• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    藥食兩用類食品中赭曲霉毒素A的高效液相色譜-熒光檢測方法

    2011-04-06 09:40:51傅武勝邱文倩鄭奎城呂華東嚴(yán)小波
    食品科學(xué) 2011年14期
    關(guān)鍵詞:藥食毒素液相

    傅武勝,邱文倩,鄭奎城,呂華東,郭 斌,嚴(yán)小波

    (1.福建省疾病預(yù)防控制中心,福建 福州 350001;2.福建醫(yī)科大學(xué) 福建省疾病預(yù)防控制中心教學(xué)基地,福建 福州350001;3.福建中醫(yī)藥大學(xué),福建 福州 350001;4.福州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,福建 福州 350001)

    藥食兩用類食品中赭曲霉毒素A的高效液相色譜-熒光檢測方法

    傅武勝1,2,邱文倩1,鄭奎城1,呂華東1,郭 斌3,嚴(yán)小波4

    (1.福建省疾病預(yù)防控制中心,福建 福州 350001;2.福建醫(yī)科大學(xué) 福建省疾病預(yù)防控制中心教學(xué)基地,福建 福州350001;3.福建中醫(yī)藥大學(xué),福建 福州 350001;4.福州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,福建 福州 350001)

    目的:采用免疫親和凈化和高效液相色譜技術(shù),建立淀粉、糖類藥食兩用食品中赭曲霉毒素A的測定方法。方法:樣品粉末經(jīng)甲醇-水(8∶2,V/V)渦旋、超聲及振搖提取,提取液以磷酸鹽緩沖液稀釋后,用商品免疫親和柱凈化,含有赭曲霉毒素A的甲醇洗脫液用高效液相色譜技術(shù)分析,C18反相色譜柱分離,熒光檢測器測定。結(jié)果:赭曲霉毒素A的最低檢出濃度為1.0μg/kg(RSN=3);在0.5~100ng/mL范圍內(nèi),峰面積與質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系(r=0.9995);以不含赭曲霉毒素A的太子參、蓮子、薏苡、麥冬和龍眼肉為加標(biāo)基質(zhì),加標(biāo)水平為1~8μg/kg時(shí),平均回收率在81.8%~107%之間,RSD為1.66%~15.0%(n=3)。結(jié)論:免疫親和柱能和高效液相色譜-熒光檢測相結(jié)合取得較為滿意的結(jié)果,準(zhǔn)確度高、精密度好,滿足歐盟對食品飼料中OTA檢測方法的要求,適合于淀粉、糖類藥食兩用食品中赭曲霉毒素A的測定。

    藥食兩用食品;赭曲霉毒素A;免疫親和凈化;高效液相色譜法

    赭曲霉毒素(ochratoxins)是曲霉屬和青霉屬的某些菌種產(chǎn)生的一種具有致癌、致畸、免疫抑制和肝腎毒性的有機(jī)酸類真菌毒素,有A、B、C、D四種化合物[1],國際上較為關(guān)注的是赭曲霉毒素A(OTA),其在霉變谷物、飼料中較為常見。WHO/FAO食品添加劑和污染物聯(lián)合專家委員會制定了OTA的暫定每周最大耐受劑量[2],歐盟評估了人群膳食暴露水平[3]。國際食品法典已制定了食品中OTA的限量和良好操作規(guī)范[2],以降低OTA的健康危害。我國規(guī)定谷類和豆類OTA的限量為5μg/kg[4],歐盟對OTA的控制更為嚴(yán)格、具體[3],2010年歐盟增加了香辛調(diào)味料和甘草中OTA的限量,分別不能超過15~30μg/kg和20μg/kg[5]。甘草、橙花、咖啡、茶藨子、酸橙花、黑胡椒、胡荽、姜黃、干姜和人參等植物和/或芳香調(diào)味料OTA的污染較為普遍[6-10],有些,如甘草污染水平較高,50%的樣品含量超過5.3μg/kg[9-10]。含甘草提取物的食品也檢出0.34~2.96μg/kg的OTA,兒童每周由此攝入的OTA相當(dāng)于PTWI的8.94%[11]。

