參芪扶正注射液的化學(xué)成分研究

張聲源， 范春林， 王 磊， 劉學(xué)華， 孫學(xué)蔚， 葉文才*

(1．暨南大學(xué)藥學(xué)院中藥及天然藥物研究所，廣東廣州510632;2．麗珠集團(tuán)利民制藥廠(chǎng)，廣東韶關(guān)512028)

參芪扶正注射液是以我國(guó)傳統(tǒng)的扶正補(bǔ)氣中藥黨參、黃芪為原料，經(jīng)提取有效成分后配制而成的純中藥大輸液。該藥物由北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院與麗珠集團(tuán)利民制藥廠(chǎng)于1986開(kāi)始聯(lián)合研制，1996年經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)試生產(chǎn)，1999年經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)正式生產(chǎn)，主要用于腫瘤疾病的輔助治療，為中藥二類(lèi)新藥。2005年，參芪扶正注射液又獲得了增加適應(yīng)癥的臨床批件，用于治療心腦血管疾?。?］。該注射液自1996年上市以來(lái)，產(chǎn)生了良好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。

近年來(lái)，中藥注射劑的不良反應(yīng)事件頻繁發(fā)生，引起了社會(huì)對(duì)中藥注射劑用藥安全的廣泛關(guān)注。這些事件與中藥注射液自身的質(zhì)量有著密切的聯(lián)系，其中較為突出的問(wèn)題是藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不夠明確，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待完善。參芪扶正注射液作為我國(guó)首創(chuàng)的純中藥大輸液，已在臨床應(yīng)用多年，其療效確切，毒副作用低，但藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不十分明確［2］。為闡明參芪扶正注射液的化學(xué)成分，同時(shí)為其質(zhì)量控制研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)，我們對(duì)參芪扶正注射液原料進(jìn)行了化學(xué)成分研究。利用AB-8型大孔吸附樹(shù)脂、硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠色譜和制備液相等方法進(jìn)行分離純化，得到了14個(gè)化合物，并根據(jù)物理化學(xué)性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分別為毛蕊異黃酮(Ⅰ)、毛蕊異黃酮7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅱ)、芒柄花素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)、(6a R，11a R)-9，10-二甲氧基紫檀烷 3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)、丁香苷(Ⅴ)、5-羥甲基糠醛 (Ⅵ)、(3R)-(-)-2'-羥基-3'，4'-二甲氧基異黃烷 7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅶ)、(6a R，11a R)-vesticarpan(Ⅷ)、丁香酸葡萄糖苷(Ⅸ)、(+)-丁香脂素 4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅹ)、(Z)-cinnamic acid 8-O-β-D-glucopyranoside(Ⅺ)、鳥(niǎo)苷(Ⅻ)、腺苷(ⅩⅢ)和香草酸(ⅩⅣ)。化合物Ⅶ～ⅩⅣ為首次從參芪扶正注射液中分離得到，化合物Ⅷ、Ⅸ和Ⅻ在黨參屬和黃芪屬植物中均為首次報(bào)道。

1 儀器與材料

X-5型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(未校正);Jasco V-550紫外/可見(jiàn)光譜儀;Jasco FT/IR-480 Plus傅里葉變換紅外光譜儀(KBr壓片);Jasco P-1020全自動(dòng)旋光儀;Bruker AV 400超導(dǎo)核磁共振儀;Finnigan LCQ Advantage MAX質(zhì)譜儀;Agilent 1200分析型高效液相色譜儀;Varian prostar制備型高效液相色譜儀。柱色譜用硅膠(青島海洋化工廠(chǎng));Sephadex LH-20柱層析凝膠(Pharmacia公司);硅膠GF254薄層預(yù)制板(煙臺(tái)化學(xué)工業(yè)研究所);RP-18 F254薄層預(yù)制板和ODSRP-18柱層析材料(Merck公司);所用試劑均為分析純。參芪扶正注射液原料藥浸膏(麗珠集團(tuán)利民制藥廠(chǎng)，批號(hào)20090116)。

