nm23-H1蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義

孟亞麗 張霞 鄭燕 王立芹 朱振龍 張紅真

腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因(nm23)的低表達(dá)或突變與腫瘤轉(zhuǎn)移作用日益受到重視，被認(rèn)為在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中起到負(fù)性作用［1］，研究表明轉(zhuǎn)移抑制基因nm23-H1蛋白的低表達(dá)與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有關(guān)［1］，但研究nm23-H1蛋白在不同宮頸組織中的表達(dá)情況，國(guó)內(nèi)報(bào)道較少，本文對(duì)nm23-H1蛋白在不同宮頸組織表達(dá)及臨床意義進(jìn)行研究，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2005年10月至2008年10月各項(xiàng)臨床資料完整的宮頸鱗癌蠟塊60例，試驗(yàn)組患者年齡26～73歲，平均年齡(46±10)歲;術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000年的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)宮頸鱗癌進(jìn)行臨床分期，Ⅰ期19例，Ⅱ期36例;Ⅲ期5例;組織學(xué)分級(jí):高分化鱗癌12例，中分化鱗癌38例，低分化鱗癌10例;其中伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例。另取同期病理科存檔的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ、CINⅡ及CINⅢ標(biāo)本各20例和正常宮頸鱗狀上皮標(biāo)本20例(對(duì)照組)。

1.2 試劑與方法 石蠟包埋組織做5 μm連續(xù)切片，常規(guī)HE染色和免疫組化SP法染色。鼠抗人nm23-H1抗體及SP試劑盒(即用型)購(gòu)自北京中杉金橋公司，以已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。嚴(yán)格按SP試劑盒說明書操作，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。

1.3 結(jié)果判斷 nm23-H1蛋白陽(yáng)性染色為腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)明顯棕黃色細(xì)顆粒。每例隨機(jī)選出10個(gè)不重復(fù)、不重疊的高倍鏡視野(10×40)，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及所有細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率=∑陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/∑細(xì)胞數(shù)×100%。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞率進(jìn)行分級(jí)，PINCH和nm23-H1陽(yáng)性細(xì)胞率≤10%為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞率＞10%為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)及線性趨勢(shì)χ2檢驗(yàn)，率的多重比較采用Bonfferoni校正檢驗(yàn)水準(zhǔn)法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 nm23-H1蛋白在不同宮頸組織中的表達(dá) 隨癌組織病變程度的升高nm23-H1蛋白陽(yáng)性率有降低的趨勢(shì)。宮頸鱗癌與正常宮頸組織、CINⅠ和CINⅡ比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與CINⅢ比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 nm23-H1蛋白在不同宮頸組織中的表達(dá)

2.2 nm23-H1蛋白的表達(dá)與宮頸鱗癌患者病理因素的關(guān)系

nm23-H1蛋白的表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(FIGO)分期有關(guān)(P＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，nm23-H1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。隨著FIGO分期的升高nm23-H1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低(P＜0.05)。nm23-H1蛋白的表達(dá)與患者年齡、腫瘤的組織病理分級(jí)及腫瘤大小無關(guān)(P＞0.05)。見表2。

3 討論

子宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤，過早性生活、性生活紊亂、HPV感染等因素導(dǎo)致宮頸癌發(fā)病逐漸趨于年輕化，且發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著廣大女性的生命及健康。如何早期將具有潛在轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)的患者篩選出來，給予積極治療，是目前急需解決的問題之一。nm23基因是從鼠的黑色素瘤細(xì)胞中分離出來的一種與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因，nm23基因?qū)δ[瘤轉(zhuǎn)移的調(diào)控機(jī)制一直在進(jìn)一步研究，但其在腫瘤轉(zhuǎn)移抑制中發(fā)揮著重要作用，已為多數(shù)學(xué)者肯定［2，3］。人類nm23基因組中有兩個(gè)基因，為nm23-H1、nm23-H2。目前普遍認(rèn)為nm23-H1與腫瘤發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切［4］。nm23-H1是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，nm23-H1編碼核苷二磷酸激酶NDPK，其基因的蛋白產(chǎn)物酶參與體內(nèi)三磷酸核苷的生成，在細(xì)胞分化中參與微管的集合以及 G蛋白介導(dǎo)的信號(hào)傳遞過程，使肌球蛋白輕鏈磷酸化而抑制細(xì)胞遷移，誘導(dǎo)凋亡，抑制分化，影響細(xì)胞的活動(dòng)、粘連和附著，從而抑制細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移［5］。nm23-H1等位基因的突變、缺失、低表達(dá)與多種惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的潛能密切相關(guān)［6］。本研究顯示nm23-H1蛋白在宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)和CINⅠ及CINⅡ的陽(yáng)性表達(dá)率80.0%(16/20)，但與CINⅢ比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，與路平等［7］的研究一致，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)在宮頸鱗癌中，臨床分期越晚，nm23-H1表達(dá)越低，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織中，nm23-H1的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織，與王孝忠等［8，9］的研究一致。提示nm23-H1蛋白的表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，表達(dá)降低預(yù)示預(yù)后不良。

表2 宮頸癌患者nm-23蛋白的表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系例(%)

1 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor repressive potential J Natl Cancer Inst，1988，80: 200-204.

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3 孫宇，黃關(guān)宏，王忠明.nm23基因抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制及其與子宮頸癌的研究進(jìn)展.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，35:1318-1320.

4 郭亮，張敏，高潔凡.轉(zhuǎn)移相關(guān)基因蛋白CD44v6和nm23在宮頸病變中的表達(dá)及意義.河北醫(yī)藥，2009，31:911-913.

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8 王孝忠，劉福元，沈宏偉.nm23-H1在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義.中國(guó)婦幼健康研究，2007，18:493-495.

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