β2-興奮劑類藥物殘留檢測的研究進展

趙曉鳳，徐雪華，萬宇平 ，李 靜

（1.新疆獸藥飼料監(jiān)察所，新疆 烏魯木齊 830000；2.烏魯木齊市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，新疆 烏魯木齊 830000；3.北京勤邦生物技術(shù)有限公司，北京 102206）

β2-興奮劑類藥物（β2-腎上腺素受體激動藥，BAA）是一類與腎上腺素受體結(jié)合，激動受體，產(chǎn)生腎上腺素樣作用的藥物的總稱，又可稱為擬交感胺類藥物，基本化學結(jié)構(gòu)為β-苯乙胺，一般可分為苯胺型（如克倫特羅，CL）、苯酚型（如沙丁胺醇，SAL）、苯二酚型（如特布他林）等3大類。由于β2-興奮劑類藥物具有降低脂肪含量，提高瘦肉率的作用，所以許多生產(chǎn)者就采用BAA作為飼料添加劑來提高瘦肉率和改善胴體品質(zhì)。后來發(fā)現(xiàn)BAA對人體有潛在的危害，現(xiàn)已被世界各國列為禁止用于食品動物的化學物質(zhì)。因此，研究BAA殘留對人類健康有著積極的意義。

1 檢測方法

目前對BAA類藥物殘留檢測的方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、氣/質(zhì)聯(lián)用分析法（GC/MS）、放射免疫分析法（IA）、氣相色譜法（GC）、高效薄層色譜法（HPTLC）、液/質(zhì)聯(lián)用分析法（LC/MS）、酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）和放射受體分析法等。

1.1 高效液相色譜法（HPLC） HPLC是具有高效分離和檢測能力的方法，我國將其作為檢測瘦肉精的半確證性方法，其最低檢測限為0.05μg/kg，優(yōu)點是精確度高，假陽性率低，缺點是檢測過程煩瑣，時間長，價格高，操作難度較大且只能用于單樣本檢驗。趙榕等運用反相高效液相色譜法測定豬肝中的鹽酸克倫特羅，在243 nm檢驗波長下，用Waters-alliance高效液相色譜系統(tǒng)進行檢測，流動相為甲醇和0.01mol/L磷酸二氫鈉（35∶65），最后根據(jù)保留時間定性，掃描光譜進一步確證，通過對試樣峰高或峰面積與標準峰高或峰面積進行比較定量，得出最低檢出濃度為0.25mg/kg，濃度在0.1～2.0μg/mL具有很好的線性關(guān)系，回收率達（101.2±9.75）%。

1.2 氣/質(zhì)聯(lián)用分析法 （GC/MS） 氣/質(zhì)聯(lián)用分析法（GC/MS）比HPLC靈敏度更高，假陽性率更低，在我國為確證性方法，其優(yōu)點是可以對多種殘留物進行定性、定量分析，但要求樣品有較低的沸點且具有熱穩(wěn)定性。而沙丁胺醇由于極性大、沸點高，不適宜直接用這種方法分析，往往需要衍生化后再作進一步檢驗。苗虹等人選用BSTFA-甲苯作衍生物，以弱極性或非極性的毛細管柱為氣相色譜柱，得出此法的檢測限為0.5g/kg，回收率為75.5%。

1.3 放射免疫分析法（IA） 放射免疫分析法（IA）的主要作用機理是對鹽酸克倫特羅殘留進行放射性免疫分析，用氚標抗原來測定抗體。但由于其分子量不大，不能成為抗原，故首先要把它與其他載體結(jié)合成半抗原再行檢測。這種方法靈敏度要比ELISA高，但由于實驗條件要求較高，目前不能廣泛應(yīng)用，相關(guān)的報道也不多。用此技術(shù)檢測尿、肝中的瘦肉精殘留量，其檢測靈敏度尿樣為0.13mg/mL，肝臟為0.461g/kg。Normand Braulieu等（1985）首次用SAL-BSA作連接物免疫家兔，獲得了抗SAL多克隆抗體，用C14標記琥珀酸酐，建立了檢測SAL的放射免疫分析方法。Adam等（1990）用SAL-BSA連接物免疫小鼠，首次制備了抗SAL單克隆抗體，并用此單抗進行了SAL殘留的放射免疫分析。Delahaut等利用SAL抗血清研究出了可以進行多種BAA類藥物檢測的RIA試劑盒，該試劑盒和CL的交叉反應(yīng)是118%，檢測限達1～4μg/kg。

1.4 酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA） Bucknall等（1993）用CL-OA偶聯(lián)物免疫家兔獲得了抗CL多克隆抗體，并建立了CL的競爭ELISA檢測法，用于檢測牛肝中的CL殘留。其他研究者還分別用牛血清蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）連接CL免疫兔、羊獲得多克隆抗體，建立了ELISA、RIA等免疫檢測方法。Petruzzelli等（1996）用CL－BSA連接物作免疫原免疫Balb/c小鼠，用雜交瘤技術(shù)首次獲得CL的單克隆抗體，建立了檢測CL的競爭ELISA法，并對馬尿和人尿進行了分析，其靈敏度達1 μg/L。近幾年國內(nèi)對CL、SAL殘留檢測的報道逐漸增多，多名研究者都建立了酶免疫分析方法用于檢測動物組織、飼料中的CL和SAL。王建平等在國內(nèi)首次采用SAL-BSA免疫家兔制備SAL多克隆抗體，建立了檢測豬肝與豬尿中SAL與CL的ELISA法，得出檢測限為0.48μg/kg。

