基因芯片技術(shù)在中藥腫瘤藥理研究中的應(yīng)用

王珊珊，廖清船，許靜，徐康康（南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京兒童醫(yī)院，南京市210008）

人體是一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，疾病的發(fā)生和發(fā)展必然牽涉到網(wǎng)絡(luò)中的諸多環(huán)節(jié)?；蛐酒夹g(shù)的出現(xiàn)使綜合、系統(tǒng)分析某些生命現(xiàn)象成為可能。它可以同時(shí)進(jìn)行許多基因的檢測(cè)，徹底改變了傳統(tǒng)的分子生物學(xué)方法只能對(duì)某一個(gè)或某幾個(gè)基因進(jìn)行研究的局限。而基因芯片可以從疾病和藥物兩個(gè)角度對(duì)生物體的多個(gè)參量同時(shí)進(jìn)行研究，以發(fā)掘藥物靶點(diǎn)并同時(shí)獲取大量其他相關(guān)信息。因此在這種情況下，任何一元化或相對(duì)一元化的分析方法均不及基因芯片的分析手段更具有優(yōu)勢(shì)[1，2]。

采用基因芯片對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行分析，可隨時(shí)獲取腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)各期與腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)基因的表達(dá)模式，以對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有一個(gè)系統(tǒng)、深入的闡析[3]。現(xiàn)代藥理學(xué)分子水平的研究已明確藥物作用都有其“靶基因”，基因芯片技術(shù)的出現(xiàn)為我們提供了一個(gè)從基因?qū)哟稳嫣接懼兴幠[瘤藥理的契機(jī)[4]?；蛐酒愿咄?、多因素、微型化和快速靈敏的特點(diǎn)而見(jiàn)長(zhǎng)，能夠針對(duì)中藥的多成分、多途徑、多系統(tǒng)、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)進(jìn)行系統(tǒng)深入的研究，為探索中藥抗腫瘤的作用機(jī)制、毒副作用、作用新靶點(diǎn)及藥物篩選等現(xiàn)代中藥研究開(kāi)辟了嶄新的領(lǐng)域。

1 基因芯片技術(shù)概述

基因芯片是融微電子學(xué)、生物學(xué)、物理學(xué)、化學(xué)及計(jì)算機(jī)科學(xué)為一體的高度交叉的新技術(shù)，具有重大的基礎(chǔ)研究?jī)r(jià)值和明顯的產(chǎn)業(yè)化前景，是目前生物技術(shù)的熱點(diǎn)和前沿。基因芯片是將許多特定的DNA寡聚核苷酸或DNA片段（稱為探針）固定在芯片的每個(gè)預(yù)先設(shè)置的區(qū)域內(nèi)，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則進(jìn)行雜交，檢測(cè)對(duì)應(yīng)片段是否存在及其存在量。該技術(shù)可用于基因的功能研究和基因組研究、疾病的臨床診斷和檢測(cè)等方面[5]。在中藥腫瘤藥理研究中，可用基因芯片尋找藥效相關(guān)基因，該芯片既可用于藥效物質(zhì)的檢測(cè)和遺傳多態(tài)性的檢測(cè)，又可用于受檢藥效物質(zhì)作用機(jī)制的研究，同時(shí)還可用于藥效相關(guān)基因的功能研究。

2 基因芯片技術(shù)在中藥腫瘤藥理研究中的應(yīng)用

腫瘤是一種涉及多個(gè)階段、多條通路、多個(gè)基因的病變，基因芯片的發(fā)明和應(yīng)用，為研究腫瘤細(xì)胞或組織中基因表達(dá)的差異及基因表達(dá)差異譜的建立，提供了一種非?？旖?、方便、準(zhǔn)確的方法。中藥抗腫瘤的藥理作用還具有多組分、多途徑、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，采用“利用基因芯片建立基因表達(dá)差異譜”技術(shù)，可以全面研究中藥對(duì)基因表達(dá)水平的影響，從而為揭開(kāi)中藥作用的“黑匣子”提供有效的依據(jù)。

2.1 在中藥抗腫瘤作用機(jī)制研究中的應(yīng)用

藥物發(fā)揮功效主要通過(guò)不同的作用靶點(diǎn)作用于組織細(xì)胞，直接或間接地影響細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)。鑒于中藥抗腫瘤作用機(jī)制的復(fù)雜性，利用高密度的基因芯片檢測(cè)給藥前后基因表達(dá)譜的差異是研究者開(kāi)展中藥腫瘤藥理研究的共同途徑。

