黃酮和黃酮醇誘導(dǎo)人食管鱗癌KYSE-510細(xì)胞分化和構(gòu)效

王竹君，張 強(qiáng),2，趙新淮,*

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150030；2.佳木斯大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

黃酮和黃酮醇誘導(dǎo)人食管鱗癌KYSE-510細(xì)胞分化和構(gòu)效

王竹君1，張 強(qiáng)1,2，趙新淮1,*

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150030；2.佳木斯大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

在體外探討兩個(gè)黃酮和兩個(gè)黃酮醇化合物對人食管鱗癌KYSE-510細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用及其構(gòu)效關(guān)系。顯微鏡觀察細(xì)胞分化形態(tài)，激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀分析分化標(biāo)志物(角蛋白8)表達(dá)，RT-PCR定量端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶表達(dá)。結(jié)果表明：4個(gè)化合物均可誘導(dǎo)KYSE-510細(xì)胞分化，并且化合物分子中C環(huán)3′-羥基提高化合物的分化誘導(dǎo)活性，A環(huán)6′-羥基和B環(huán)4′-羥基可能削弱化合物的分化誘導(dǎo)活性。

黃酮；黃酮醇；人食管鱗癌；分化

類黃酮化合物是一類富含于植物性食物中的苯-γ-吡喃酮衍生物[1]。大量體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：類黃酮可通過多種途徑發(fā)揮防癌、抑癌作用，如誘導(dǎo)凋亡、細(xì)胞周期停滯和分化等[2-3]。黃酮和黃酮醇是膳食中含量最高的類黃酮化合物[4-5]，研究證實(shí)黃酮和黃酮醇可誘導(dǎo)多種癌細(xì)胞分化[6-8]，但此作用的構(gòu)效關(guān)系未得到系統(tǒng)的總結(jié)，并且黃酮和黃酮醇對食管癌細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用還未見報(bào)道。

基于目前黃酮和黃酮醇化合物抗癌活性研究現(xiàn)狀，以及在食管癌方面的研究空白，本課題選擇結(jié)構(gòu)相似的兩個(gè)黃酮(白楊素和黃芩黃素)和兩個(gè)黃酮醇(高良姜素和山奈酚)(結(jié)構(gòu)見圖1)，研究它們對人食管鱗癌KYSE-510細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用，揭示膳食黃酮和黃酮醇化合物對人食管癌的防治作用及分子結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系，為膳食結(jié)構(gòu)的合理調(diào)整、食源性生物活性成分的定向改造提供參考。

圖1 兩個(gè)黃酮和兩個(gè)黃酮醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of two flavones and two flavonols

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

人食管鱗癌KYSE-510細(xì)胞購自天津市腫瘤醫(yī)院。

白楊素(純度＞96%)、噻唑藍(lán)(MTT) 美國Sigma公司；高良姜素(純度＞98%)、黃芩黃素(純度＞98%)上海友思生物技術(shù)有限公司；山奈酚(純度＞98%) 南京青澤醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；碘化丙錠(PI)、溴化乙錠(EB)、二甲基亞砜(DMSO)、牛血清白蛋白(BSA) 北京索萊寶生物科技有限公司；鼠抗人角蛋白8單克隆抗體 福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司；TRIzol試劑、RPMI1640培養(yǎng)液 美國Gibco公司；熒光定量PCR反應(yīng)試劑盒(SYBR PrimeScriptTMRT-PCR) 大連寶生物工程有限公司；異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記山羊抗小鼠IgG第二抗體 北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

Heal Force/HF90 CO2培養(yǎng)箱 上海力申科學(xué)儀器有限公司；Mtic/AE31倒置顯微鏡 麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司；ABI/7500熒光定量PCR儀 美國Applied Biosystems公司；COULTER/ COULTER Epics XL流式細(xì)胞儀 美國Beckman公司；Bio-Rad/Trans-Biot SD Cell半干轉(zhuǎn)印電泳槽、Bio-Rad/680酶標(biāo)儀 美國Bio-Rad公司；LEICA/DFC280倒置熒光顯微鏡、TC SP2 AOBS激光共聚焦顯微鏡 德國Leica Microsystems公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