1.5 其他方法 除了以上提到的快速篩選方法和確證檢測方法外，還有其他用于檢測BAA殘留的分析方法。湯曉勤等（2004）建立了一種單極掃描極譜法來檢測豬肉中的CL，其檢測限為1.2 μg/kg，此方法無需昂貴的儀器，適于基層實驗室使用。胥傳來等（2005）曾報道采用間接競爭化學發(fā)光法檢測豬肉中的CL，檢出限可達0.01μg/L，檢測范圍為0.04～25.8μg/L。段建平等（2005）建立了一種可同時檢測飼料中SAL、CL和西馬特羅的毛細管區(qū)帶電泳法，檢測限達20μg/kg，該方法可直接用于對飼料樣品的檢測。戴華等（2003）建立了一種HPLC法用于檢測飼料中的SAL和CL，使用二極管陣列檢測器檢測，檢測限分別為0.36 μg/g和0.1 μg/g。張素霞（2005）曾報道了一種檢測豬飼料中RAC的HPLC法，用熒光檢測器檢測，檢測限達0.48 μg/g。近幾年，國內(nèi)有多名研究者都建立了儀器分析方法用于對此類藥物的殘留檢測。

2 分析比較

目前，國內(nèi)外的食品安全事件之所以接連發(fā)生，除了有關(guān)食品質(zhì)量安全的法律法規(guī)不健全之外，食品檢測技術(shù)不過關(guān)、檢測儀器使用不方便也是很重要的原因。因此為保護人類健康，進行有效的監(jiān)管，盡快建立一種實用、快捷、準確可靠的檢測技術(shù)至關(guān)重要。

由于各種檢測方法都存在自身的優(yōu)點和缺點，故對各類檢測方法要進行合理運用。對于BAA類藥物殘留檢測來說，雖然高效液相色譜法、GC/MS法等具有精確可靠、靈敏度高、重復性好以及假陽性少等優(yōu)點，但需要昂貴的儀器設(shè)備，而且要選擇出合理的前處理條件和色譜條件，單位時間內(nèi)能處理樣品的能力有限。酶聯(lián)免疫測定法適合于對藥物殘留的初步篩選，它能在短短的幾個小時內(nèi)檢測幾十上百個試樣，屬于快速檢測方法。它不需要復雜的儀器設(shè)備，而且由于抗體對抗原有高度的特異性，因此檢測靈敏度較高；同時由于抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的條件比較簡單，所以樣品前處理可以簡化，使得整體操作簡單；通過酶顯色，用酶標儀直接讀數(shù)判定結(jié)果，速度快，檢測成本低，非常適合在基層檢測部門應(yīng)用。

近幾年國內(nèi)對BAA類藥物殘留的免疫法檢測報道逐漸增多，但大多是針對CL，雖然也制備出SAL單克隆抗體，但對SAL的免疫研究和殘留檢測還處于起步階段。因此，盡快建立一套完整的BAA類藥物殘留檢測方法，對于進一步健全和完善我國食品安全保障體系，維護社會穩(wěn)定，促進經(jīng)濟發(fā)展和國際貿(mào)易市場競爭力具有十分重要的理論意義和現(xiàn)實意義。

[1]戴 華，袁智能，黃志強.飼料中鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇高效液相色譜測定[J].分析測試學報，2003，22（3）：57-60.

[2]Shen S H，Jin O Y，Willy R G B.Determination of β2-agonists by ion chromatography with direct conductivity detection[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2005，38：166-172.

[3]Zhou T S，Hu Q，Yu H.Separation and determination of β-agonists in serum by capillary zone electrophoresis with amperometric detection[J].Analytica Chimica Acta，2001，441：23-28.

[4]李俊鎖.獸藥殘留分析[M].上海：上?？萍汲霭嫔?，2002.

[5]陳繼明，黃士新，周光宏，等.酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測克倫特羅[J].中國獸藥雜志，1999，33（2）：19-22.

[6]苗 麗，唐桂芬.供港活豬尿樣中β-興奮劑的檢測[J].中國獸醫(yī)雜志，2001，37（7）：38-39.

[7]袁依盛，趙飛浪.免疫法制備色譜樣品的研究——血清中沙丁胺醇的分析[J].金陵醫(yī)院學報，1996，9（4）：310-312.

[8]邱陽生，楊根海，何方洋，等.沙丁胺醇單克隆抗體的制備及其鑒定[J].中國獸醫(yī)科技，2002，32（10）：25-26.

[9]何方洋.克倫特羅單克隆抗體的制備與鑒定[D].北京：中國農(nóng)業(yè)大學，2001.

[10]王建平，沈建忠.豬肝和豬尿中沙丁胺醇和克倫特羅殘留的酶聯(lián)免疫吸附檢測法研究 [J].畜牧獸醫(yī)學報，2005，36（4）：397-401.