2.1.1 在抗腫瘤單體化合物作用機(jī)制研究中的應(yīng)用 陳明偉等[6]采用基因芯片技術(shù)檢測(cè)人參皂苷Rg3對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞基因差異表達(dá)的影響，從基因水平進(jìn)一步探討其作用的靶點(diǎn)。結(jié)果顯示，10-6mol·L-1濃度Rg3對(duì)A549細(xì)胞基因表達(dá)有顯著影響，其中表達(dá)下調(diào)的基因有14個(gè)，分別是原癌基因和抑癌基因TNFAIP3、SAFB和MN1，蛋白翻譯合成基因STIP1和EEF2，既有DNA合成修復(fù)和重組蛋白作用，又有代謝功能的基因POLG、免疫相關(guān)基因CD1及其他功能基因7個(gè)。表達(dá)上調(diào)的基因有10個(gè)，它們是蛋白翻譯合成基因NCOA2、代謝相關(guān)基因POLR3K、細(xì)胞信號(hào)和傳遞蛋白VRK1和KIAA0164、細(xì)胞骨架和運(yùn)動(dòng)基因KIAA0133、HSPG和其他功能基因4個(gè)?？梢?jiàn)，Rg3可同時(shí)作用于A549細(xì)胞多個(gè)靶點(diǎn)。黃益玲等[7]通過(guò)基因表達(dá)譜分析首次提出天花粉蛋白誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的NOP56、TN-FSF10、CASP9、DFFB等62條基因表達(dá)上調(diào)，與細(xì)胞黏附及細(xì)胞間相互作用相關(guān)的COL9A3、MGST3、LGALS3BP等16條基因表達(dá)下調(diào)。這些研究從基因芯片表達(dá)的角度探索中藥的分子層面作用機(jī)制，為進(jìn)一步闡明復(fù)方和復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)奠定了基礎(chǔ)。

2.1.2 在抗腫瘤單味中藥作用機(jī)制研究中的應(yīng)用 王懷宇等[8]應(yīng)用包含1 003條人類基因的cDNA表達(dá)譜芯片檢測(cè)雄黃作用于急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株NB4前后基因表達(dá)的變化。NB4細(xì)胞在雄黃作用12 h后，共有9條基因上調(diào)，37條基因下調(diào)，其中2條參與蛋白酶體降解途徑的基因顯著上調(diào)，多條與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、RNA加工及蛋白質(zhì)合成相關(guān)的基因下調(diào)。提示PSMC2、PSMD1及ITGB1基因表達(dá)的改變可能與NB4細(xì)胞的分化和凋亡有密切關(guān)系。

Iizuka N等[9]對(duì)黃連水提物及單體成分小檗堿的作用進(jìn)行了對(duì)比研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥材的水提液要比純單體成分在殺傷腫瘤細(xì)胞方面更有效，并且借助含有11 000個(gè)基因的單核苷酸序列分析癌細(xì)胞系給藥前后基因表達(dá)譜的差異，闡明兩者的分子機(jī)制有不同之處。其中，癌細(xì)胞中的RECQL基因（可通過(guò)修復(fù)癌細(xì)胞DNA而引起多藥耐藥性）表達(dá)水平的增高與耐受小檗堿呈正相關(guān)，但對(duì)黃連水提液則無(wú)此效應(yīng)；另外拓樸異構(gòu)酶Ⅱα（TOP2A）的mRNA水平也與耐受小檗堿呈正相關(guān)，對(duì)黃連水提液也無(wú)此效應(yīng)。原因可能是藥材的提取液中含有多種小檗堿的衍生物，它們對(duì)癌細(xì)胞的拓樸異構(gòu)酶Ⅱ和拓樸異構(gòu)酶Ⅰ都能起作用，因此從更深層次上解釋了黃連水提液抗癌細(xì)胞效果強(qiáng)于小檗堿單體的藥理機(jī)制。