    香辛調(diào)味料、植物藥中OTA的檢測方法有薄層色譜法[12]、酶聯(lián)免疫吸附法[8,13]、熒光光度法[14]、高效液相色譜法[10,15-17]和液相色譜/質(zhì)譜法[10,14]等。薄層色譜法法為半定量方法,靈敏度較低,重復(fù)性差,如未經(jīng)過充分凈化,雜質(zhì)干擾比較嚴(yán)重。ELISA法被用于初篩,成本低,但用于檢測中樣品時(shí)假陽性率較高。液相色譜/質(zhì)譜法是一種確證性方法,檢出限低至0.3μg/kg,但儀器也十分昂貴,分析成本高。高效液相色譜法結(jié)合熒光檢測器,靈敏度較高,定量結(jié)果準(zhǔn)確。生物樣品中OTA含量低(μg/kg級),基體復(fù)雜,干擾較多,因此IAC(immunoaffinity column)凈化效果更好。雖有免疫親合柱上顯色快速篩查法[18]用于色素含量較高的甘草、姜、肉豆蔻、黑胡椒、白胡椒和辣椒,以及IAC-TLC法[12]用于測定綠咖啡中OTA測定的報(bào)道,但應(yīng)用最普遍、效果最好的還是IAC-HPLC法,已經(jīng)有較為成熟的商品IAC柱出售,國外有用于植物藥的報(bào)道[10,17]。此外,也有商品多功能親和柱,可用于同時(shí)凈化、檢測人參、干姜和松果菊中的OTA和黃曲霉毒素[7,16]。國內(nèi)應(yīng)用該法于香辛料和藤蔓水果干中OTA的檢測[14],但未見用于藥食兩用類食品樣品。因此本實(shí)驗(yàn)從福建省主產(chǎn)的淀粉或糖含量較高的6種藥食兩用食品入手,發(fā)展基于IAC凈化的HPLC-熒光檢測器檢測技術(shù),為開展污染調(diào)查提供良好的技術(shù)手段。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    太子參、蓮子、薏苡、澤瀉、麥冬、龍眼干樣品在2009年6月至2010年3月間,購于福州市各大連鎖藥店、超市和福建省部分產(chǎn)地,樣品經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院吳錦忠教授鑒定為太子參(Pseudostellaria heterophylla (M iq.) Pax ex Pax et Hoffm)、澤瀉(Alisma orientale (Sam.) Juz.[A.plantago-aquatica L.var. orientale Sam.])、蓮子(Nelumbo Nucifera Gaertn.)、薏苡(Coiχ lacroyma-jobi L. var. ma-yuen (Roman.) Stapf)、麥冬(Ophiopogonjaponicus (Thunb.) Ker-Gawl.)、龍眼肉(Euphoria longan (Lour.) Steud.)。樣品處理方法:用高速粉碎機(jī)粉碎1~2min,每份樣品粉碎完后,去除參與粉末,再用75%乙醇清洗和消毒粉碎機(jī)腔體和機(jī)蓋;用電吹風(fēng)吹干表面后,再粉碎下一個(gè)樣品;樣品粉末冷卻至室溫后,裝入密封袋中于冰箱冷藏。

    免疫親和柱為德國LC Tech公司的OtaCLEANTM(3mL/支)和美國Vicam公司的Afla TestR-P(1mL/支)、50mL聚丙烯塑料離心管(美國Corning公司)、0.45μm水系微孔濾膜(直徑50mm)、玻璃微纖維濾紙(直徑110mm)。

    甲醇(色譜純) 美國Fisher公司;冰乙酸、乙醇(均為優(yōu)級純);氯化鈉、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀(均為分析純);赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)液(OTA,50μg/mL) 美國Supelco公司。

    OTA標(biāo)準(zhǔn)儲備液(10μg/mL)的配制:移取OTA標(biāo)準(zhǔn)液(50μg/mL),移入10mL棕色容量瓶中,用甲醇定容,渦旋混勻,-20℃放置備用,進(jìn)一步配制為100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。磷酸鹽緩沖液(PBS,pH7.2)的配制:稱取10.03g Na2HPO4溶于140mL超純水中,再稱取1.932g KH2PO4溶于70mL超純水中,將兩種溶液混合后加入8.5g NaCl,充分溶解混勻,得到母液,母液稀釋5倍后供使用。

    1.2 儀器與設(shè)備

    LC-20AD型高效液相色譜儀(配RF-10AXL熒光檢測器) 日本Shimadzu公司;DFY-80型搖擺式高速萬能粉碎機(jī) 溫嶺市林大機(jī)械有限公司;CP225D型電子天平(感量0.1mg) 瑞士Sartorius公司;YP202N型電子天平(感量0.01g) 上海精密科學(xué)儀器有限公司;G-560E漩渦混合器 美國Scientific Industries公司;18型高速離心機(jī)、Allegra 25R型臺式高速冷凍離心機(jī) 美國Beckman公司;溶劑抽濾裝置 河北津騰公司;KQ-500B型、KQ3200型超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;固相萃取裝置 美國Phenomenex公司;振蕩器 美國IKA公司;精密移液槍(100、200、1000μL)美國Gilson公司;5mL移液槍 上海大龍公司;超純水機(jī) 北京歷元電子儀器公司。

    1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

    1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

    準(zhǔn)確移取適量OTA標(biāo)準(zhǔn)使用液(100ng/mL),加入甲醇,渦旋30s,配成質(zhì)量濃度為0.500、1.250、2.500、5.000、10.000ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列,進(jìn)行HPLC分析。以峰面積(Y)對OTA的濃度(X,ng/mL)以最小二乘法作線性回歸,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.3.2 液相色譜分析條件