人食管鱗癌KYSE-510細(xì)胞，于含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100mg/L鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中(37℃、5% CO2)培養(yǎng)。

1.3 細(xì)胞增殖抑制測定

將KYSE-510細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h后加入4個(gè)化合物的DMSO溶液。作用濃度分別為10、20、40、80μmol/L，作用時(shí)間分別為24、48、72h。0.1% DMSO細(xì)胞處理組設(shè)為陰性對照。作用后，每孔加入5mg/mL MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，4℃、1800×g離心5min，棄上清液。每孔加入100μL DMSO，酶標(biāo)儀測定A570nm值。

1.4 顯微鏡觀察分化形態(tài)

(1)通風(fēng)管道?？诓康倪M(jìn)風(fēng)、排風(fēng)管道穿過臨空墻、密閉墻時(shí)應(yīng)預(yù)埋通風(fēng)穿墻短管，該處墻體開孔處的鋼筋須進(jìn)行加固處理；穿墻管與混凝土接觸部分不得刷油漆。穿墻短管中間應(yīng)設(shè)置密閉肋，密閉肋的厚度為5 mm、寬度為50 mm，該密閉肋與管材外側(cè)應(yīng)雙面滿焊，焊縫應(yīng)嚴(yán)密。管道內(nèi)部、外部除與混凝土接觸部位外，均應(yīng)刷兩道防銹漆。密閉短管穿墻時(shí)，兩端伸出墻面的長度應(yīng)>100 mm。

接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的細(xì)胞培養(yǎng)24h后，分別加入濃度為10、20、40、80μmol/L 4種化合物作用24h，倒置光學(xué)顯微鏡下觀察藥物作用后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。

1.5 激光共聚焦顯微鏡觀察分化標(biāo)記物角蛋白8

接種于激光共聚焦專用細(xì)胞培養(yǎng)板中的細(xì)胞培養(yǎng)24h，分別加入濃度為80μmol/L的4個(gè)化合物作用24h。吸棄上清液，PBS洗滌兩次，加入100μL鼠抗人角蛋白 8單克隆抗體工作液，冰上孵育30min，PBS溶液(含0.1%疊氮化鈉和1% BSA)洗滌兩次。加入100μL FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG第二抗體工作液(稀釋比例為1:100)，冰上孵育30min，PBS溶液(含0.1%疊氮化鈉和1% BSA)洗滌兩次，加入PI作用20min，激光共聚焦顯微鏡低溫快速檢測。

1.6 流式細(xì)胞術(shù)測定誘導(dǎo)分化率

接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的細(xì)胞培養(yǎng)24h，分別加入濃度為10、20、40、80μmol/L的4個(gè)化合物，分別作用24、48h和72h。吸棄上清液，PBS洗滌兩次，胰酶消化，終止，轉(zhuǎn)入5mL EP管，4℃、1000×g離心兩次，每次5min，棄上清液，加入100μL鼠抗人角蛋白 8單克隆抗體工作液，冰上孵育30min，PBS溶液(0.1%疊氮化鈉，1% BSA)重懸細(xì)胞，1000×g離心兩次，每次5min，加入100μL FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG第二抗體工作液(稀釋比例為1:100)，冰上孵育30min，PBS溶液(0.1%疊氮化鈉、1% BSA)重懸細(xì)胞，1000×g離心兩次，每次5min，棄上清液，1mL PBS溶液(0.1%疊氮化鈉、1%BSA)重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀分析。

1.7 熒光定量RT-PCR分析分化標(biāo)志基因表達(dá)