2.1.3 在抗腫瘤中藥復(fù)方作用機(jī)制研究中的應(yīng)用 基因芯片可以將中藥復(fù)方多組分、多靶點(diǎn)、多途徑的作用特點(diǎn)與基因表達(dá)聯(lián)系起來(lái)，比較各自不同的表達(dá)差異譜，根據(jù)不同配伍組方對(duì)應(yīng)基因靶點(diǎn)的相互作用，分析各組成復(fù)方單藥之間的密切關(guān)系，闡明藥物作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及內(nèi)在的配伍規(guī)律。趙愛(ài)光等[10]通過(guò)cDNA微陣列的方法，初步研究健脾類中藥胃腸安復(fù)方在體內(nèi)對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響。對(duì)照組與胃腸安復(fù)方組間共有45個(gè)2倍以上差異顯著的表達(dá)信號(hào)，分別為24個(gè)上調(diào)基因和21個(gè)下調(diào)基因，進(jìn)行初步分類后發(fā)現(xiàn)胃腸安復(fù)方組對(duì)SGC-7901細(xì)胞基因表達(dá)的影響可能涉及癌基因、細(xì)胞分裂相關(guān)基因、分化/發(fā)育相關(guān)基因、調(diào)亡基因、細(xì)胞受體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫相關(guān)、代謝相關(guān)及其他基因等10類。沈曄華等[11]研究了中藥清胰消積方對(duì)裸鼠體內(nèi)人胰腺癌SW1990細(xì)胞移植瘤的抑瘤作用，并利用基因表達(dá)譜芯片探索其作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)癌基因及其相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)、改變腫瘤細(xì)胞蛋白合成等可能是其作用機(jī)制。中藥復(fù)方成分復(fù)雜，采用傳統(tǒng)的研究方法，或從影響細(xì)胞增殖、或從影響凋亡、或從免疫調(diào)節(jié)等單個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行研究，工作缺乏系統(tǒng)性，也無(wú)法探求其主要的作用環(huán)節(jié)和靶點(diǎn)或?qū)ζ涠嘀刈饔弥g有無(wú)內(nèi)在的聯(lián)系作出令人較為信服的解釋。cDNA微陣列的出現(xiàn)，使探討中藥復(fù)方對(duì)腫瘤細(xì)胞在基因表達(dá)水平的主要作用環(huán)節(jié)和靶點(diǎn)成為可能。

2.2 在抗腫瘤中藥毒副作用研究中的應(yīng)用

某些具有抗腫瘤藥理效應(yīng)的中藥，也可能同時(shí)干擾正常細(xì)胞組織代謝的其他環(huán)節(jié)而導(dǎo)致毒副作用，某些抗腫瘤中藥中的毒性成分又是有效成分。因此，了解其劑量與毒副作用之間的關(guān)系非常重要。觀察藥物處理后細(xì)胞、組織和器官基因表達(dá)的差異，可以對(duì)藥物的毒性程度及代謝特點(diǎn)有初步的了解。將可能受中藥毒性影響的基因，包括凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控、藥物轉(zhuǎn)化和代謝、DNA復(fù)制及修復(fù)、熱休克、氧化應(yīng)激反應(yīng)等相關(guān)的基因，制備成基因芯片，從動(dòng)物或暴露于藥物的培養(yǎng)組織中提取的相匹配遺傳物質(zhì)與芯片上的探針結(jié)合，根據(jù)檢測(cè)到的信息分析藥物中的有毒成分，從而采取防護(hù)措施，控制劑量范圍，尋找拮抗藥物等，以避免毒副作用的發(fā)生[12]。

2.3 在發(fā)現(xiàn)中藥抗腫瘤新靶點(diǎn)中的應(yīng)用

在藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)和選擇合適的藥物靶點(diǎn)是藥物開(kāi)發(fā)的第一步，也是藥物篩選和藥物定向合成的關(guān)鍵因素之一。藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)與藥物作用機(jī)制研究是生物芯片技術(shù)在藥物研發(fā)中應(yīng)用最為廣泛的一個(gè)領(lǐng)域。例如，鬼臼亞乙苷是p53活化拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的抑制劑，在臨床上作為一種抗腫瘤藥物。Wang Y等[13]經(jīng)用鬼臼亞乙苷作用人成骨肉瘤細(xì)胞系U2-OS后，根據(jù)不同的時(shí)間間隔分別提取細(xì)胞mRNA，用寡核苷酸芯片測(cè)定6 591條mRNA表達(dá)的變化，發(fā)現(xiàn)62條mRNA表達(dá)有變化。通過(guò)選取其中12條基因作進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)有2條是已知的p53調(diào)控基因（WAF1/p21和PCNA），有2條是新的p53靶基因，其余的與p53無(wú)關(guān)。在實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，他們提出了介導(dǎo)鬼臼亞乙苷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，這使我們又多獲得一種抗腫瘤藥物的靶點(diǎn)。

2.4 在中藥抗腫瘤新藥篩選中的應(yīng)用

用基因芯片大規(guī)模平行分析基因表達(dá)的情況，從而進(jìn)行新藥的研究和開(kāi)發(fā)可以節(jié)省大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，甚至臨床試驗(yàn)，還可進(jìn)一步分析藥物對(duì)靶細(xì)胞及非靶細(xì)胞的毒性作用，確定藥物臨床應(yīng)用的可行性及最佳的用藥劑量，從而為新藥的開(kāi)發(fā)提供一種高速度、高靈敏度的安全指標(biāo)，降低用藥風(fēng)險(xiǎn)，抗腫瘤中草藥的篩選與開(kāi)發(fā)是研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域[14]。

