小鼠高尿酸血癥模型的建立及小春花的干預作用

林宇星 阮君山 傅慧玲 周 歡 王少明 莊 捷

1.福建醫(yī)科大學省立臨床學院，福建 福州 350001;2.福建省立醫(yī)院，福建 福州 350001

健康人的血清尿酸值一般為男性238－357umol/L，女性178－297umol/L，但由于飲食結構和生活習慣的變化，如攝入高嘌呤的食物，勞累及劇烈運動等也會有一過性的上升。因此通常1～2周內測定2～3次，男性若持續(xù)超過380umol/L，女性持續(xù)超過300umol/L，就可稱為高尿酸血癥［1］。

以往人們對嘌呤代謝產物的作用和意義認識較少，HU在我國一直被當作少見病。近年來由于人們生活水平的提高、飲食結構的變化，HU和痛風的發(fā)病率逐年提高。流行病學研究表明，痛風的發(fā)病率在不斷上升，導致了經濟負擔的不斷加重［2－4］。高尿酸血癥 (HU，hyperuricemia)是痛風發(fā)展的一個關鍵性因素，而且與腎功能不全、心血管疾病、高血壓、高脂血癥、腫瘤、糖尿病腫瘤與衰老、糖尿病、器官移植以及代謝綜合癥的發(fā)生相關［5－9］。血尿酸產生過多、腎臟尿酸排泄障礙或者這兩個因素的綜合作用導致高尿酸血癥的發(fā)生。建立適合的HU模型，對人們無論研究嘌呤代謝產物的檢測方法，還是研究與嘌呤代謝有關的其他各種疾病，都具有重要的意義。

小春花系陰地蕨科植物陰地蕨 Sceptridium ternatum(Thunb1)Lyon的民間習稱，主產地為福建。性甘平、味淡，具有清肝、肺火、明目、解熱祛風的功效［10］。臨床上可用于高尿酸血癥及痛風的治療。我們前期的研究表明其具有解熱、抗炎、免疫調節(jié)和抗腫瘤等活性［11－14］。我們利用建立的模型觀察小春花的干預作用，以檢驗模型是否成功。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性昆明小鼠100只，體重17.5～31.0克，由福建省立醫(yī)院實驗動物中心提供。

1.2 主要儀器 代謝籠:蘇州實驗動物器械廠;離心機:貝克曼高速離心機;電子天平:上海精密化學儀器有限公司;全自動生化儀:日立儀器 (蘇州)有限公司。

1.3 主要藥物 鹽酸乙胺丁醇片購自沈陽紅旗制藥有限公司 (國藥準字H21022349)，腺嘌呤購自國藥集團化學試劑有限公司。小春花浸膏，濃度為1g生藥/ml，福建省立醫(yī)院制劑室提供。

1.4 檢測用試劑 尿素氮 (BUN)試劑盒、肌肝 (cr)試劑盒、尿酸 (UA)試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.5 模型建立方法 將50只小鼠隨機分成5組，每組10只，設立給藥組4個劑量組和空白對照組，稱重分別給予不同劑量的腺嘌呤和乙胺丁醇 (A組，腺嘌呤25mg/kg，乙胺丁醇 50mg/kg;B組，腺嘌呤35mg/kg，乙胺丁醇75mg/kg;C組，腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg;D組，腺嘌呤100mg/kg，乙胺丁醇200mg/kg)。藥物用蒸餾水配制成混懸液，按0.1ml/10g體重，分別按上述劑量灌胃，連續(xù)15天?？瞻捉M給予同體積的生理鹽水。實驗第16天，各組小鼠斷頭取血，分離血清按試劑盒說明測定尿素氮、肌及尿酸的含量。

1.6 藥物干預 造模方法同上，另取40只小鼠，分為小春花組高低劑量 (3g、1.5g生藥·kg－1體重)，模型組，正常組，每組10只動物，除正常組外按前述篩選的模型方法造模，于實驗第7天給予不同濃度的小春花浸膏，實驗第16天小鼠斷頭處死，取血，分離血清按試劑盒說明測定測定尿素氮、肌及尿酸的含量。