接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的細(xì)胞經(jīng)4種化合物(80μmol/L)作用24h后，采用TRIzol試劑，按廠家說明提取細(xì)胞總RNA，存于-80℃。依照PCR反應(yīng)試劑盒廠家說明，進(jìn)行基因表達(dá)(mRNA)的熒光定量RT-PCR分析。內(nèi)參基因?yàn)棣?actin，基因引物序列見表1。

表1 RT-PCR分析時(shí)所使用的引物Table 1 Primers used in real-time RT-PCR

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 黃酮和黃酮醇對食管癌細(xì)胞增殖的抑制作用

采用MTT法檢測黃酮和黃酮醇化合物對KYSE-510細(xì)胞增殖的抑制作用，結(jié)果如圖2A～D所示，所選的黃酮和黃酮醇化合物對細(xì)胞具有增殖抑制活性，并且抑制活性有劑量-活性依賴性和時(shí)間-活性依賴性。以高良姜素為例，作用時(shí)間一定(24h)時(shí)，10、20、40μmol/L和80μmol/L高良姜素各處理組的細(xì)胞數(shù)量，分別為對照組細(xì)胞數(shù)量的89.6%、68.7%、50.4%和29.5%；作用濃度一定(80μmol/L)時(shí)，高良姜素分別處理24、48h和72h，各處理組細(xì)胞數(shù)量分別為對照組細(xì)胞數(shù)量的29.5%、23.4%和10.7%。其他化合物的細(xì)胞增殖抑制活性也呈現(xiàn)類似規(guī)律。

所選擇的黃酮和黃酮醇化合物對KYSE-510細(xì)胞增殖的抑制活性不同。圖2E給出它們抑制細(xì)胞增殖的IC50值。比較看出，高良姜素的增殖抑制活性相對最強(qiáng)(50μmol/L)，其他化合物的活性大小依次為白楊素(57μmol/L)、黃芩黃素(67μmol/L)、山奈酚(139μmol/L)。

2.2 黃酮和黃酮醇誘導(dǎo)細(xì)胞分化的光學(xué)顯微鏡觀察

細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變是細(xì)胞分化的表型特征，也是基本特征。從所選化合物誘導(dǎo)人食管癌KYSE-510細(xì)胞分化的光學(xué)顯微鏡觀察圖片(圖3)中可看出，濃度為80μmol/L的黃酮和黃酮醇化合物對兩株癌細(xì)胞均具有分化誘導(dǎo)作用。細(xì)胞出現(xiàn)扁平化，并呈現(xiàn)樹枝狀向外伸展、體積增大、細(xì)胞密度降低、核外形規(guī)整等與細(xì)胞分化相關(guān)的典型形態(tài)學(xué)特征。

圖2 兩個(gè)黃酮和兩個(gè)黃酮醇對KYSE-510細(xì)胞生長的抑制作用Fig.2 Inhibitory effects of two flavones and two flavonols on the proliferation of KYSE-510 cells

圖3 兩個(gè)黃酮和兩個(gè)黃酮醇對KYSE-510細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用(×100)Fig.3 Induction effects of two flavones and two flavonols on the differentiation of KYSE-510 cells examined by phase-contrast microscopy (×100)

2.3 黃酮和黃酮醇誘導(dǎo)細(xì)胞分化的激光共聚焦分析結(jié)果

KYSE-510細(xì)胞經(jīng)濃度為80μmol/L的黃酮或黃酮醇作用24h，角蛋白8抗體經(jīng)FITC-二抗標(biāo)記(經(jīng)激發(fā)產(chǎn)生綠色熒光)和PI(標(biāo)記細(xì)胞核，經(jīng)激發(fā)產(chǎn)生紅色熒光)標(biāo)記后，激光共聚焦顯微鏡觀察。與對照組(0.1% DMSO)相比，4個(gè)化合物均能誘導(dǎo)KYSE-510細(xì)胞的分化標(biāo)記的表達(dá)(圖4中箭頭所指)，進(jìn)一步證明它們的分化誘導(dǎo)作用。同時(shí)，熒光強(qiáng)度相對大小的順序?yàn)椋焊吡冀兀景讞钏兀军S芩黃素＞山奈酚。

