金雀異黃素自乳化釋藥系統(tǒng)的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)Δ

宋笑丹，唐景玲，邸哲婷，吳琳華#（.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥學(xué)部黑龍江省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱市 50086；2.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，哈爾濱市 5000；.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱市 5008）

自乳化釋藥系統(tǒng)（self-emulsifying drug delivery system，SEDDS）是由水難溶性藥物、油相、表面活性劑和助表面活性劑所組成的均一、透明、各向同性的液體或固體。該給藥系統(tǒng)最主要的特征就是體溫條件下，在胃腸道中遇體液后可在胃腸道蠕動(dòng)下自發(fā)形成水包油型微乳[1]，從而增加藥物的口服吸收和生物利用度。這已成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。

金雀異黃素（genistein，GEN）即5，7，4-三羥基異黃酮，也稱染料木素，主要存在于豆科植物中，具有雌激素樣作用[2]，對(duì)骨質(zhì)疏松癥、心血管疾病、抗腫瘤[3]等具有預(yù)防和治療作用。由于該類(lèi)化合物的水溶性和脂溶性均較差，生物利用度不高，將其制成自乳化藥物傳遞系統(tǒng)（即GEN-SEDDS）可以提高藥物溶解度，促進(jìn)藥物吸收，提高生物利用度。本試驗(yàn)對(duì)GEN-SEDDS的處方進(jìn)行了研究并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，以為臨床新制劑的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜（HPLC）儀，包括Millenninum32色譜管理系統(tǒng)、510泵、486紫外檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）；AEU-120電子天平（日本島津公司）；Zetasizer 3000HS激光粒徑分析儀（英國(guó)Malvern公司）；JEM-1220透射電子顯微鏡（日本電子公司）；JJ-79-1磁力攪拌器（上海浦東物理光學(xué)儀器廠）；KQ3200E醫(yī)用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

GEN（陜西慧科植物開(kāi)發(fā)有限公司，批號(hào):20070221，純度:98%）；椰子油C18/C10甘油三酯（Miglyol 812，上海紀(jì)雅化工有限公司）；二乙二醇單乙基醚（Transcutol P，上?？?lè)康公司）；聚氧乙烯蓖麻油（Cremophor EL，以下簡(jiǎn)稱EL）、聚乙二醇40氫化蓖麻油（RH40）、聚乙二醇15羥硬脂酸酯（HS15）、聚氧乙烯35蓖麻油（Cremophor ELP，以下簡(jiǎn)稱ELP）均由德國(guó)BASF公司提供；甘油（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；聚乙二醇（PEG）400、吐溫20（天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心）；1，2-丙二醇（天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠）；肉豆蔻酸異丙酯（IPM，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；吐溫80（上海山浦化工有限公司）；油酸乙酯（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司）；甲醇（色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司）；維生素E醋酸酯（北京第二制藥廠，含量:99.95%）；其余均為藥用輔料。

2 方法與結(jié)果

2.1 GEN-SEDDS的處方研究

2.1.1 溶解度試驗(yàn) 將適量并稍過(guò)量的GEN置于具塞離心管中，分別加入1 g溶劑，將混合物渦旋混合并超聲，然后在37 ℃水浴中平衡48 h，于15 000 r·min-1離心10 min，精密吸取上清液適量，置于10 mL量瓶中，用甲醇定容后進(jìn)行HPLC測(cè)定，計(jì)算溶解度。GEN在不同溶劑中的溶解度見(jiàn)表1。

表1 金雀異黃素在不同溶劑中的溶解度Tab 1 Solubility of GEN in different solvents

2.1.2 輔料配伍選擇 選擇對(duì)GEN溶解度較大的Miglyol 812、油酸乙酯和維生素E醋酸酯作為油相，EL、HS15作為乳化劑，Transcutol P作為助乳化劑。將不同的乳化劑和助乳化劑按12∶5混合溶解后，加入到3份體積的油相中，混勻后加入1 000倍的水，于中速磁力攪拌下自乳化，以自乳化后的外觀色澤和乳化時(shí)間（目測(cè)）為考察指標(biāo)，并裸眼觀察所形成乳劑的澄明度，篩選最佳配伍。按乳化效果的好壞分為4級(jí):A為幾乎透明；B為略有乳光；C為呈乳白色；D為加入蒸餾水中之前混合物分層。結(jié)果，以EL作為乳化劑乳化效果較HS15好，但乳化時(shí)間較長(zhǎng)，而以Miglyol 812、油酸乙酯和維生素E醋酸酯作為油相形成的微乳效果相近，詳見(jiàn)表2。

表2 不同油相、乳化劑和助乳化劑的乳化結(jié)果Tab 2 Results of emulsification for various oil phases，emulsifier and co-emulsifier