2 提取與分離

參芪扶正注射液原料藥浸膏(1 000 g)經(jīng)水分散溶解，上樣于A(yíng)B-8大孔吸附樹(shù)脂，水-乙醇梯度洗脫，得水及40%、70%、95%乙醇洗脫部分。40%乙醇洗脫部分(100 g)經(jīng)反復(fù)硅膠、Sephadex LH-20、ODSRP-18、制備型高效液相、重結(jié)晶等方法分離純化，分別得到化合物Ⅰ(10．1 mg)、Ⅱ(200．0 mg)、Ⅲ(100．8 mg)、Ⅳ(50．2 mg)、Ⅴ(10．6 mg)、Ⅵ(20．0 mg)、Ⅶ (60．1 mg)、Ⅷ (5．7 mg)、Ⅸ(8．2 mg)、Ⅹ (9．1mg)、Ⅺ (5．5mg)、Ⅻ (8．0mg)、ⅩⅢ(12．3 mg)及ⅩⅣ (6．2 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ:無(wú)色針晶(甲醇)，mp 230～232℃，ESI-MS m/z:285［M+H］+。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:8．99(1H，br s，3'-OH)，7．97(1H，d，J=8．8 Hz，H-5)，7．05(1H，br s，H-2')，6．95(2H，br s，H-5'，H-6')，6．93(1H，dd，J=8．8，2．1 Hz，H-6)，6．86(1H，d，J=2．1 Hz，H-8)，3．79(3H，s，OCH3)。13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:174．5(C-4)，162．5(C-7)，157．3(C-9)，153．0(C-2)，147．5(C-4')，146．0(C-3')，127．2(C-5)，124．7(C-1')，123．3(C-3)，119．6(C-6')，116．6(C-10)，116．4(C-2')，115．1(C-6)，111．9(C-5')，102．0(C-8)，55．6(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅰ為毛蕊異黃酮。

化合物Ⅱ:白色粉末(甲醇)，mp 221～222℃，ESI-MS m/z:469 ［M+Na］+。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:9．00(1H，br s，3'-OH)，8．38(1H，s，H-2)，8．05(1H，d，J=8．4 Hz，H-5)，7．23(1H，d，J=2．2 Hz，H-8)，7．14(1H，dd，J=8．4，2．2 Hz，H-6)，7．07(1H，br s，H-2')，6．95(2H，br s，H-5'，H-6')，5．42(1H，d，J=4．8 Hz，2″-OH)，5．13(1H，d，J=4．6 Hz，3″-OH)，5．10(1H，d，J=7．4 Hz，H-1″)，5．06(1H，d，J=5．2 Hz，4″-OH)，4．60(1H，t，J=5．6 Hz，6″-OH)，3．79(3H，s，OCH3)，3．71(1H，dd，J=13．6，5．2 Hz，H-6″b)，3．50(1H，m，H-6″a)，3．46(1H，m，H-5″)，3．33(1H，m，H-3″)，3．30(1H，m，H-2″)，3．16(1H，m，H-4″)。13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:174．6(C-4)，161．4(C-7)，156．9(C-9)，153．5(C-2)，147．5(C-4')，146．0(C-3')，126．9(C-5)，124．4(C-3)，123．5(C-1')，119．7(C-6')，118．5(C-10)，116．4(C-2')，115．6(C-6)，112．0(C-5')，103．4(C-8)，100．0(C-1″)，77．2(C-5″)，76．5(C-3″)，73．1(C-2″)，69．6(C-4″)，60．6(C-6″)，55．6(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅱ?yàn)槊锂慄S酮7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物Ⅲ:無(wú)色針晶(甲醇)，mp 230～232℃，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，ESI-MS m/z:453［M+Na］+。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz) δ:8．43(1H，s，H-2)，8．06(1H，d，J=8．9 Hz，H-5)，7．54(2H，d，J=8．7 Hz，H-2'，H-6')，7．25(1H，d，J=2．2 Hz，H-8)，7．16(1H，dd，J=8．9，2．2 Hz，H-6)，7．00(2H，d，J=8．7 Hz，H-3'，H-5')，5．42(1H，d，J=4．6 Hz，2″-OH)，5．12(1H，d，J=4．6 Hz，3″-OH)，5．10(1H，d，J=7．4 Hz，H-1″)，5．06(1H，d，J=5．2 Hz，4″-OH)，4．60(1H，t，J=5．6 Hz，6″-OH)，3．79(3H，s，OCH3)，3．72(1H，m，H-6″b)，3．50(1H，m，H-6″a)，3．46(1H，m，H-5″)，3．34(1H，m，H-3″)，3．30(1H，m，H-2″)，3．19(1H，m，H-4″)。13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:174．6(C-4)，161．4(C-7)，159．0(C-4')，157．0(C-9)，153．6(C-2)，130．0(C-2'，C-6')，126．9(C-5)，124．0(C-1')，123．3(C-3)，118．4(C-10)，115．6(C-6)，113．6(C-3'，C-5')，103．4(C-8)，100．0(C-1″)，77．2(C-5″)，76．5(C-3″)，73．1(C-2″)，69．6(C-4″)，60．6(C-6″)，55．8(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅲ為芒柄花素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物Ⅴ:白色粉末(甲醇)，mp 190～191℃，ESI-MS m/z:395 ［M+Na］+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ:6．74(2H，br s，H-3，H-5)，6．54(1H，d，J=15．9，H-α)，6．32(1H，m，H-β)，4．86(1H，d，J=7．4 Hz，H-1')，4．21(2H，dd，J=5．6，1．3 Hz，H-γ)，3．85(6H，s，2，6-OCH3)，3．78(1H，dd，J=12．0，2．4 Hz，H-6'b)，3．66(1H，dd，J=12．0，5．2，Hz，H-6'a)，3．47(1H，m，H-5')，3．42(1H，m，H-3')，3．38(1H，m，H-2')，3．21(1H，m，H-4')。13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ:154．4(C-2，C-6)，135．9(C-1)，135．3(C-4)，131．3(C-α)，130．1(C-β)，105．5(C-3，C-5)，105．4(C-1')，78．4(C-5')，77．8(C-3')，75．8(C-2')，71．4(C-4')，63．6(C-γ)，62．6(C-6')，57．1(2，6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［2］報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅴ為丁香苷。

