)和作用機(jī)理較為特殊，全方位進(jìn)行作用，既抑制神經(jīng)電位的正常傳達(dá)，又干擾體內(nèi)激素平衡，抑制解毒酶系，特別是對(duì)消化系統(tǒng)作用明顯，對(duì)肌肉系統(tǒng)也有毒害作用。植物源殺蟲(chóng)劑以其獨(dú)特的作用方式使害蟲(chóng)不易產(chǎn)生抗藥性。并且殺螨活性物質(zhì)廣泛存在于自然界的多種植物中，完全可以利用植物次生物質(zhì)所表現(xiàn)出來(lái)的綜合優(yōu)勢(shì)，來(lái)彌補(bǔ)目前現(xiàn)有殺螨劑存在的眾多缺陷。因此，從植物源天然產(chǎn)物出發(fā)來(lái)尋找結(jié)構(gòu)物質(zhì)，成為新型殺螨劑研發(fā)的熱點(diǎn)之一。使用植物提取物的粗制品直接防治螨類，或者明確其活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)，化學(xué)模擬合成，對(duì)于殺螨劑的研究開(kāi)發(fā)和植物的綜合利用具有重要的意義。

大戟狼毒Euphorbia fisherianasteud var.komarovina(prokh)Chu 是大戟科（Ruphorbiaceae）大戟屬的一種有毒植物。其殺蟲(chóng)活性成分對(duì)植物害蟲(chóng)有拒食、抑制作用,制成的殺蟲(chóng)劑對(duì)人毒性低,易于自然分解，施用后無(wú)殘留,是一種理想的植物殺蟲(chóng)劑，此種資源豐富且采集時(shí)不會(huì)破壞環(huán)境。為此，用大戟狼毒石油醚提取物和萃取物對(duì)朱砂葉螨卵和成螨的生物活性進(jìn)行了測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試植物大戟狼毒，將其洗凈后在室內(nèi)陰干（約 25℃），放入恒溫箱內(nèi)（40～45℃）鼓風(fēng)機(jī)吹干至材料發(fā)脆。然后磨碎過(guò)60目篩，以供備用。

供 試 朱 砂 葉 螨 （Tetranychus cinnabarinusBoisduval）為室內(nèi)飼養(yǎng)的敏感品系：養(yǎng)蟲(chóng)室的溫度（25±1）℃，相對(duì)濕度（50±10）%，光照（L∶D 為18∶6 h）。

化學(xué)藥品：吐溫80（聚山梨酯），廣東汕頭市西隴工廠生產(chǎn)；石油醚、三氯甲烷和甲醇等均為分析純，北京北化精細(xì)化學(xué)品有限公司生產(chǎn)。

試驗(yàn)儀器：微型植物試樣粉碎機(jī)，黃驊市中興儀器有限公司制造；RE52－98旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠制造；SHB-ⅢA循環(huán)式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；OLYMPUS S251雙目立體顯微鏡。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 冷浸提取法

準(zhǔn)確稱取3份植物干粉，每份50 g，分別裝入500 ml三角瓶?jī)?nèi)，加入干粉5倍量的有機(jī)溶劑石油醚，室溫下(30±2)℃分別浸提3次，每次3～5 d，過(guò)濾，合并3次的提取物，稱重。

1.2.2 萃取分離

稱取大戟狼毒石油醚提取物5 g，用10倍量的石油醚溶解，裝入分液漏斗中，采用液—液分配法萃取。依次用氯仿、甲醇兩種溶劑以1∶1為配比各萃取3次，分別合并萃取液，將這些萃取液減壓濃縮至稠膏狀，稱重。

1.2.3 成螨觸殺測(cè)定

玻片浸漬法：用雙面膠帶將健康活潑、大小一致的雌成螨背部向下粘于載玻片的一端，在溫度為 (25±1)℃，RH85%左右的生化培養(yǎng)箱中放置4 h后，鏡檢剔除死亡或受傷個(gè)體，保證每玻片葉螨數(shù)為30頭，在藥液中浸5 s取出，用吸水紙吸掉多余的藥液，處理后置于生化培養(yǎng)箱中，于24 h后觀察其死亡情況，接觸動(dòng)者為活，不動(dòng)者為死，按abbott公式計(jì)算校正死亡率。