圖4 激光共聚焦分析兩個(gè)黃酮和兩個(gè)黃酮醇對KYSE-510細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用Fig.4 Induction effects of two flavones and two flavonols on the differentiation in KYSE-510 cells examined by confocal laser scanning microscopy

2.4 黃酮和黃酮醇誘導(dǎo)細(xì)胞分化的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果

圖5 流式細(xì)胞術(shù)分析兩個(gè)黃酮和兩個(gè)黃酮醇對KYSE-510細(xì)胞的分化作用Fig.5 Differentiation of flavone and flavonoid-treated KYSE-510 cells analyzed by flow cytometry

圖5顯示80μmol/L黃酮和黃酮醇化合物作用KYSE-510細(xì)胞24h，分別經(jīng)角蛋白8抗體和FITC-二抗作用后，流式細(xì)胞儀分析誘導(dǎo)細(xì)胞分化的結(jié)果。與對照組(0.1% DMSO)相比，所選擇的化合物均能誘導(dǎo)細(xì)胞分化，并且誘導(dǎo)作用具有劑量-活性依賴性。以高良姜素為例(作用時(shí)間24h)，對照組(0.1% DMSO)分化標(biāo)記為3.5%，濃度為10、20、40μmol/L和80μmol/L高良姜素處理組，細(xì)胞的分化標(biāo)記分別為4.2%、4.6%、6.8%和15.5%。其他的3個(gè)化合物的分化誘導(dǎo)活性也有類似規(guī)律性。80μmol/L高良姜素的分化誘導(dǎo)活性最強(qiáng)(15.5%)，其他化合物的活性依次為：白楊素(7.8%)、黃芩黃素(7.5%)、山奈酚(7.0%)。

2.5 黃酮和黃酮醇誘導(dǎo)抑制端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶活性結(jié)果

表2 兩個(gè)黃酮和兩個(gè)黃酮醇對KYSE-510細(xì)胞端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶表達(dá)的影響Table 2 Effects of two flavones and two flavonols on the expression of hTERT in KYSE-510 cells analyzed by real-time RT-PCR

細(xì)胞分化過程中，端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)mRNA的表達(dá)將會(huì)下降[9-10]。如表2所示，黃酮和黃酮醇均能抑制KYSE-510細(xì)胞端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶的表達(dá)，其中高良姜素抑制活性最強(qiáng)，其他化合物的分化誘導(dǎo)活性由大到小依次為白楊素、黃芩黃素、山奈酚。

綜上所述，所選的兩個(gè)黃酮和兩個(gè)黃酮醇對KYSE-510細(xì)胞具有分化誘導(dǎo)活性，并且活性大小順序?yàn)楦吡冀?、白楊素、黃芩黃素、山奈酚，與其細(xì)胞增殖抑制活性基本一致，說明它們對癌細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用有可能是其發(fā)揮抗癌作用的重要機(jī)制之一。

2.6 黃酮和黃酮醇誘導(dǎo)KYSE-510細(xì)胞分化的構(gòu)效關(guān)系初步分析

基于以上分化研究結(jié)果和化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)特征(圖1)，得出所選黃酮和黃酮醇誘導(dǎo)KYSE-510細(xì)胞分化的構(gòu)效關(guān)系：1)化合物分子C環(huán)中有3＇-羥基的高良姜素，對細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用大于C環(huán)無備3＇-羥基的白楊素，表明3＇-羥基對化合物的活性發(fā)揮具有促進(jìn)作用；2) A環(huán)上具備6＇-羥基的黃芩黃素對細(xì)胞的分化誘導(dǎo)活性弱于A環(huán)無6-羥基的白楊素，表明6＇-羥基單獨(dú)存在時(shí)可能削弱化合物的分化誘導(dǎo)活性；3)B環(huán)上有4′-羥基的山奈酚對細(xì)胞的分化誘導(dǎo)活性弱于B環(huán)無4′-羥基的白楊素，表明4′-羥基單獨(dú)存在時(shí)也可能削弱化合物的分化誘導(dǎo)活性。