1.7 統(tǒng)計學分析 采用SPSS10.0分析軟件，進行 t檢驗，分析各組的差異。

2 實驗結果

2.1 高尿酸血癥動物模型的建立

A、B組老鼠造模后，血清中BUN和CREA和正常組比較，顯著上升 (p＜0.01)，而UA沒有差異。C、D組的UA和正常組相比有顯著的升高 (p＜0.01)，同時D組的BUN、CREA的濃度顯著上升，提示腎臟損傷，而C組的BUN、CREA與正常組相比沒有差異。故選用C組的劑量及腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg作為HU的造模方法。

2.2 小春花的干預作用

選用腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg這個劑量造模后，實驗第7日給予不同劑量的小春花，實驗第16天取血測定BUN、CRE、UA的變化。結果表明，小春花能有效的降低血中UA的含量 (P＜0.01)，保護小鼠的腎功能 (P＜0.01)。結果見表2.

表1 各組血BUN、CRE、UA值比較

表2 小春花對高尿酸血癥小鼠的干預作用

3 討論

高尿酸血癥是由血UA濃度過高引起的代謝性疾病。成人不論男女，UA的正常值為90－420umol/L(尿酸酶－過氧化物偶聯法)，超過此范圍即為高尿酸血癥。無癥狀性高尿酸血癥是痛風發(fā)生的前期狀態(tài)。由于UA的水溶性較差，血UA過高會形成結晶，沉積于關節(jié)、腎臟等處，引起關節(jié)炎和腎臟損害。并且與高血壓、高脂血癥、冠心病、腦卒中、糖尿病的發(fā)生密切相關［15－18］。

近年來，由于人們飲食習慣的改變，痛風和HU的發(fā)病率，在全世界范圍內都呈上升趨勢，同時其導致的心腦血管并發(fā)癥，亦嚴重影響人們的生活質量。

動物模型是研究疾病發(fā)病機理，尋找新型治療藥物的重要工具。開展關于HU和痛風的研究，也應首先建立起可靠的HU動物模型?，F有的建模方法，主要從以下幾個方面達到升高血尿酸的目的:(1)抑制尿酸酶的活性;(2)抑制腎臟排泄尿酸;(3)補充尿酸的前體物質;(4)直接補充外源性尿酸。

最理想的動物模型是尿酸酶基因敲除小鼠，這種方法是通過破壞胚胎干細胞的尿酸酶基因，由于尿酸酶基因完全缺失，此動物模型的血UA濃度可升高十倍引起HU。目前兩種方法可以減弱或消除尿酸酶的作用。但是這種模型方法技術較為復雜，成本也較高，這限制了它的廣泛使用。且此種小鼠一般不能成活4周以上［19－21］。

另外常見的方法是將尿酸酶抑制劑乙胺丁醇與腺嘌呤合用于大鼠的高尿酸血癥模型。但這種模型容易導致大鼠出現腎小球肥大、和硬化、甚至纖維化，與臨床實際有出入［15，22］。

本實驗采用腺嘌呤 (Adenine)、乙胺丁醇灌喂小鼠誘導高尿酸血癥動物模型，根據參考文獻［28、29］造模方法及預實驗結果，配置四個濃度的腺嘌呤跟乙胺丁醇，分別為25mg/kg(50mg/mg)、 35mg/kg(75mg/kg)、 50mg/kg(100mg/kg)、100mg/kg(200mg/kg)，灌胃造模。根據實驗結果選取腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg這個劑量造模實驗結果及小春花的干預實驗結果表明小鼠UA升高明顯，且腎功能的損害較小，模型可靠穩(wěn)定。

小春花是福建民間常用的草藥，具有清熱解毒的作用。臨床上可以用于高尿酸血癥及痛風的治療。實驗結果表明，小春花能降低模型小鼠的血尿酸值。但其作用機制如何，有待于進一步的研究。

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