    采用自動(dòng)進(jìn)樣方式,將適宜濃度的OTA溶液注入高效液相色譜儀。色譜條件如下:色譜柱:Shiseido C18柱(4.6mm×150mm,3μm);柱溫:35℃;流動(dòng)相:甲醇-2%冰乙酸(65∶35,V/V);流速:0.8mL/min;熒光檢測器:激發(fā)波長(λex)為333nm,發(fā)射波長為(λem) 447nm;進(jìn)樣量:20μL。

    1.4 樣品制備和OTA測定

    1.4.1 樣品的提取和凈化

    提?。簻?zhǔn)確稱取5.0g樣品粉末于50mL塑料離心管中,加入1g NaCl和20mL 80%甲醇,渦旋5s,使充分分散于溶劑中,超聲30min,再以300r/min的速度振蕩30min。結(jié)束后,以5000r/min速度離心10min,準(zhǔn)確移取2.0mL上清液加入磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋至25mL,充分搖勻,用玻璃微纖維濾紙過濾,收集濾液。

    IAC凈化:取上述濾液10mL加到預(yù)先平衡至室溫的IAC柱,調(diào)節(jié)流速,使不超過1.0mL/min。待流干后,先用10mL PBS(pH7.2)淋洗,后用10mL超純水淋洗。淋洗結(jié)束后,用吸耳球把柱內(nèi)殘余溶液盡可能擠掉,再用1.5mL甲醇分兩次充分洗脫,用2.0mL塑料離心管收集洗脫液。洗脫液充分渦旋混勻后12000r/min離心3min,輕輕倒出上層液體于進(jìn)樣瓶中,供HPLC分析,外標(biāo)法定量。進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)時(shí),取5mL純水代替粉末樣品,其余步驟相同。

    1.4.2 樣品溶液的測定

    HPLC分析條件同1.3.2節(jié)。如所測溶液濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍,應(yīng)將樣品溶液稀釋后再行測定。如超過IAC柱的最大親和容量,則應(yīng)降低取樣量或者擴(kuò)大稀釋倍數(shù)后,重新用IAC制備樣品溶液,再進(jìn)行HPLC測定。

    1.5 結(jié)果的計(jì)算

    外標(biāo)法定量,以保留時(shí)間定性,峰面積定量,則樣品中OTA的濃度X/(μg/kg)為:

    式中:C為待測溶液中OTA的質(zhì)量濃度/(ng/mL);F為稀釋倍數(shù)(F=25);m為稱樣質(zhì)量/g。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 液相色譜和樣品凈化條件的優(yōu)化

    2.1.1 OTA測定條件

    [1]的方法,采用的流動(dòng)相為甲醇-2%冰乙酸(65∶35,V/V),激發(fā)波長(λem)為333nm,發(fā)射波長(λem)=447nm,以Shiseido C18柱反相色譜柱作為分離柱,所得OTA色譜峰形對稱,基線平穩(wěn)(圖1);經(jīng)IAC柱凈化的樣品在此條件下,也得到較為理想的色譜峰。對HPLC儀器重復(fù)性進(jìn)行了考察,對質(zhì)量濃度10ng/mL的OTA溶液連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次,所得峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.748%,說明儀器性能穩(wěn)定,自動(dòng)進(jìn)樣的精密度高。

    圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液(A)和太子參樣品(B)中OTA的色譜圖Fig.1 Chromatograms of OTA in standard solution and in prince ginseng root extract

    2.1.2 OTA的穩(wěn)定性(再現(xiàn)性)實(shí)驗(yàn)

    取同一OTA標(biāo)準(zhǔn)液系列,連續(xù)進(jìn)樣6d。OTA的日間RSD在1.70%~5.16%之間(表1),這說明儀器的再現(xiàn)性較好,也說明OTA化學(xué)性質(zhì)較為穩(wěn)定,可放置至少6d。

    表1 OTA溶液的穩(wěn)定性(再現(xiàn)性)實(shí)驗(yàn)Table 1 Stability evaluation of OTA solution during 6-day storage

    2.1.3 樣品凈化條件的優(yōu)化

    2.1.3.1 親和速度(流速)的優(yōu)化

    IAC柱裝填有能與OTA特異性結(jié)合的抗體材料,這種特異性免疫親和作用通常需要保持一定的時(shí)間,因此親和過程中待測溶液流經(jīng)IAC柱的速度可能影響到抗體對目標(biāo)物OTA的親和作用。實(shí)驗(yàn)比較了流速對兩個(gè)品牌IAC柱的影響。由于LC tech公司的IAC柱內(nèi)徑較Vicam公司IAC柱大,容量多達(dá)3mL,因此通過固相萃取裝置的調(diào)節(jié)閥來控制流速;Vicam公司IAC柱內(nèi)徑較小,流速較慢,因此采用加壓的方式來提高流速。發(fā)現(xiàn)流速過快(大于1mL/min)時(shí),兩種柱的回收率為67.0%~70.9%,明顯低于較低流速(小于1mL/min)時(shí)的回收率(88.4%~95.0%)。因此在上樣時(shí)要控制流速,如果工作效率允許,盡量用較低的流速。