2.1.3 偽三元相圖研究 分別以Miglyol 812、維生素E醋酸酯和油酸乙酯為油相，EL和Transcutol P分別為乳化劑和助乳化劑，通過(guò)繪制偽三元相圖比較不同比例的油、乳化劑和助乳化劑所形成的乳化區(qū)域。偽三元相圖見(jiàn)圖1。

由圖1可知，以油酸乙酯作為油相形成的乳化區(qū)域最大，而以Miglyol 812、維生素E醋酸酯和油酸乙酯為油相形成乳劑的乳化效果相近，故以油酸乙酯作為油相。

2.1.4 GEN-SEDDS的制備 精密稱定GEN 50 mg和Transcutol P 237.5 mg于具塞玻璃瓶管中，輕微搖動(dòng)使藥物溶解，然后加入油酸乙酯142.5 mg、EL 570 mg，渦旋攪拌混勻，即得。

2.2 質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.2.1 外觀和形態(tài) GEN自乳化液外觀為澄清透明的液體，加20倍水稀釋后，采用1%磷鎢酸負(fù)染，于透射電鏡下觀察，所得微乳呈球型，大小均勻。GEN自乳化液透射電鏡照片見(jiàn)圖2。

2.2.2 粒徑和電位 用激光粒度儀測(cè)得GEN自乳化液稀釋后的粒徑為（227.9±93.8）nm，Zeta電位為（－18.6±4.8）mV，詳見(jiàn)圖3、圖4。

2.2.3 藥物含量 取GEN自乳化液約50 mg于10 mL容量瓶中，甲醇稀釋定容，HPLC法測(cè)定GEN含量，共測(cè)定3批樣品，每批樣品測(cè)3次。結(jié)果，平均載藥量為5.16%。

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年新開(kāi)發(fā)的藥物中有40%都屬于難溶性藥物，口服生物利用度低，個(gè)體間和個(gè)體內(nèi)的差異大，給制劑開(kāi)發(fā)帶來(lái)很大的困難。SEDDS在提高難溶性藥物溶解度和生物利用度方面的優(yōu)勢(shì)使其成為一種非常有前景的藥物傳遞系統(tǒng)，為解決大量水溶性差的藥物的口服吸收，提供了一個(gè)新的給藥途徑。SEDDS具有服用方便，制備簡(jiǎn)單，適合大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，具有極大的發(fā)展前景和應(yīng)用價(jià)值。

GEN的水溶性和脂溶性均較差，生物利用度不高，為此有人將其制成微球[4]，有人將其制成環(huán)糊精包合物[5]，而筆者將其制成SEDDS，不但可以提高藥物溶解度，促進(jìn)藥物吸收，還可以提高生物利用度。本試驗(yàn)對(duì)GEN-SEDDS的處方進(jìn)行了研究并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，為臨床新制劑的開(kāi)發(fā)提供了依據(jù)，其在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為將在今后研究考察。

由于GEN脂溶性和水溶性均較差，故處方篩選過(guò)程中既要考慮乳化劑和助乳化劑的乳化能力，同時(shí)還要兼顧藥物的溶解度，以得到藥物溶解度高、自乳化能力強(qiáng)和質(zhì)量穩(wěn)定可靠的處方。

由配伍試驗(yàn)可知，HS15組的自乳化時(shí)間顯著短于EL組，但HS15室溫下呈半固體狀態(tài)，與油酸乙酯和Transcutol P配伍之后室溫放置過(guò)夜常出現(xiàn)分層現(xiàn)象，故選擇EL為乳化劑。3種油相形成的微乳乳化后，外觀及乳化時(shí)間相差不大，但以油酸乙酯為油相形成的三相圖乳化區(qū)域最大，故選擇油酸乙酯為油相。選擇Transcutol P為助乳化劑，一方面因?yàn)槠渲榛Ч^好；另一方面因?yàn)槠鋵?duì)藥物的溶解能力強(qiáng)，能夠增加載藥量。

[1]Gursoy RN，Benita S.Self-emulsifying drug delivery systems（SEDDS）for improved oral delivery of lipophilic drugs[J].Biomed Pharmacother，2004，58（3）:173.

[2]劉 葵，張恩娟.大豆異黃酮的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2006，17（1）:67.

[3]Warri A，Saarinen NM，Makela S，et al.The role of early life genistein exposures in modifying breast cancer risk[J].British Journal of Cancer，2008，98（9），1485.

[4]吳婉瑩，李云谷.金雀異黃素殼聚糖微球的制備方法[J].中國(guó)中藥雜志，2002，27（5）:353.

[5]雷英杰，石繼仙，劉福德.染料木素-β-環(huán)糊精包合物的制備和鑒定[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2004，39（11）:837.