3 討 論

癌癥是危害人類健康的嚴(yán)重疾病，抑制癌細(xì)胞增殖是有效控制其發(fā)展的首要途徑之一。MTT法分析結(jié)果表明，本研究所選的黃酮和黃酮醇化合物，能以劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)依賴方式抑制食管癌KYSE-510細(xì)胞增殖。在有關(guān)其他類型癌細(xì)胞(如前髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞)的研究中，也發(fā)現(xiàn)黃酮和黃酮醇具有細(xì)胞增殖抑制活性[11-12]。這些均表明黃酮和黃酮醇所具有的抗癌活性。

黃酮和黃酮醇對人食管癌細(xì)胞的抑制作用，很可能通過多種作用機(jī)制實(shí)現(xiàn)，如誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞分化[1]。本研究的前期研究結(jié)果表明，6個(gè)類黃酮化合物可誘導(dǎo)癌細(xì)胞G2/M停滯[13-14]。類黃酮化合物不僅可誘導(dǎo)癌細(xì)胞周期停滯，還可以誘導(dǎo)癌細(xì)胞向正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變。研究表明，高良姜素可誘導(dǎo)人髓系白血病K562細(xì)胞分化[15]。槲皮素和山奈酚作用人白血病肥大細(xì)胞后，該細(xì)胞的分泌粒大量積累，表明細(xì)胞分化程度得到提高[16]。這些與本研究通過對比類黃酮化合物作用前后，KYSE-510細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化表現(xiàn)出分化現(xiàn)象一致。

大量研究表明角蛋白的表達(dá)與多種上皮細(xì)胞分化有關(guān)[17-18]，為細(xì)胞分化標(biāo)志物。其中，角蛋白8屬Ⅱ型角蛋白，表達(dá)于正常食管上皮細(xì)胞，但在低分化食管鱗癌細(xì)胞中幾乎不表達(dá)，因此被認(rèn)為是食管鱗癌的分化標(biāo)志物[19]。本研究采用FITC標(biāo)記抗角蛋白8抗體，通過激光共聚焦顯微鏡觀察類黃酮化合物對KYSE-510細(xì)胞表面角蛋白8表達(dá)影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)類黃酮化合物可促進(jìn)KYSE-510細(xì)胞表達(dá)角蛋白8，從而進(jìn)一步證實(shí)細(xì)胞形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)中得出的類黃酮化合物誘導(dǎo)KYSE-510細(xì)胞分化的觀察結(jié)果。與本研究一致，Zi等[20]發(fā)現(xiàn)水飛薊素作用人前列腺LNCaP細(xì)胞后，LNCaP細(xì)胞開始呈現(xiàn)單層、表面結(jié)合緊密等分化形態(tài)，并且細(xì)胞角蛋白8、角蛋白18和嗜鉻粒蛋白A表達(dá)升高，表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞分化分子特征。此外，本研究采用流式細(xì)胞儀和熒光定量RT-PCR得到分析結(jié)果，再次證實(shí)了類黃酮化合物對KYSE-510細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用。