    3.1.3.2 淋洗液對回收率的影響

    不同的淋洗液對雜質(zhì)的淋洗效果可能會有差異,從而影響IAC柱對OTA的特異性免疫親和,同時(shí)也可能由于淋洗不充分而導(dǎo)致檢測時(shí)有雜質(zhì)干擾。比較純水(10+10)mL、PBS緩沖液(10+10)mL、PBS 10mL+純水10mL三種淋洗液對麥冬和龍眼肉中OTA測定的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),淋洗液對OTA的回收率無明顯影響,回收率在85.5%~95.0%之間(表2)??紤]到基質(zhì)的復(fù)雜多樣,為保證有較好的淋洗效果,保護(hù)抗體的穩(wěn)定性,又減少緩沖液中鹽類進(jìn)入色譜柱,通常緩沖液對抗體的保護(hù)能力更強(qiáng),實(shí)驗(yàn)選擇了PBS 10mL+純水10mL這種3種淋洗方式。

    2.2 方法學(xué)指標(biāo)的考察

    2.2.1 最低檢出限

    表2 淋洗液對樣品OTA回收率的影響Table 2 Effect of selected eluents on recovery rate of OTA

    將0.5ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液(OTA)稀釋后再進(jìn)樣,得到信噪比為3時(shí)的OTA溶液濃度為0.20ng/mL。以5g樣品計(jì)算,按照前述的稀釋步驟,計(jì)算最低檢出限為1.0μg/kg,滿足了樣品中OTA檢測和污染控制的要求。

    2.2.2 線性范圍

    在0.5~100ng/mL范圍內(nèi),峰面積Y與OTA濃度X/ (ng/mL)呈線性關(guān)系,得到回歸方程Y=9946.5X-8664.2,相關(guān)系數(shù)r=0.9995。在實(shí)際樣品檢測時(shí),考慮到OTA標(biāo)準(zhǔn)液較為昂貴,同時(shí)減少操作中OTA的職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn),采用了0.5~10ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列,折算為實(shí)際樣品含量,相當(dāng)于2.5~50μg/kg,完全滿足日常檢測的要求。

    2.2.3 準(zhǔn)確度

    選擇不含OTA的6種淀粉糖類藥食兩種食品樣品(太子參、蓮子、薏苡、澤瀉、麥冬和龍眼),以此作為加標(biāo)基質(zhì),加入不同體積的OTA(C=100ng/mL)標(biāo)準(zhǔn)溶液,使加標(biāo)水平在1~8μg/kg之間,放置30min后,進(jìn)行不同水平的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn),每個(gè)水平重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次,按照1.4節(jié)的樣品制備和測定方法進(jìn)行操作,結(jié)果見表3。在此水平下,除了澤瀉4.0μg/kg加標(biāo)水平回收率略高(116%)外,其余各類基質(zhì)中OTA的平均回收率均在81.8%~107%之間,較為理想,滿足歐盟對食品中OTA檢測的質(zhì)量控制要求[19](1~10μg/kg時(shí),回收率在70%~110%),說明所用的兩種商品IAC柱性能穩(wěn)定、效果較好,操作過程容易控制。

    表3 某些基質(zhì)中OTA的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)Table 3 Mean recovery rates and RSDs for OTA in spiked food matrices (n=3)

    2.2.4 精密度

    為進(jìn)一步考察樣品制備直至HPLC分析整個(gè)過程中,OTA結(jié)果的一致性,對6種藥食兩用食品進(jìn)行了重復(fù)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)(n=3),重復(fù)實(shí)驗(yàn)的RSD在1.66%~15.0%之間,精密度較為理想,優(yōu)于歐盟對食品OTA檢測的室內(nèi)重復(fù)性RSD控制要求[19](1~10μg/kg時(shí),RSDr<20%)。也說明商品OTA柱性能穩(wěn)定,操作過程容易控制。

    3 結(jié) 論

    3.1 建立了6種淀粉糖類藥食兩用食品中赭曲霉毒素A的免疫親和凈化-液相色譜熒光檢測方法,最低檢出限為1.0μg/kg,平均回收率在81.8%~107%之間,RSD為1.66%~15.0%,各項(xiàng)性能指標(biāo)滿足該類食品中OTA檢測和污染控制的要求。

    3.2 免疫親和柱凈化效果理想,操作簡便快速,易于掌握,重復(fù)性和再現(xiàn)性好,值得進(jìn)一步推廣用于其他品種食品和中赭曲霉毒素A的檢測。

    參考文獻(xiàn):

    [1]李風(fēng)琴. 赭曲霉毒素A分析方法進(jìn)展[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志, 2004, 16(6)∶ 545-550.

    [2]Codex Alimentarius Commission. Codex Stan 193—1995 Codex general standard for contaminants and toxins in foods[S].

    [3]Commission of the European Communities. Commission Regulation (EC) No 1881/2006 Setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs[S]. 2006-12-06.