化合物 Ⅵ:黃褐色油狀物，ESI-MS m/z:127［M+H］+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ:9．52(1H，s，CHO)，7．19(1H，d，J=3．6 Hz，H-3)，6．48(1H，d，J=3．6 Hz，H-4)，4．67(2H，s，H-α)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ:177．7(CHO)，160．9(C-5)，152．2(C-2)，123．1(C-3)，109．9(C-4)，57．4(C-α)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅵ為5-羥甲基糠醛。

化合物Ⅶ:無(wú)色針晶(甲醇)，mp 147～149℃，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，1．01，DMSO)，ESI-MS m/z:487 ［M+Na］+。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:8．92(br s，2'-OH)，7．00(1H，d，J=8．4 Hz，H-5)，6．78(1H，d，J=8．8 Hz，H-6')，6．55(1H，dd，J=8．4，2．4 Hz，H-6)，6．47(1H，d，J=2．4 Hz，H-8)，6．46(1H，d，J=8．8 Hz，H-5')，5．24(1H，d，J=5．0 Hz，2″-OH)，5．03(1H，d，J=4．7 Hz，3″-OH)，4．97(1H，d，J=5．2 Hz，4″-OH)，4．77(1H，d，J=7．5 Hz，H-1″)，4．20(1H，m，H-2a)，3．97(1H，dd，J=10．0，10．0 Hz，H-2b)，3．75(3H，s，4'-OCH3)，3．69(3H，s，3'-OCH3)，3．46(1H，m，H-3)，3．37(1H，m，H-6″b)，3．31(1H，m，H-6″a)，3．25(1H，m，H-5″)，3．21(1H，m，H-3″)，3．19(1H，m，H-2″)，3．13(1H，m，H-4″)，2．93(1H ，dd，J=15．9，10．5 Hz，H-4α)，2．81(1H，dd，J=15．8，4．9 Hz，H-4β)。13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:156．7(C-7)，154．5(C-8a)，151．6(C-4')，148．1(C-2')，136．1(C-3')，130．0(C-5)，121．4(C-6')，120．8(C-1')，115．8(C-4a)，108．8(C-6)，103．9(C-8)，103．2(C-5')，100．7(C-1″)，77．0(C-5″)，76．6(C-3″)，73．2(C-2″)，69．7(C-4″)，69．2(C-2)，60．7(C-6″)，60．2(3'-OCH3)，55．6(4'-OCH3)，31．3(C-3)，29．7(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅶ為(3R)-(-)-2'-羥基-3'，4'-二甲氧基異黃烷 7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物Ⅸ:無(wú)色針晶(甲醇)，mp 219～222℃，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，ESI-MS m/z:383［M+Na］+。1H-NMR(Pyridine-d5，400 MHz)δ:7．78(2H，br s，H-2，H-6)，6．02(1H，d，J=7．2 Hz，H-1')，4．42(1H，dd，J=11．8，2．6 Hz，H-6'b)，4．37(1H，dd，J=12．0，3．5，Hz，H-6'a)，4．35(1H，m，H-5')，4．33(1H，m，H-3')，4．30(1H，m，H-2')，3．98(1H，m，H-4')，3．77(6H，s，3，5-OCH3)。13C-NMR(Pyridine-d5，100 MHz) δ:168．7(COOH)，153．4(C-3，C-5)，139．7(C-4)，127．7(C-1)，108．6(C-2，C-6)，104．2(C-1')，79．0(C-5')，78．5(C-3')，76．0(C-2')，71．6(C-4')，62．6(C-6')，56．5(3，5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅸ為丁香酸葡萄糖苷。

