糖化血紅蛋白快速檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用及問題分析

兵器工業(yè)北京北方醫(yī)院（100089）楊輝

最新資料表明，中國(guó)糖尿病患者已經(jīng)達(dá)9200萬(wàn)人以上[1]。糖尿病研究（DCCT）[2]、英國(guó)前瞻性糖尿病研究（UKPDS）[3]以及熊本研究（Kumamoto Study）[4]均證明了糖化血紅蛋白（HbA1c）水平的下降與微血管并發(fā)癥發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)下降顯著相關(guān)，這為臨床上強(qiáng)化控制血糖、減少糖尿病微血管并發(fā)癥提供了循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。HbA1c是長(zhǎng)期血糖控制情況的金標(biāo)準(zhǔn)，它反映了一種慢性血糖狀態(tài)，其特異性的并發(fā)癥就是血糖長(zhǎng)期性增高的結(jié)果。

1 儀器和方法

采用快速檢測(cè)技術(shù)，所用儀器為挪威產(chǎn)NycoCard?REAERⅡ。

2 原理

利用硼酸親和原理在顏色反射計(jì)上進(jìn)行HbA1c快速檢測(cè)。血液加入試劑中，紅細(xì)胞立即溶解，使全部的血紅蛋白都沉淀，HbA1c特異地與硼酸復(fù)合物結(jié)合呈藍(lán)色，而未糖化Hb呈紅色，通過兩者光強(qiáng)度的比例計(jì)算出樣品中HbA1c的百分濃度。

3 檢測(cè)步驟及注意事項(xiàng)

3.1 標(biāo)本采集。加抗凝劑或不加抗凝劑（EDTA、肝素和NaF）的毛細(xì)管血和靜脈血均可應(yīng)用。5μl全血加入R1試劑中，搖數(shù)下，使全血充分溶解，放置2min，時(shí)間要嚴(yán)格控制，后輕混勻，則可開始檢測(cè)。

3.2 試劑務(wù)必在2～8℃儲(chǔ)存，避免放在25℃以上或濕度70%以上的環(huán)境，勿冰凍。R1試劑要避光保存且必須2～8℃儲(chǔ)存。檢測(cè)時(shí)恢復(fù)室溫或手心緊握30s即可使用。

3.3 含濾膜反映板可儲(chǔ)存在室溫15～25℃下暗處，避免20%以下及70%以上濕度，洗滌液R2儲(chǔ)存在室溫15～25℃，使用前需平衡到室溫。

3.4 要嚴(yán)格控制5μl全血于R1試劑中，放置2min。在社區(qū)醫(yī)院，因?yàn)樯儆谐膳鷻z測(cè)HbA1c的標(biāo)本，要用定時(shí)器定好時(shí)間。

3.5 2min后，重新混勻，得到均勻懸液，取25μl懸液到反應(yīng)板中，吸管頭離反應(yīng)孔0.5cm以上，將吸管內(nèi)液體快速加入反應(yīng)孔中部，懸液滲入濾膜，避免氣泡。否則會(huì)出現(xiàn)“膜表面有白點(diǎn)”提示，原因是沉淀物未覆蓋試驗(yàn)孔的全部表面。此時(shí)要重新加樣。

3.6 放25μl洗滌液于反應(yīng)板中，同樣要避免氣泡。

3.7 反應(yīng)板要在5min內(nèi)用儀器讀取結(jié)果。

3.8 不同批號(hào)試劑不能交叉使用。

4 質(zhì)控和校正

廠家每月會(huì)做一次質(zhì)控和儀器校正。

5 檢測(cè)過程中常遇到的問題及處理方法

5.1 儀器顯示“Hb conc too low”，表示Hb濃度太低，可能的原因是樣品的Hb濃度低于可測(cè)范圍（即小于6g/100ml）。處理方法：重試樣品，用10μl全血，加入1個(gè)R1試管中，儀器顯示正確結(jié)果。

5.2 儀器顯示“Reduce Hb conc”，表示降低Hb濃度，可能的原因：(1)樣品的Hb濃度高于可測(cè)范圍（即大于18g/100 ml）。(2)加到反應(yīng)孔的洗滌液量太少。處理方法：第(1)種常見于男性患者。重新采血，混合兩個(gè)R1試劑于1個(gè)試管中，樣品5μl，儀器顯示正確結(jié)果。第(2)種問題很少出現(xiàn)，應(yīng)重新試驗(yàn)，洗滌液加足25μl。

HbA1c的檢驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格控制各個(gè)環(huán)節(jié)，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性，只有這樣才能為臨床提供有效的信息，并指導(dǎo)臨床用藥。此方法雖方便快捷，但有其局限性，其精密度和準(zhǔn)確度低于其它方法，且對(duì)樣品中Hb量有較大限制。