    [4]GB 2715—2005 糧食衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].

    [5]Commission of the European Communities. Commission Regulation (EC) No 105/2010 Amending Regulation (EC) No 1881/2006 setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs as regards ochratoxin A[S]. 2010-02-05.

    [6]KABELITZ L, SIEVERS H. Contaminants of medicinal and food herbs with a view to EU regulations[J]. Innovations in Food Technology, 2004(1)∶ 25-27.

    [7]TRUCKSESS M, WEAVER C, OLES C, et al. Use of multitoxin immunoaffinity columns for determination of aflatoxins and ochratoxin A in ginseng and ginger[J]. Journal of AOAC international, 2007, 90(4)∶104-109.

    [8]THIRUMALA-DEVI K, MAYO M A, REDDY G, et al. Occurrence of ochratoxin A in black pepper, coriander, ginger and turmeric in India[J]. Food Additives and Contaminants, 2001, 18(9)∶ 830-835.

    [9]ARINO A, HERRERA M, ESTOPANAN G, et al. High levels of ochratoxin A in licorice and derived products[J]. International Journal of Food Microbiology, 2007, 114(3)∶ 366-369.

    [10]PIETRI A, RASTELLI S, BERTUZZI T. Ochratoxin A and aflatoxins in liquorice products[J]. Toxins, 2010, 2(4)∶ 758-770.

    [11]HERRERA M, HERRERA A, ARINO A. Estimation of dietary intake of ochratoxin A from liquorice confectionery[J]. Food and Chemical Toxicology, 2009, 47(8)∶ 2002-2006.

    [12]SANTOS E A, VARGAS E A. Immunoaffinity column clean-up and thin layer chromatography for determination of ochratoxin A in green coffee[J]. Food Additives and Contaminants, 2002, 19(5)∶ 447-458.

    [13]THIRUMALA-DEVI K, MAYO M A, REDDY G, et al. Production of polyclonal antibodies against ochratoxin A and its detection in chillies by ELISA[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2000, 48 (10)∶ 5079-5082.

    [14]褚慶華, 郭德華, 王敏, 等. 香辛料和藤蔓水果干中赭曲霉毒素A的測定[J]. 化學(xué)試劑, 2006, 28(10)∶ 597-600.

    [15]TRUCKSESS M W, SCOTT P M. Mycotoxins in botanicals and dried fruits∶ a review[J]. Food Additives and Contamination, 2008, 25(2)∶181-192.

    [16]TRUCKSESS M, WEAVER C, OLES C, et al. Determination of aflatoxins B1, B2, G1, and G2and ochratoxin A in ginseng and ginger by multitoxin immunoaffinity column cleanup and liquid chromatographic quantitation∶ collaborative study[J]. Journal of AOAC International, 2008, 91(3)∶ 511-523.

    [17]MATISSEK R, RATERS M, HAREN W V, et al. Determination of ochratoxin A in liquorice products using HPLC based analytical methods. Part I∶ proficiency test of methods commonly used by the confectionary industry[J]. Mycotoxin Research, 2010, 26(2)∶ 93-99.

    [18]GORYACHEVA I Y, DE SAEGER S, EREMIN S A, et al. Rapid all-inone three-step immunoassay for non-instrumental detection of ochratoxin A in high-coloured herbs and spices[J]. Talanta, 2007, 72(3)∶ 1230-1234.

    [19]Commission of the European Communities. Commission Regulation (EC) No 401/2006. Laying down the methods of sampling and analysis for the official control of the levels of mycotoxins in foodstuffs[S]. 2006-02-23.

    Determination of Ochratoxin A in Edible and Medicinal Foods by HPLC-Fluorescence Technology

    FU Wu-sheng1,2,QIU Wen-qian1,ZHENG Kui-cheng1,LU Hua-dong1,GUO Bin3,YAN Xiao-bo4
    (1. Fujian Center for Disease Prevention and Control, Fuzhou 350001, China;2. Teaching Base of Fujian Center for Disease Prevention and Control for Fujian Medical University, Fuzhou 350001, China;3. Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350001, China;4. College of Chemistry and Chemical Engineering, Fuzhou University, Fuzhou 350001, China)

    Objective∶ To develop a method to determine ochratoxin A (OTA) in edible and medicinal foods using immunoaffinity column purification and high performance liquid chromatography (HPLC). Methods∶ Powdered samples were extracted with methanol-water (8∶2, V/V) sequentially by vortex mixing, ultrasonic treatment and shaking. The resulting extract was diluted with phosphate buffer solution, filtrated and cleaned up on immunoaffinity column (IAC) containing antibodies specific to OTA . The pooled eluate was separated on a C18 column (4.6 mm × 150 mm, 3μm) and detected by fluorescence detector (FLD). Results∶The limit of detection (LOD, RSN = 3) was 1.0μg/kg for OTA. An excellent linear relationship between peak area and OTA concentration was observed in the OTA concentration range of 0.5-100 ng/mL with correlation coefficient of 0.9995. The average recovery rates for OTA in prince ginseng root, lotus seed, coix seed, Radiχ Ophiopgonis, dried longan pulp and oriental water plantain rhizome spiked with OTA standard at a level of 1-8μg/kg were varied from 81.8%-107% with a relative standard deviation (RSD) of 1.66%-15.0% (n = 3). Conclusion∶ This method has the advantages of satisfactory results and high accuracy and precision and can meet the requirements of the Europe Union for the determination of OTA in food and feed, thus providing a suitable method for determining OTA edible and medicinal foods rich in starch or sugar.

