高效液相色譜定量分析的誤差來源與消除

石曉光

浙江匯能動(dòng)物藥品有限公司，浙江 杭州 310013

要提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，必須考慮在分析過程中可能產(chǎn)生的各種誤差，采取有效措施，將這些誤差減到最小。

1 樣品處理過程中誤差的來源

1.1 樣品的前處理

樣品的處理包括稱量、溶解到標(biāo)記稀釋等步驟。樣品處理要盡量減少操作者的技術(shù)問題帶來的誤差，樣品的稀釋次數(shù)、稀釋工具都是誤差的來源[1]，見表1、表2。

表1 溶液的制作

表2 目標(biāo)成分稀釋到容器上的可能性

1.2 手動(dòng)進(jìn)樣誤差的來源

作為進(jìn)樣主力，仍是手動(dòng)進(jìn)樣器。如果使用方法不當(dāng)，會(huì)引起色譜圖問題，標(biāo)準(zhǔn)曲線無線性，重復(fù)性差。定期對(duì)進(jìn)樣閥清洗和保養(yǎng)，可避免由進(jìn)樣閥引起的污染和堵塞，排除干擾峰，提高準(zhǔn)確性。進(jìn)樣量要大于定量環(huán)的3倍以上，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導(dǎo)致定量分析的誤差[2]。

2 儀器系統(tǒng)誤差的來源

2.1 輸液泵

在分析中因輸液泵的故障[3]。而引起分析結(jié)果的不準(zhǔn)確是很常見。如塵埃、垃圾等污染物進(jìn)入輸液流道內(nèi)，引起配管堵塞，單向閥污染引起壓力不穩(wěn)，密封墊損壞導(dǎo)致系統(tǒng)漏液，柱塞干損壞引起無流動(dòng)相流出，壓力波動(dòng)。保證輸液泵的穩(wěn)定和正常運(yùn)行對(duì)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性、降低誤差是非常重要的。

2.2 檢測(cè)器

用強(qiáng)溶劑清洗檢測(cè)器，消除污染和堵塞[3]。流動(dòng)相脫氣后使用，防止基線噪音，但氧氣在流動(dòng)相中的溶解度，跟流動(dòng)相溶劑組成變化、溫度上升、壓力降低等因素的變化而析出，使流路內(nèi)產(chǎn)生氣泡，向檢測(cè)器施加背壓防止氣泡的產(chǎn)生，見表3。

表3 檢測(cè)器與耐壓

2.3 流動(dòng)相

引起流動(dòng)相組成變化：配置引起的誤差、線上混合泵失靈引起的比例誤差、放置后組成的變化。例如使用揮發(fā)性溶劑，真空脫氣引起揮發(fā)性成分的損失；流動(dòng)相吸收空氣中二氧化碳引起PH改變[4]。流動(dòng)相組成變化對(duì)tR值大的組分影響最大。反相溶劑微小的變化，會(huì)引起保留時(shí)間相當(dāng)大的變化。

2.4 溫度的變化

柱上沒有恒溫裝置，通常會(huì)因溫度引起保留時(shí)間的變化，應(yīng)使用柱溫箱，另外保持室內(nèi)最小溫差。

2.5 色譜柱

流動(dòng)相對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗30min后，每隔10min～20min重復(fù)進(jìn)相同的樣品，如保留時(shí)間不變表明以平衡。應(yīng)注意，柱可能對(duì)某一組分平衡，而對(duì)其它組分尚未平衡。因此只有對(duì)所有的組分都平衡，才能正式分析樣品。

2.6 分離

液相色譜分離引起的誤差可用標(biāo)準(zhǔn)色譜圖對(duì)照鑒別。有時(shí)樣品本身發(fā)生變化，雜質(zhì)干擾。處理時(shí)應(yīng)注意基線的噪音和漂移、峰間的分辨率、峰形（拖尾、展寬等）。

3 結(jié)論

提高操作技能，工作認(rèn)真謹(jǐn)慎，仔細(xì)觀察可以控制的誤差，盡量把能控制的誤差減小到最低，分析結(jié)果的準(zhǔn)確度將更高。

[1]劉珍.化驗(yàn)員讀本[M].4版.化學(xué)工業(yè)出本社.上冊(cè):1-3：55-59.

[2]陳靜，薛峰.液相色譜的故障分析與維修[J].Equipment Manufactring Technology，2007，7:142，156.

[3]趙立平.液相色譜儀器的維護(hù)與故障消除[J].現(xiàn)代儀器，2004，2:56，58.

[4]吳方迪.色譜儀器維護(hù)與故障排除[M].化工工業(yè)出版社，2001:186-187.