通過比較，本研究發(fā)現(xiàn)，4個(gè)所選類黃酮化合物對KYSE-510細(xì)胞的分化誘導(dǎo)活性存在差異，其中高良姜素的活性最強(qiáng)，其他3個(gè)化合物的活性依次為白楊素＞黃芩黃素＞山奈酚。這一結(jié)果表明，C環(huán)上3′-OH對分化誘導(dǎo)活性具有提高作用，相反A環(huán)的6′-OH、B環(huán)的4′-OH可能削弱化合物的分化誘導(dǎo)活性。Takahashi等[21]的研究表明，芹菜素、木犀草素以及槲皮素均能誘導(dǎo)急性骨髓性白血病HL-60細(xì)胞分化為粒性白細(xì)胞和單核細(xì)胞；結(jié)果顯示，芹菜素及其對應(yīng)的異黃酮化合物——染料木黃酮，具有相似的NBT還原能力(HL-60細(xì)胞分化標(biāo)記)，推測黃酮化合物分子C環(huán)中2′-OH、3′-OH不是誘導(dǎo)分化活性的主要作用基團(tuán)，C2、C3之間的雙鍵可能是誘導(dǎo)活性所必需，且C環(huán)為開環(huán)結(jié)構(gòu)(如查耳酮)時(shí)，似乎降低分化誘導(dǎo)活性。這與本研究得出類黃酮化合物癌細(xì)胞分化誘導(dǎo)活性的構(gòu)效關(guān)系結(jié)果不同，因此推測不同癌細(xì)胞可能對類黃酮化合物存在不同的敏感性，是造成兩種構(gòu)效關(guān)系差異的主要原因。今后，可針對這一問題進(jìn)行深入研究。

4 結(jié) 論

本研究通過顯微鏡分化形態(tài)觀察、分化標(biāo)志物(角蛋白8)的激光共聚焦顯微觀察和流式細(xì)胞儀分析，以及端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶表達(dá)的檢測，確認(rèn)兩個(gè)黃酮(白楊素和黃芩黃素)和兩個(gè)黃酮醇(高良姜素和山奈酚)對人食管癌KYSE-510存在分化誘導(dǎo)作用，并且能以劑量效應(yīng)依賴方式誘導(dǎo)KYSE-510細(xì)胞的分化。4個(gè)化合物的活性大小順序?yàn)楦吡冀?、白楊素、黃芩黃素、山奈酚。同時(shí)，C環(huán)上3-羥基對分化誘導(dǎo)活性存在提高作用，而A環(huán)的6-羥基、B環(huán)的4′-羥基可能削弱化合物的分化誘導(dǎo)活性。本研究可以進(jìn)一步確認(rèn)植物中多酚類化合物的健康作用，并為類黃酮化合物有意識(shí)地改造或合成、提高其生物活性，提供一定的參考。

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Flavones and Flavonols-induced Differentiation of Human Esophageal Squamous Cell Carcinoma Cell Line (KYSE-510) and Possible Structure-Activity Relationship

WANG Zhu-jun1， ZHANG Qiang1,2， ZHAO Xin-huai1,*
(1. Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China；2. School of Public Health, Jiamusi University, Jiamusi 154007, China)

Induction effects of two flavones (chrysin and baicalein) and two flavonols (galangin and kaempferol) on the differentiation of human esophageal squamous cell carcinoma cell line (KYSE-510) were studied in vitro in this paper. The possible structure-activity relationships of these compounds for the induction of differentiation of KYSE-510 cells were explored. The differentiation-specific morphological change of the cells was examined by using phase-contrast microscopy, the augmentation of differentiation marker (cytokeratin 8) was evaluated by confocal laser scanning microscopy, and differentiation marker and the expression of human telomerase reverse transcriptase were quantified by flow cytometry and real-time RT-PCR, respectively. Results revealed that OH at C3′ in the ring C of these compounds might enhance the differentiation-inducing activity, while OH at C6′ in the ring A or at C4′ in ring B might decrease the differentiation-inducing activity.

flavone；flavonol；human esophageal squamous carcinoma；differentiation

Q946.83

A

1002-6630(2011)07-0305-07

2010-08-11

高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金項(xiàng)目(200802240002)；黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目計(jì)劃(11551z018)

王竹君(1983—)，女，碩士研究生，主要從事食品化學(xué)研究。E-mail：dabao8691572@163.com

*通信作者：趙新淮(1963—)，男，教授，博士，主要從事食品科學(xué)研究。E-mail：zhaoxh@mail.neau.edu.cn