    foods;ochratoxin A;immunoaffinity cleanup;high performance liquid chromatography

    O656.31

    A

    1002-6630(2011)14-0298-05

    2010-08-19

    福建省科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2008Y0029)

    傅武勝(1971—),男,副主任技師,博士,研究方向?yàn)槲廴疚锘瘜W(xué)與風(fēng)險(xiǎn)評估。E-mail:fwsfqm@126.com

    猜你喜歡
    藥食毒素液相
    高效液相色譜法測定水中阿特拉津
    What Makes You Tired
    反相高效液相色譜法測定食品中的甜蜜素
    藥食兩相宜之雞蛋花
    藥食兼用話蝸牛
    秋犯燥邪 藥食同療
    藥食兩用說食姜
    一類具有毒素的非均勻chemostat模型正解的存在性和唯一性
    毒蘑菇中毒素的研究進(jìn)展
    嚴(yán)苛標(biāo)準(zhǔn)方能清洗校園“毒素”
    久久久久精品国产欧美久久久| 一级毛片高清免费大全| 怎么达到女性高潮| 热re99久久精品国产66热6| 欧美在线黄色| 欧美激情高清一区二区三区| 在线观看日韩欧美| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲精品在线观看二区| 黑丝袜美女国产一区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 电影成人av| 成年人黄色毛片网站| 美女 人体艺术 gogo| 女警被强在线播放| 婷婷丁香在线五月| 午夜免费鲁丝| 香蕉久久夜色| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 1024香蕉在线观看| 国产成年人精品一区二区 | 黄色毛片三级朝国网站| 久久久久久久久中文| 老司机深夜福利视频在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 日韩免费av在线播放| 国产成人系列免费观看| 美女午夜性视频免费| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 大陆偷拍与自拍| 亚洲精华国产精华精| 在线观看午夜福利视频| 视频区图区小说| 久9热在线精品视频| 一级作爱视频免费观看| 亚洲欧美激情综合另类| 多毛熟女@视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 不卡一级毛片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 黄色女人牲交| 亚洲av电影在线进入| 叶爱在线成人免费视频播放| 一级片免费观看大全| 黄色片一级片一级黄色片| 成年女人毛片免费观看观看9| 最新在线观看一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索| www国产在线视频色| 91大片在线观看| 9191精品国产免费久久| 午夜激情av网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产男靠女视频免费网站| 两个人免费观看高清视频| www.999成人在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 十八禁人妻一区二区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 91大片在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 免费看a级黄色片| 亚洲av电影在线进入| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲国产欧美网| 97碰自拍视频| 久久中文字幕一级| www.精华液| 又紧又爽又黄一区二区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| tocl精华| 久久久久久久久中文| 精品人妻1区二区| 大陆偷拍与自拍| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲国产欧美一区二区综合| 精品一区二区三区av网在线观看| 97碰自拍视频| cao死你这个sao货| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| www.自偷自拍.com| 亚洲七黄色美女视频| 精品日产1卡2卡| 激情在线观看视频在线高清| 88av欧美| av片东京热男人的天堂| 欧美不卡视频在线免费观看 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 午夜免费成人在线视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| av免费在线观看网站| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品野战在线观看 | 亚洲人成电影观看| 久久影院123| 91在线观看av| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲精品在线观看二区| 国产成人精品久久二区二区91| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久香蕉精品热| 亚洲男人天堂网一区| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 热99国产精品久久久久久7| 搡老岳熟女国产| 老鸭窝网址在线观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久欧美精品欧美久久欧美| 一个人观看的视频www高清免费观看 | x7x7x7水蜜桃| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲男人天堂网一区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲av片天天在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩国内少妇激情av| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 99香蕉大伊视频| 丝袜美足系列| 国产高清激情床上av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲人成电影免费在线| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久9热在线精品视频| 午夜91福利影院| 国产成人系列免费观看| 后天国语完整版免费观看| 窝窝影院91人妻| 日本五十路高清| 亚洲av熟女| 国产人伦9x9x在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品99久久99久久久不卡| 男女床上黄色一级片免费看| 女人精品久久久久毛片| 成人特级黄色片久久久久久久| 成年人免费黄色播放视频| 性少妇av在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲av成人av| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久热这里只有精品99| 午夜精品在线福利| 日韩国内少妇激情av| 免费av毛片视频| 69精品国产乱码久久久| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 在线永久观看黄色视频| 久久这里只有精品19| 精品福利观看| 国产免费现黄频在线看| 级片在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 交换朋友夫妻互换小说| 丝袜美足系列| 岛国视频午夜一区免费看| 日本wwww免费看| 色老头精品视频在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 一区二区三区精品91| 人妻久久中文字幕网| 久久久久久久久免费视频了| 757午夜福利合集在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 1024香蕉在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| av网站在线播放免费| 91九色精品人成在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| www.www免费av| 黑人猛操日本美女一级片| 不卡av一区二区三区| 亚洲伊人色综图| 午夜福利免费观看在线| 日韩有码中文字幕| 久久热在线av| 欧美乱色亚洲激情| 