氯胺酮對(duì)束縛加懸吊應(yīng)激大鼠腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

陸艷娟 楊成君 李曉林 (吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，吉林 長(zhǎng)春 130021)

單胺類神經(jīng)遞質(zhì)是一種功能復(fù)雜的神經(jīng)活性物質(zhì)，在應(yīng)激狀態(tài)下其含量異常〔1～4〕，目前尚未有關(guān)于麻醉劑氯胺酮對(duì)應(yīng)激大鼠不同腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化影響的報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組 雄性SD大鼠，體重(250±10)g，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。正常飲食，晝夜飼養(yǎng)48 h。實(shí)驗(yàn)前12～24 h禁食，不限水。取雄性SD大鼠30只隨機(jī)分為:應(yīng)激對(duì)照組(S組)，將大鼠四肢用繃帶分別固定于鼠板上，頭朝下尾朝上懸掛，經(jīng)股靜脈注射5 ml生理鹽水，在1 h內(nèi)注射完畢;麻醉劑氯胺酮對(duì)照組(k1組)，1 h內(nèi)經(jīng)股靜脈注入用5 ml生理鹽水稀釋的氯胺酮10 mg/kg;在束縛加懸吊后靜脈注入用5 ml生理鹽水稀釋的氯胺酮10 mg/kg(k2組)，束縛加懸吊共6 h〔5〕。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 注射用氯胺酮，北京紫竹藥業(yè)有限公司;5-羥色胺(5-TH)，去甲腎上腺素(NE)，多巴胺(DA)，美國(guó)SⅠGMA公司;鄰苯二甲醛，上?；瘜W(xué)試劑公司，L-半胱氨酸，上?？颠_(dá)公司。熒光分光光度計(jì)RF-5301PC(日本島津公司)，電熱三用水箱DS-1型(北京醫(yī)用儀器廠)，冷凍離心機(jī)TGL-16G型(上海分析儀器廠)。

1.3 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)測(cè)定與取材 各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死。迅速取腦組織，分出不同腦區(qū)，-80℃保存。用時(shí)取出，稱重，于冰冷、酸性正丁醇中制成勻漿，離心分離水相及有機(jī)相。5-HT在堿性條件下與鄰苯二甲醛縮合，形成具有熒光的化合物，NE、DA與氧化劑反應(yīng)生成具有熒光的化合物，上述熒光化合物強(qiáng)度與濃度成直線關(guān)系，即可測(cè)定其熒光強(qiáng)度〔6〕。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)結(jié)果以±s表示，組間比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量比較 k2組腦干DA含量明顯高于S組(P＜0.01)，而NE明顯高于k1組(P＜0.01);5-HT含量沒有明顯變化。見表1。組別NE DA 5-HT

表1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

表1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

與S組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與 k1組比較:3)P＜0.05，4)P＜0.01;下表同

S組1.01±0.07 1.53±0.21 6.01±2.58 k1組 0.49±0.082) 1.59±0.31 5.07±1.79 k2組 0.87±0.244) 2.12±0.192)4.34±1.45

2.2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量比較 k1組和k2組NE含量明顯高于S組(P＜0.01);k2組5-HT含量明顯低于S組和k1組(P＜0.01);DA含量沒有明顯變化。見表2。

表2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

表2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

組別NE DA 5-HT S組0.24±0.04 1.16±0.17 3.45±0.25 k1組 1.08±0.322) 1.32±0.39 3.46±0.51 k2組 1.29±0.162) 1.18±0.21 1.38±0.192)4)

2.3 各組大鼠皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量比較 k1組及k2組皮質(zhì)NE含量都低于S組(P＜0.05，P＜0.01)，DA含量高于S組(P＜0.05)。5-HT含量各組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。見表3。

表3 各組大鼠皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

表3 各組大鼠皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

組別NE DA 5-HT S組4.33±1.94 1.18±0.35 5.43±1.44 k1組 1.08±0.222) 1.31±0.221) 5.17±0.84 k2組 1.78±0.611) 1.88±0.381)3)4.37±2.46

3 討論

近年來(lái)，抑郁癥是全球范圍內(nèi)最受關(guān)注的公共衛(wèi)生難題之一，應(yīng)激與抑郁癥的發(fā)病有著密不可分的相關(guān)性〔7〕。應(yīng)激反應(yīng)的重要特征之一是下丘腦-垂體-腎上腺軸激活，主要引起交感神經(jīng)興奮。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)包括NE、DA、5-HT等。應(yīng)激狀態(tài)時(shí)檢測(cè)腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化對(duì)研究這類遞質(zhì)的生理、生化功能有重要意義。在正常情況下，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的分泌保持在一定水平，并且他們之間的比例協(xié)調(diào)，從而維持功能穩(wěn)定。隨著應(yīng)激情況出現(xiàn)，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)也相應(yīng)發(fā)生改變，從而引起一系列功能紊亂癥狀的發(fā)生。當(dāng)個(gè)體暴露于應(yīng)激中，腎上腺軸活性增強(qiáng)，導(dǎo)致腎上腺皮質(zhì)激素分泌增加，糖皮質(zhì)激素是主要的應(yīng)激激素之一，除能升高血壓外，還能影響腎上腺素α受體的表達(dá)，增加兒茶酚胺類作用效果，同時(shí)還能通過對(duì)中樞神經(jīng)的影響，抑制前列腺素、緩激肽、5-HT等的合成，繼而引起血管收縮效應(yīng)。糖皮質(zhì)激素分泌增加還可以促進(jìn)腎小管的重吸收，增加血容量，從而升高血壓。5-HT在腦內(nèi)分布廣泛，是調(diào)節(jié)人體感覺、思維和行為等各種活動(dòng)的重要神經(jīng)遞質(zhì)，其水平變化與應(yīng)激密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)顯示，不同腦區(qū)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5-HT對(duì)氯胺酮作用的敏感性不同，氯胺酮組小腦的5-HT明顯低于對(duì)照組，而NE含量明顯升高;腦干、皮質(zhì)DA含量升高，說(shuō)明氯胺酮對(duì)腦中樞神經(jīng)產(chǎn)生一定的影響，以改變其神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

1 Zhu W，Xie W，Pan T，et al.Comparison of neuroprotective and neu-rorestorative capabilities of rasagiline and selegiline against lactacystin-induced nigrostriatal dopaminergic degeneration〔J〕.J Neurochem，2008;105(5):1970-8.

2 Gonzalez MM，Aston-Jones G.Light deprivation damages monoamine neurons and produces a depressive behavioral phenotype in rats〔J〕.Proc Natl Acad Sci U SA，2008;105(12):4898-903.

3 Jahng JW，Kim NY，Ryu V，et al.Dexamethasone reduces food intake，weight gain and the hypothalamic 5-HT concentration and increases plasma leptin in rats〔J〕.Eur JPharmacol，2008;581(1-2):64-70.

4 Park SS，Schulz EM，Lee D.Disruption of dopamine homeostasis underlines selective neurodegeneration mediated by alpha-synuclein〔J〕.Eur J Neurosci，2007;26(11):3104-12.

5 李曉林，陸艷娟，李曉梅，等.束縛加懸吊應(yīng)激模型大鼠血清、腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)雜志，2008;12(11):1349-51.

6 張 燕，王洪斌，楊海霞，等.熒光分光度法測(cè)定大鼠不同腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)〔J〕.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010;41(1):94-6.

7 馬 東，董文心.應(yīng)激與抑郁癥發(fā)病的相關(guān)性及新藥研究進(jìn)展〔J〕.世界臨床藥物，2009;30(9):557-61.