1.2.4 卵毒力測(cè)定

參考FAO推薦的葉片殘毒法 （Leaf-residue method）并加以改進(jìn)，采集新鮮的蘋(píng)果葉片，葉柄截去0.5 cm，并在葉柄上包上濕棉球，放在水培養(yǎng)臺(tái)上，每片葉片接雌成螨20頭，置于(25±1)℃下任其產(chǎn)卵24 h，去除雌成螨，檢查記錄卵粒數(shù)后，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中，當(dāng)卵齡達(dá)到36～48 h進(jìn)行測(cè)定，將帶卵的葉片浸入各處理藥液5 s，然后放在吸水紙上陰干，放回水培養(yǎng)臺(tái)上，待對(duì)照組卵孵化并發(fā)育至若螨階段，檢查統(tǒng)計(jì)各處理死亡率。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析方法

將所得數(shù)據(jù)用Finney機(jī)率分析法求出毒力回歸式，并對(duì)該方程式進(jìn)行卡方適合性檢驗(yàn)。當(dāng)回歸式符合實(shí)際情況后，求出LC50，以及LC50的95%置信限。

2 結(jié)果與分析

2.1 最佳提取物的確定

由表1結(jié)果顯示，大戟狼毒石油醚提取物對(duì)朱砂葉螨成螨的活性最高，24 h后死亡率和校正死亡率分別為56.78%和53.73%。氯仿和甲醇提取物對(duì)朱砂葉螨成螨的生物活性相對(duì)較低，死亡率僅達(dá)到15.61%和14.64%。

2.2 最佳萃取物的確定

將大戟狼毒石油醚提取物和萃取物分別稀釋成5個(gè)不同的濃度 （1,0.5,0.25,0.125,0.062 5 mg/ml）,對(duì)朱砂葉螨進(jìn)行生測(cè)，分別求出毒力回歸方程及致死中量（LC50）。從表2結(jié)果我們可以看出，大戟狼毒石油醚提取物對(duì)卵的生物活性較好，LC50達(dá)到0.170 9 mg/ml，而成螨對(duì)大戟狼毒石油醚萃取物較敏感，LC50為0.673 6 mg/ml。

3 討論

表1 大戟狼毒提取物對(duì)朱砂葉螨成螨的生物活性

表2 大戟狼毒石油醚提取物對(duì)朱砂葉螨的生物活性

目前，大戟狼毒在醫(yī)藥方面研究比較多。狼毒大戟為大戟科狼毒大戟的干燥根,為中藥狼毒的來(lái)源之一,臨床用于治療腫瘤、結(jié)核病和皮膚病等。并且大戟狼毒在《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載有殺蟲(chóng)功能。因此，本文對(duì)它的殺螨活性進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用大戟狼毒石油醚提取物和萃取物對(duì)成螨處理后，整個(gè)身體腫脹，體表光滑；卵殼被破壞，呈膠狀。而且不同蟲(chóng)態(tài)對(duì)藥劑的敏感程度不同，這可能與螨不同蟲(chóng)態(tài)身體內(nèi)分泌或誘導(dǎo)不同的物質(zhì)有關(guān)，需進(jìn)一步研究螨不同蟲(chóng)態(tài)的生物學(xué)特性以及藥劑對(duì)它的作用方式和生化機(jī)理。

狼毒大戟內(nèi)含乙?；奖贝肌⒃磉?、強(qiáng)心甙等生物堿、酚類、甾醇、樹(shù)脂硬性橡膠等物質(zhì)，具有很強(qiáng)的殺蟲(chóng)滅鼠功效。其中狼毒大戟內(nèi)的狼毒素、狼毒堿等具有殺蟲(chóng)活性。徐德昌等人用大戟狼毒根乙醇提取物,制成0.3%大戟狼毒水劑。用0.3%大戟狼毒水劑原液和100倍液對(duì)甘藍(lán)夜盜(BarathrabrassicaeL.)進(jìn)行室內(nèi)殺蟲(chóng)試驗(yàn),殺蟲(chóng)率分別為100%、80%。用0.3%大戟狼毒水劑500～650倍液防治蔬菜桃蚜 (MyruspersicaeS.),效果為90%～97%。利用大戟狼毒浸提殘?jiān)鼘?duì)蠐螬[東北大黑鰓金龜幼蟲(chóng)(HolotrichiadiomphaliaBates)]進(jìn)行室內(nèi)喂養(yǎng)殺蟲(chóng)試驗(yàn),殺蟲(chóng)率為100%。到目前為止，大戟狼毒的化學(xué)成分分離還處于研究階段，藥劑對(duì)朱砂葉螨活性物質(zhì)是否與以上昆蟲(chóng)的相同，還需進(jìn)一步的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定。

大戟狼毒是多年生草本植物，生長(zhǎng)在向陽(yáng)山坡，主產(chǎn)地為東北、華北。此植物有廣大的生長(zhǎng)面積，資源充足，而且開(kāi)發(fā)不會(huì)破壞環(huán)境。因此，在植物性殺螨劑的研究開(kāi)發(fā)方面有巨大的潛力。

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