腦卒中后抑郁癥患者載脂蛋白 E水平檢測(cè)*

李 靜,宋景貴#,穆俊林,張朝輝,李文強(qiáng)

1)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科新鄉(xiāng) 453002 2)河南省生物精神醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室新鄉(xiāng) 453002 3)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心身二科新鄉(xiāng) 453002

#通訊作者,男,1962年10月生,博士,教授,研究方向:腦器質(zhì)性精神障礙,E-mail:songjg62@126.com

腦卒中后抑郁癥(post-stroke depression,PSD)是腦卒中后常見的并發(fā)癥之一,是腦卒中后情緒障礙的主要表現(xiàn)形式[1],是以情緒低落、自罪自責(zé)和睡眠紊亂等為主要表現(xiàn)的情感障礙性疾病。最新研究[2-4]表明載脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)與心腦血管性疾病相關(guān),是動(dòng)脈粥樣硬化和腦卒中的危險(xiǎn)因素,同時(shí)ApoE基因與血管性疾病患者的抑郁情緒有關(guān),許多血管性疾病患者均伴發(fā)有抑郁情緒[5],因此推測(cè)ApoE影響PSD的發(fā)生。該研究旨在了解PSD患者ApoE水平,從而為PSD的臨床治療提供新的客觀依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 所有病例均為 2009年1月至 10月在新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的患者,共 67例,腦卒中診斷均符合文獻(xiàn)[6]診斷標(biāo)準(zhǔn),均行頭顱CT或MRI檢查證實(shí),抑郁癥的診斷均符合第3版中國(guó)精神疾病分類方案與診斷標(biāo)準(zhǔn)(CCMD-3)[7]。PSD組:共32例,1例標(biāo)本發(fā)生溶血,實(shí)際入組 31例;男 18例,女 13例;年齡 43～76 (64.2±8.7)歲;病程3.0～50.0(18.6±10.2)d;文化程度:大學(xué) 7例,中學(xué) 13例,小學(xué) 11例。腦卒中非抑郁組:共 35例,2例標(biāo)本發(fā)生溶血,實(shí)際入組33例;男19例,女14例;年齡43～78(64.5±11.6)歲;病程2.0～52.0(19.1±11.4)d;文化程度:大學(xué) 6例,中學(xué) 15例,小學(xué) 12例。

1.2 ApoE mRNA的測(cè)定 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-real time PCR)檢測(cè)ApoEmRNA表達(dá)量。采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)人ApoE引物,由大連寶生物工程有限公司合成。序列如下:上游為5'-GGGTCGCTTTTGGGATTACCTG-3',下游為5'-CAACTCCTTCATGGTCTCGTCC-3';GAPDH作為內(nèi)參照,上游為5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3',下游為5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'。按RNA提取試劑盒說(shuō)明書中的操作步驟提取總RNA后逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為:莫洛尼鼠白血病病毒緩沖液5μL,普通型dNTP 1.25μL,核酸酶-游離水1.75μL。實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系25μL:核酸染料(SYBRII)12.5μL,上、下游引物各1μL,cDNA溶液6μL,去離子雙蒸水4.5μL。反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性3min;95℃變性25 s,60℃退火30 s,72℃延伸1min,共40個(gè)循環(huán)。取目的基因閾值循環(huán)數(shù)(Ct值)倒數(shù)與內(nèi)參Ct值倒數(shù)之比作為目的基因相對(duì)表達(dá)量。

1.3 血清ApoE蛋白水平測(cè)定 儀器采用上海楓嶺生物技術(shù)有限公司FTC-2000熒光定量基因擴(kuò)增儀和芬蘭雷勃MK3全自動(dòng)酶標(biāo)儀;試劑盒為武漢中美科技有限公司產(chǎn)人ApoE試劑盒(產(chǎn)品編號(hào): E0704h)。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清ApoE水平。將血清標(biāo)本按ApoE酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明書操作步驟測(cè)定,應(yīng)用酶聯(lián)儀在450 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn),各組數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布且方差齊,2組間ApoEmRNA和蛋白水平的比較采用兩獨(dú)立樣本的 t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn) α= 0.05。

2 結(jié)果

PSD組ApoEmRNA表達(dá)量低于腦卒中非抑郁組,而PSD組血清ApoE水平則高于腦卒中非抑郁組,見表1。

表1 2組患者ApoE mRNA表達(dá)量及血清ApoE水平比較

3 討論

目前對(duì)腦血管疾病的發(fā)病因素研究成為熱點(diǎn)之一[8]。而 PSD作為腦卒中后常見的精神障礙疾病,不僅給患者帶來(lái)了軀體和精神上的痛苦,而且增加了家庭和社會(huì)的負(fù)擔(dān),增加病死率和卒中復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn),降低患者回歸社會(huì)的比例[9]。因此,關(guān)于 PSD的相關(guān)研究越來(lái)越受到人們關(guān)注。

ApoE相對(duì)分子量約為34 000,是一個(gè)含有299個(gè)氨基酸、結(jié)合有磷脂的糖蛋白,正常人血漿ApoE水平為0.03～0.05 g/L。同時(shí)它是腦組織中最重要的載脂蛋白,由星形細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞合成,存在于腦脊液的高密度脂蛋白樣脂蛋白殘粒中,參與腦組織中脂質(zhì)/膽固醇的運(yùn)輸與清除,在細(xì)胞膜及神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的維持、神經(jīng)組織細(xì)胞再生、軸突及突觸修復(fù)或重建等方面起著重要作用[10]。有研究[11-12]表明ApoE不僅與血脂代謝及心腦血管疾病有關(guān),而且與軀體疾病伴發(fā)的抑郁情緒有關(guān),很多軀體疾病都伴發(fā)有不同程度的焦慮抑郁情緒,如ApoEε4等位基因在冠心病患者抑郁情緒的發(fā)生中起著不可忽視的作用。

該研究結(jié)果顯示:PSD患者外周血清ApoE水平高于腦卒中非抑郁組,而PSD患者ApoE mRNA相對(duì)表達(dá)量低于腦卒中非抑郁組。證實(shí)了 PSD患者ApoE水平存在異常,即外周血清ApoE水平增高,ApoEmRNA表達(dá)量降低?？赡茉?yàn)?當(dāng)PSD患者外周血清ApoE水平增時(shí),高水平的ApoE可引起機(jī)體反射性調(diào)節(jié),從而使機(jī)體單核細(xì)胞中ApoE mRNA表達(dá)量降低,進(jìn)一步證實(shí)了ApoE與軀體疾病及其伴發(fā)的抑郁情緒有關(guān)。

總之,作者認(rèn)為外周血清ApoE水平增高可為PSD的臨床診治提供參考。關(guān)于ApoE如何具體影響PSD的發(fā)生機(jī)制有待進(jìn)一步研究探討。

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