SLE、RA、pSS患者血清高遷移率族蛋白B1的表達(dá)變化及意義

蔣 莉,張 晶,張曉莉,王曉非

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院,沈陽(yáng) 110004)

人高遷移率族蛋白(HMG)B1是一種普遍存在的、在進(jìn)化過程中高度保守的染色質(zhì)蛋白,參與DNA復(fù)制、修復(fù)以及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等重要生命活動(dòng)。近年有研究[1]發(fā)現(xiàn),HMGB1是一種新型晚期炎癥介質(zhì),多種細(xì)胞因子如IL-1、TNF-α等可刺激樹突細(xì)胞釋放HMGB1,并成為炎癥性疾病的內(nèi)源性誘導(dǎo)劑。HMGB1由細(xì)胞核主動(dòng)分泌至細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外,細(xì)胞外HMGB1可與多種細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合,啟動(dòng)和維持“瀑布式”炎癥反應(yīng)[2],因其較 TNF-α、IL-1β等早期釋放的炎性因子產(chǎn)生遲且高水平釋放時(shí)間久,國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)界將HMGB1稱為“晚期”炎性介質(zhì)。2009年 12月 1日 ～2010年 5月 1日,我們檢測(cè)了系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)及原發(fā)性干燥綜合征(pSS)患者血清中的HMGB1,觀察其水平變化,并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 按1982年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)制定的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn),選擇SLE患者30例,其中男1例、女29例,年齡 25～55歲,病情活動(dòng)期 13例、穩(wěn)定期 17例,出現(xiàn)腎臟損傷改變 15例,排除其他疾病導(dǎo)致的腎損傷,無其他免疫系統(tǒng)疾病。按照 1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn),選擇RA患者30例,男4例、女 26例,年齡 22～60歲,活動(dòng)期 18例、非活動(dòng)期12例。按照2002年修訂的pSS國(guó)際分類標(biāo)準(zhǔn),選擇pSS患者25例,男 1例、女24例,年齡 25～60歲。選擇正常對(duì)照者 30例,均為體檢健康者,男 4例、女 26例,年齡 20～58歲。各組在年齡、性別構(gòu)成上均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。入組者均未合并腫瘤和感染性疾病。

1.2 血清HMGB1檢測(cè)方法 采清晨空腹靜脈血3 ml,離心后取上清,置 PC管中-20℃保存,同批檢測(cè)。HMGB1測(cè)定采用ELISA法,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。酶標(biāo)儀 450 nm處測(cè)光密度值(OD值),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算HMGB1濃度。同時(shí)測(cè)定抗雙鏈DNA抗體(抗ds-DNA抗體)、血沉、C反應(yīng)蛋白(CRP)、血清蛋白電泳(r-G);進(jìn)行尿常規(guī)檢查,測(cè)尿微量白蛋白(尿MA)、24 h尿蛋白定量等。計(jì)算SLE患者SLEDAI評(píng)分,并以SLEDAI評(píng)分 ＞10分作為評(píng)價(jià)病情活動(dòng)的標(biāo)準(zhǔn),以尿常規(guī)出現(xiàn)管型尿或血尿(尿RBC＞5個(gè)/HP)或蛋白尿(尿蛋白定量＞0.5 g/24 h)為腎損傷判定標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算RA患者DAS28評(píng)分(≥3.2分為RA活動(dòng)期、＜3.2分為RA穩(wěn)定期)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。血清HMGB1組間比較用t檢驗(yàn),HMGB1水平與其他指標(biāo)之間的關(guān)系分析采用直線相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組HMGB1水平比較 SLE患者血清HMGB1為(13.93±2.66)μg/L,RA患者為(13.66 ±1.27)μg/L,pSS患者為(13.81±3.21)μg/L,對(duì)照組為(11.96±1.94)μg/L,前三者與對(duì)照組相比, P均＜0.05?；顒?dòng)期SLE患者HMGB1為(15.04 ±3.12)μg/L,與對(duì)照組和穩(wěn)定期SLE者的(12.84 ±1.53)μg/L相比,P均＜0.001;SLE腎臟損傷患者血清HMGB1為(14.93±2.93)μg/L,與非腎臟損傷患者的(12.62±1.52)μg/L相比,P＜0.05。活動(dòng)期RA患者血清HMGB1為(14.04±1.05)μg/L,與對(duì)照組及非活動(dòng)期RA患者的(13.08±0.93) μg/L相比,P均＜0.01。

2.2 SLE、RA、pSS患者血清HMGB1水平與相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)性 SLE患者血清HMGB1水平與尿MA、SLEDAI評(píng)分、dsDNA呈正相關(guān)(r分別為0.425、0.473、0.366,P均＜0.05)。RA患者血清HMGB1水平與CRP、血沉呈正相關(guān)(r分別為0.502、0.486,P均＜0.01)。pSS患者血清HMGB1水平與血沉、免疫球蛋白、r-G、CRP無明顯相關(guān)性。