在线天堂中文资源库| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲专区中文字幕在线| 高清毛片免费观看视频网站 | 老汉色av国产亚洲站长工具| 成人18禁在线播放| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产视频一区二区在线看| 国产一区二区激情短视频| 人妻久久中文字幕网| 亚洲成人久久性| 一夜夜www| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 黄色片一级片一级黄色片| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美日本中文国产一区发布| 国产激情久久老熟女| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日本a在线网址| 亚洲在线自拍视频| 国产不卡一卡二| 免费在线观看黄色视频的| 欧美激情久久久久久爽电影 | bbb黄色大片| 午夜激情av网站| 91成年电影在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产精品久久久久成人av| 久久精品影院6| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美一区二区精品小视频在线| 日韩av在线大香蕉| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品日韩av在线免费观看 | 九色亚洲精品在线播放| 51午夜福利影视在线观看| 黄色怎么调成土黄色| av在线播放免费不卡| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲欧美激情在线| 久久久久久久精品吃奶| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲男人天堂网一区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 老司机靠b影院| 欧美在线一区亚洲| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品影院久久| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲色图av天堂| 久久久国产精品麻豆| 最新美女视频免费是黄的| 久久香蕉精品热| 欧美激情高清一区二区三区| 在线国产一区二区在线| 在线天堂中文资源库| 国产精品永久免费网站| 亚洲国产毛片av蜜桃av| e午夜精品久久久久久久| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 午夜91福利影院| 天堂动漫精品| 久久热在线av| 亚洲激情在线av| 国产成人欧美在线观看| 99久久人妻综合| 欧美精品一区二区免费开放| 少妇 在线观看| 香蕉丝袜av| 看免费av毛片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品一区二区在线不卡| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | xxxhd国产人妻xxx| 两个人免费观看高清视频| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲精品国产区一区二| 在线观看午夜福利视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 成人手机av| a级毛片黄视频| 久久中文字幕人妻熟女| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 午夜a级毛片| 操美女的视频在线观看| 亚洲 国产 在线| 久久性视频一级片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲五月天丁香| 国产伦一二天堂av在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 窝窝影院91人妻| 岛国视频午夜一区免费看| 国产精品 欧美亚洲| 村上凉子中文字幕在线| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久精品91蜜桃| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲av五月六月丁香网| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产熟女xx| 欧美激情极品国产一区二区三区| 窝窝影院91人妻| 岛国视频午夜一区免费看| 黑人猛操日本美女一级片| 日本欧美视频一区| 婷婷丁香在线五月| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产亚洲欧美98| 久久久久久人人人人人| 黄片大片在线免费观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲黑人精品在线| a级毛片黄视频| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲专区字幕在线| 国产伦人伦偷精品视频| 成人永久免费在线观看视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产成+人综合+亚洲专区| 90打野战视频偷拍视频| 丁香六月欧美| 男女床上黄色一级片免费看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 精品久久久久久,| 久9热在线精品视频| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲第一青青草原| 女警被强在线播放| 看免费av毛片| 少妇粗大呻吟视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 男女床上黄色一级片免费看| 搡老乐熟女国产| 丁香欧美五月| 国产亚洲欧美98| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲精华国产精华精| 窝窝影院91人妻| 成人国产一区最新在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲熟女毛片儿| 香蕉丝袜av| 免费在线观看日本一区| 日本欧美视频一区| 男人操女人黄网站| 99国产精品一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 人人妻人人澡人人看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲美女黄片视频| 欧美乱妇无乱码| 欧美精品啪啪一区二区三区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 又紧又爽又黄一区二区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产区一区二久久| 热99国产精品久久久久久7| 国产欧美日韩精品亚洲av| 成人三级做爰电影| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 午夜久久久在线观看| 国产高清视频在线播放一区| 天天添夜夜摸| 搡老乐熟女国产| 91字幕亚洲| 午夜亚洲福利在线播放| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 在线观看一区二区三区激情| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产精品国产高清国产av| 天堂动漫精品| 99久久精品国产亚洲精品| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 超碰97精品在线观看| 久久久久久久午夜电影 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 在线观看日韩欧美| 久久国产精品影院| 99国产精品免费福利视频| 国产精品久久电影中文字幕| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产单亲对白刺激| 少妇粗大呻吟视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 精品国产国语对白av| 免费在线观看完整版高清| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲,欧美精品.