化合物Ⅺ:無(wú)色針晶(甲醇)，ESI-MS m/z:349［M+Na］+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7．80(2H，d，J=7．4 Hz，H-2，H-6)，7．28(2H，t，J=7．5 Hz，H-3，H-5)，7．20(1H，t，J=7．3 Hz，H-4)，6．76(1H，s，H-7)，5．01(1H，d，J=7．6 Hz，H-1')，3．75(1H，dd，J=12．0，2．3 Hz，H-6'b)，3．62(1H，dd，J=12．0，5．4 Hz，H-6'a)，3．48(1H，m，H-2')，3．41(1H，m，H-3')，3．35(1H，m， H-4')， 3．23(1H， m， H-5')。13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ:171．8(C-9)，149．8(C-8)，136．0(C-1)，131．0(C-2，C-6)，129．0(C-3，C-5)，128．6(C-4)，120．1(C-7)，103．7(C-1')，78．6(C-5')，78．5(C-3')，75．7(C-2')，71．4(C-4')，62．7(C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道基本一致，并通過(guò)2D-NMR予以確證，故鑒定化合物Ⅺ為(Z)-cinnamic acid 8-O-β-D-glucopyranoside。

化合物Ⅻ:白色粉末(甲醇)，mp 238～239℃，ESI-MS m/z:284 ［M+H］+。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:10．62(1H，br s，1-NH)，7．93(1H，s，H-8)，6．44(2H，br s，2-NH2)，5．69(1H，d，J=6．0 Hz，H-1')，5．37(1H，d，J=6．0 Hz，2'-OH)，5．10(1H，d，J=4．7 Hz，3'-OH)，5．02(1H，t，J=5．5 Hz，5'-OH)，4．39(1H，dd，J=11．2，5．8 Hz，H-2')，4．08(1H，dd，J=8．4，4．6 Hz，H-3')，3．87(1H，dd，J=8．2，3．8 Hz，H-4')，3．61(1H，m，H-5'b)，3．52(1H，m，H-5'a)。13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:156．7(C-6)，153．6(C-2)，151．3(C-4)，135．5(C-8)，116．7(C-5)，86．3(C-1')，85．2(C-4')，73．7(C-3')，70．3(C-2')，61．4(C-5')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅻ為鳥(niǎo)苷。

化合物ⅩⅢ:黃色粉末(甲醇)，mp 234～235℃，ESI-MS m/z:268 ［M+H］+。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:8．34(1H，s，H-8)，8．12(1H，s，H-2)，7．31(2H，br s，NH2)，5．88(1H，d，J=6．2 Hz，H-1')，5．41(1H，d，J=6．3 Hz，2'-OH)，5．39(1H，d，J=4．7 Hz，3'-OH)，5．15(1H，d，J=4．6 Hz，5'-OH)，4．61(1H，dd，J=11．3，6．1 Hz，H-2')，4．14(1H，dd，J=7．8，4．7 Hz，H-3')，3．96(1H，dd，J=8．0，3．4 Hz，H-4')，3．67(1H，m，H-5'b)，3．55(1H，m，H-5'a)。13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:156．1(C-6)，152．3(C-2)，149．0(C-4)，139．8(C-8)，119．3(C-5)，87．9(C-1')，85．8(C-4')，73．4(C-3')，70．6(C-2')，61．6(C-5')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道一致，故鑒定化合物ⅩⅢ為腺苷。

化合物ⅩⅣ:白色粉末(甲醇)，mp 208～209℃，ESI-MS m/z:167 ［M-H］-。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7．55(2H，m，H-2，H-6)，6．83(1H，d，J=8．7 Hz，H-5)，3．88(3H，s，OCH3)。13CNMR(CD3OD，100 MHz)δ:170．0(COOH)，152．7(C-4)，148．6(C-3)，125．3(C-6)，123．1(C-1)，115．8(C-5)，113．8(C-2)，56．4(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道一致，故鑒定化合物ⅩⅣ為香草酸。

4 結(jié)果與討論

通過(guò)查閱文獻(xiàn)，可以判斷上述14個(gè)化合物中來(lái)源于黨參的有:化合物Ⅴ、Ⅵ、Ⅺ和ⅩⅣ。來(lái)源于黃芪的有:化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ和Ⅹ?；衔铫ⅱ廷邳h參屬和黃芪屬植物中均未見(jiàn)報(bào)道，根據(jù)這些化合物的結(jié)構(gòu)類(lèi)型和生源合成途徑，推測(cè)化合物Ⅸ來(lái)源于黨參，而化合物Ⅷ來(lái)源于黃芪。以上研究結(jié)果為參芪扶正注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定和藥效學(xué)研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

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