3 討論

HMG分為三類：HMGB1,HMGB2,HMGB3。其中HMGB1是含量最豐富的HMG,其含有2個(gè)結(jié)合DNA的結(jié)構(gòu)域(Abox和Bbox)。Bbox是引起炎癥反應(yīng)的功能結(jié)構(gòu)域,能模擬刺激單核巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞分泌TNF-α等致炎細(xì)胞因子,而Abox又對(duì)Bbox有一定的拮抗作用[3]。HMGB1分布十分廣泛,如淋巴組織、腦、肝、肺、心臟、脾、腎中均有表達(dá)。在細(xì)胞外,HMGB1發(fā)揮著強(qiáng)大的致炎作用。細(xì)胞外HMGB1的來源主要有兩種途徑：一種是在致炎因子的刺激下 ,由單核巨噬細(xì)胞及垂體細(xì)胞分泌,可介導(dǎo)局部甚至全身性的炎癥反應(yīng);另外一種是細(xì)胞壞死或損傷時(shí)釋放 HMGB1至胞外。胞外HMGB1可與多種細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合,啟動(dòng)和維持“瀑布式”炎癥反應(yīng)[2]。

SLE以多種病理性自身抗體的產(chǎn)生、免疫復(fù)合物沉積及多系統(tǒng)損害為特征,其中以腎臟受累最為常見。已有研究[4]表明,樹突狀細(xì)胞(DC)是HMGB1促進(jìn)T細(xì)胞分化的重要橋梁。HMGB1是DC成熟、遷徙和輔助性 T細(xì)胞極化過程中一個(gè)內(nèi)源性信號(hào)因子,而DC不僅能捕獲和提呈抗原、激活B和 T淋巴細(xì)胞 ,還能主導(dǎo) T細(xì)胞的極化 ,啟動(dòng)和調(diào)控免疫系統(tǒng)。HMGB1可能通過上述機(jī)制參與SLF的發(fā)病。本研究結(jié)果顯示,SLE患者血清HMGB1水平與尿MA、ds-DNA、SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)。而抗dsDNA抗體能夠誘導(dǎo)腎小球免疫復(fù)合物的沉積并導(dǎo)致腎損害的發(fā)生,是狼瘡腎炎的危險(xiǎn)因素,一定程度上反應(yīng)了疾病的活動(dòng)性,且對(duì)腎損害的確定有意義。當(dāng)腎小球?yàn)V過膜輕度損傷時(shí),即出現(xiàn)尿MA升高,可見HMGB1可在一定程度上反應(yīng)SLE的活動(dòng)性,可以作為間接反應(yīng)腎臟損傷的一個(gè)敏感性較高的指標(biāo)。

RA是以滑膜炎和關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)破壞為特征的炎癥性自身免疫性疾病,病理組織學(xué)上出現(xiàn)炎癥細(xì)胞滲出、滑膜增生、血管翳形成。目前認(rèn)為,炎癥因子中TNF-α和IL-1β和該疾病密切相關(guān)。在體外,TNF-α能刺激單核巨嗜細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放HMGB1,反之,HMGB1也能刺激這些細(xì)胞釋放TNF-α、IL-1β等炎癥介質(zhì),由此形成一個(gè)炎癥反應(yīng),并維持慢性炎癥過程。Tanigu等[5]在RA患者滑膜液中可檢測(cè)到很高水平的HMGB1,并且用HMGB1可刺激滑膜液巨噬細(xì)胞RAGE表達(dá)和TNF-α、IL-1β、IL-6分泌,導(dǎo)致疾病發(fā)生。本研究結(jié)果顯示,RA患者血清HMGB1水平高于對(duì)照組,活動(dòng)期RA患者HMGB1水平高于非活動(dòng)期患者,并與反映RA炎癥程度和病情活動(dòng)的重要指標(biāo)血沉、CRP呈正相關(guān)。提示HMGB1參與RA發(fā)展過程,并與疾病活動(dòng)性相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示,pSS患者血清HMGB1水平高于對(duì)照組,但與血沉、免疫球蛋白、r-G、CRP等其他指標(biāo)無明顯相關(guān)。Ek等[6]研究了HMGB1在腮腺組織中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn) 3組腮腺組織中的腺泡上皮細(xì)胞都能表達(dá)HMGB1?？紤]血清HMGB1可能和TNF-α和IL-1等細(xì)胞因子形成一個(gè)炎癥反應(yīng)體系,參與了pSS的發(fā)病。

綜上所述,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,HMGB1可能參與SLE、RA、pSS的發(fā)病過程,與SLE造成腎臟損傷有關(guān),在一定程度上反映疾病活動(dòng)性。

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