G-6608復(fù)方噴霧中氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定含量測(cè)定及穩(wěn)定性研究

魏 麗，高永良，郝存江*

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所，北京 100850)

G-6608復(fù)方噴霧中的主要成分為氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定,主要用于鎮(zhèn)痛消炎，既可治療口腔炎癥，亦可外用于一般割傷、擦傷等。采用高效液相法分別測(cè)定兩組分含量的文獻(xiàn)報(bào)道較多[1-3]，但尚未有同時(shí)測(cè)定兩藥含量的報(bào)道。為此筆者建立同時(shí)測(cè)定氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定的高效液相方法，并考察其穩(wěn)定性，為該制劑進(jìn)一步研發(fā)和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

安捷倫1100高效液相色譜儀；pH計(jì)(pHS-3B)；BT124S萬(wàn)分之一電子分析天平(Sartorius)；BP211D十萬(wàn)分之一電子分析天平(Sartorius)。 氫溴酸高烏甲素原料藥，批號(hào)：20090201L(陜西大河藥業(yè)有限責(zé)任公司)；醋酸氯己定原料藥，批號(hào):081202(錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司)；G-6608復(fù)方噴霧劑(本室自行研制)；乙腈：色譜純(SK Chemicals)；磷酸二氫鉀：分析純(北京化學(xué)試劑公司)；三乙胺：分析純(北京化學(xué)試劑公司)；水：SCD-Ⅱ高純水裝置制得。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm)；流動(dòng)相：乙腈-0.025 mol/L KH2PO4(33∶67)，加0.3%三乙胺并調(diào)pH至3.0；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：252 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取氫溴酸高烏甲素標(biāo)準(zhǔn)品20 mg,醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)品10 mg同時(shí)置于100 mL容量瓶中，流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，流動(dòng)相稀釋定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取G-6608復(fù)方噴霧1.0 mL，置于50 mL容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。再量取1 mL稀釋液置10 mL容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻,0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按處方比例制成不含氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定的陰性制劑,按“2.2.2”項(xiàng)下制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性 將“2.2”配置的對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，分別精密吸取20 μL進(jìn)樣。結(jié)果表明，陰性對(duì)照無(wú)干擾，色譜圖見圖1。

A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照

2.4 破壞試驗(yàn) 將氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定置于0.1 mol/mL鹽酸、0.01 mol/mL氫氧化鈉、3%雙氧水、(450 0±500)Lx光照和100 ℃高溫條件下加速破壞,于不同時(shí)間取樣測(cè)定，記錄色譜峰?？疾旆纸猱a(chǎn)物對(duì)主藥測(cè)定的干擾情況，見圖2。

A.酸破壞;B.堿破壞;C.氧化破壞;D.高溫破壞;E.光照破壞1.氫溴酸高烏甲素；2.醋酸氯己定

結(jié)果顯示，本方法能有效檢出各破壞試驗(yàn)產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，且降解產(chǎn)物峰與兩主藥峰均能達(dá)到良好分離，故本色譜條件能夠滿足有關(guān)物質(zhì)考察的要求。

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品貯備液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析,記錄峰面積。以濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定的回歸方程分別為：Y=15.35X+3.416(r=0.999 96，n=3)、Y=47.19X+2.368(r=0.999 91，n=3)。結(jié)果顯示，二者檢測(cè)濃度的線性范圍分別為5～100 μg/mL、2.5～50 μg/mL。

2.6 精密度試驗(yàn) 制備20 μg/mL氫溴酸高烏甲素和10 μg/mL醋酸氯己定的混合對(duì)照品溶液按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣20 μL,重復(fù)6次，記錄色譜峰面積，求得峰面積氫溴酸高烏甲素 RSD為0.31%、醋酸氯己定RSD為0.29%，表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察 配制高、中、低3個(gè)濃度的氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定混合溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8 h，進(jìn)樣分析，以峰面積計(jì)算RSD值。結(jié)果,RSD均小于2%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn) 按處方比例的80%、100%、120%精密稱取氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定對(duì)照品，按處方比例加入輔料，按“2.2.2”項(xiàng)進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算加樣回收率,結(jié)果見表1。

2.9 最低檢測(cè)限考察 根據(jù)信噪比為3∶1時(shí)相應(yīng)的濃度為最低檢測(cè)濃度，本方法氫溴酸高烏甲素、醋酸氯己定的最低檢測(cè)限分別為0.006 ng、0.002 ng。

2.10 含量測(cè)定 取G-6608復(fù)方噴霧劑3批，按“2.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液，測(cè)定其含量，結(jié)果見表2。

2.11 每噴主藥含量的測(cè)定 本品為定量噴霧劑，依據(jù)藥典要求檢查每噴主藥含量。取G-6608復(fù)方噴霧劑3批，按噴霧劑每噴主藥含量測(cè)定法[4]測(cè)定，以水為吸收溶劑，將撳壓10次的溶液按“2.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液,進(jìn)樣20 μL，計(jì)算每噴主藥含量，結(jié)果見表2。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

表2 樣品含量和每噴主藥含量測(cè)定結(jié)果

2.12 穩(wěn)定性研究 取同一批次(批號(hào)：20100301)G-6608復(fù)方噴霧劑，置于光照(450 0±500)Lx，高溫60 ℃條件下，于第5、10天取樣，以外觀性狀、pH值、含量和有關(guān)物質(zhì)為指標(biāo)，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果見表3。從數(shù)據(jù)可知，除光照條件不穩(wěn)定外,其他各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，提示在生產(chǎn)及運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)避光保存，其他試驗(yàn)結(jié)果表明本品穩(wěn)定性較好。

表3 G-6608復(fù)方噴霧穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 紫外光譜掃描結(jié)果表明，氫溴酸高烏甲素、醋酸氯己定的最大吸收波長(zhǎng)分別為252 nm、260 nm，考慮同濃度下醋酸氯己定的吸收值約為氫溴酸高烏甲素3倍,氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定在制劑中的含量比為2∶1，因此選擇252 nm作為該制劑含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 在堿破壞試驗(yàn)中，在0.01 mol/mL氫氧化鈉中室溫放置2 h醋酸氯己定幾乎完全降解，說(shuō)明醋酸氯己定在堿性環(huán)境中極不穩(wěn)定。

[1]李軍,徐本明,郎躍武,等.HPLC法測(cè)定注射用氫溴酸高烏甲素的含量及其他生物堿[J].齊魯藥事,2006,26(10):1497-1499.

[2]劉秀花,史彥斌,管玉珠.氫溴酸高烏甲素原料藥的穩(wěn)定性研究[J].藥物研究,2009,18(8):21-22.

[3]賈立華,潘強(qiáng),高永良,等.復(fù)方醋酸氯己定洗液的制備及臨床療效[J].中國(guó)新藥雜志,2004,13(12):1347-1349.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:附錄13.