| 欧美一级毛片孕妇| 91字幕亚洲| 免费看十八禁软件| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 91字幕亚洲| 成人手机av| 亚洲av成人一区二区三| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久久久国内视频| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品综合久久久久久久免费 | 国产精品电影一区二区三区| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美成狂野欧美在线观看| 校园春色视频在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 日韩免费av在线播放| 男女床上黄色一级片免费看| 久久精品成人免费网站| 狂野欧美激情性xxxx| 热re99久久国产66热| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲第一青青草原| 18美女黄网站色大片免费观看| 女人被狂操c到高潮| 国产成人精品久久二区二区免费| 麻豆久久精品国产亚洲av | 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美精品一区二区免费开放| 伦理电影免费视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产又爽黄色视频| 性色av乱码一区二区三区2| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩大尺度精品在线看网址 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品日韩av在线免费观看 | 精品国产乱码久久久久久男人| 午夜老司机福利片| 成人精品一区二区免费| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 日韩高清综合在线| 国产精品 欧美亚洲| 九色亚洲精品在线播放| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲黑人精品在线| √禁漫天堂资源中文www| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产又爽黄色视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 天天影视国产精品| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲欧美激情在线| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久香蕉激情| 中文字幕av电影在线播放| 午夜精品国产一区二区电影| 免费高清视频大片| 免费在线观看黄色视频的| 看片在线看免费视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲全国av大片| 88av欧美| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 一级毛片高清免费大全| 国产深夜福利视频在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 国产单亲对白刺激| 亚洲色图av天堂| 久久中文看片网| 久久香蕉激情| netflix在线观看网站| 在线视频色国产色| 一夜夜www| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产精品一区二区精品视频观看| 一进一出好大好爽视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产精品野战在线观看 | tocl精华| 美女福利国产在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 51午夜福利影视在线观看| 免费av中文字幕在线| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 欧美性长视频在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲人成电影观看| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲七黄色美女视频| www.熟女人妻精品国产| 在线观看www视频免费| 色综合站精品国产| 狂野欧美激情性xxxx| 超碰97精品在线观看| 免费看十八禁软件| 热re99久久国产66热| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲精华国产精华精| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 婷婷六月久久综合丁香| 久久久国产一区二区| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲色图综合在线观看| 久久中文看片网| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲第一青青草原| 精品第一国产精品| 日本 av在线| 国产成人av教育| 999久久久国产精品视频| 久久香蕉激情| 亚洲三区欧美一区| 色精品久久人妻99蜜桃| 岛国在线观看网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 91九色精品人成在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 热re99久久国产66热| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 免费在线观看日本一区| 长腿黑丝高跟| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 在线免费观看的www视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 一a级毛片在线观看| 精品欧美一区二区三区在线| 丁香欧美五月| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产成人系列免费观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 日本欧美视频一区| 99久久综合精品五月天人人| 精品国产一区二区三区四区第35| 成人三级做爰电影| 免费少妇av软件| 欧美丝袜亚洲另类 | 999久久久精品免费观看国产| 免费不卡黄色视频| 亚洲av美国av| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产精品偷伦视频观看了| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲在线自拍视频| 久久99一区二区三区| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲avbb在线观看| 91成年电影在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产一卡二卡三卡精品| 又黄又粗又硬又大视频| 久久久国产成人免费| 一区福利在线观看| 色综合婷婷激情| 十八禁人妻一区二区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 午夜免费鲁丝| 亚洲黑人精品在线| 亚洲精品在线观看二区| 久久热在线av| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 三上悠亚av全集在线观看| 成人18禁在线播放| 丝袜美腿诱惑在线| 不卡一级毛片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 女性生殖器流出的白浆| 午夜两性在线视频| 大码成人一级视频| 亚洲中文av在线| 国产视频一区二区在线看| 首页视频小说图片口味搜索| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品1区2区在线观看.| 99久久精品国产亚洲精品| 男女床上黄色一级片免费看| a级毛片黄视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 两个人免费观看高清视频| 国产熟女xx| 波多野结衣一区麻豆| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲国产欧美网| 欧美乱妇无乱码| 男人舔女人下体高潮全视频| 麻豆一二三区av精品| 嫁个100分男人电影在线观看| 日本欧美视频一区| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品偷伦视频观看了| 99re在线观看精品视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 大香蕉久久成人网| 在线观看一区二区三区激情| 99国产精品99久久久久| 亚洲五月婷婷丁香| 国产又爽黄色视频| 色综合婷婷激情| 欧美精品一区二区免费开放| 精品一品国产午夜福利视频| 久久久久久久久中文| 欧美精品一区二区免费开放| 久久亚洲精品不卡| 成人永久免费在线观看视频| 在线观看免费午夜福利视频| 午夜福利欧美成人| 最近最新中文字幕大全电影3 | 欧美另类亚洲清纯唯美|