2.4.1 中藥抗腫瘤新藥篩選研究近況 建立腫瘤疾病的基因芯片，并以此檢測(cè)藥物作用后基因的表達(dá)差異，從而對(duì)單味藥的各種化學(xué)成分或不同的復(fù)方進(jìn)行篩選和分析，找出確定的有效成分或合適的組方供進(jìn)一步進(jìn)行新藥研究。Hara A等[15]利用寡核苷酸芯片分析抗腫瘤草藥黃連根及其8個(gè)組成分子的12 600個(gè)基因，經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)處理，最終確定黃連素是黃連抗增殖的效應(yīng)部位，并佐證了DNA芯片用于單味中藥的效應(yīng)部位分析。

托婭等[16]利用基因芯片技術(shù)，以人胃癌BGC823細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞（EC）對(duì)中藥提取物T3進(jìn)行篩選。發(fā)現(xiàn)T3對(duì)2種細(xì)胞系的基因表達(dá)譜均有明顯影響，其抗腫瘤的機(jī)制是多途徑、多方面的，可能通過(guò)阻斷介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引起一系列級(jí)鏈反應(yīng)，最終使腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，并且對(duì)抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移有一定的作用。利用高密度芯片技術(shù)可以從中藥中尋找新的有效成分，是目前一大趨勢(shì)。

2.4.2 中藥抗腫瘤新藥篩選研究思路及方法 腫瘤的發(fā)生除腫瘤細(xì)胞自身存在眾多的基因表達(dá)外，它更是一個(gè)全身性疾病的局部反應(yīng)，是機(jī)體作為一個(gè)生物系統(tǒng)的整體平衡失調(diào)的結(jié)果。將腫瘤作為全身性病變進(jìn)行藥物篩選，應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究中藥在腫瘤發(fā)生不同階段中的相關(guān)靶組織的基因變化，從研究其能提高哪些基因的表達(dá)，抑制哪些基因的表達(dá)著手，了解與中藥能起反應(yīng)的基因。用基因表達(dá)差異譜篩選中藥抗腫瘤藥物，為中藥現(xiàn)代化研究提供了一個(gè)全新的思路和方向[17]。其方法為：（1）建立腫瘤的動(dòng)物模型，尋找腫瘤相關(guān)靶組織：建立腫瘤的動(dòng)物模型，設(shè)立相同數(shù)量的模型組和對(duì)照組。根據(jù)中醫(yī)整體觀的思想，選取動(dòng)物機(jī)體主要組織，利用基因芯片，通過(guò)組織中總RNA的提取、標(biāo)記探針的制備、與芯片的雜交、芯片掃描、計(jì)算機(jī)圖像數(shù)據(jù)處理后，即可建立各組織的腫瘤-正?；虮磉_(dá)譜。排除基因表達(dá)無(wú)差異的組織，有差異組織即為腫瘤的相關(guān)靶組織。（2）建立腫瘤發(fā)生不同階段的相關(guān)靶組織的疾病-正?；虮磉_(dá)差異譜：根據(jù)腫瘤發(fā)生的不同階段，用基因芯片對(duì)相關(guān)靶組織進(jìn)行檢測(cè)，建立腫瘤發(fā)生的不同階段相關(guān)靶組織的疾病-正?；虮磉_(dá)差異譜，為全面認(rèn)識(shí)腫瘤，發(fā)現(xiàn)新的病理機(jī)制提供依據(jù)。（3）建立藥物-對(duì)照基因表達(dá)差異譜：有根據(jù)地選擇一系列中藥單體化合物、單味中藥和中藥復(fù)方，設(shè)立低、中、高3個(gè)劑量組和正常對(duì)照組，觀察其在腫瘤發(fā)生的不同階段中對(duì)腫瘤的相關(guān)靶組織基因表達(dá)的影響，建立藥物-對(duì)照基因表達(dá)差異譜，用于中藥抗腫瘤藥物的篩選。

采用高通量基因芯片篩選方法快速篩選出有效成分，并快速完成藥理學(xué)試驗(yàn)，利用計(jì)算機(jī)分析各種成分間相互作用關(guān)系，繪制出中藥復(fù)雜成分間相互作用的圖譜，觀察它們對(duì)基因表達(dá)的影響，對(duì)認(rèn)識(shí)中藥作用的靶基因，闡明抗腫瘤中藥的作用機(jī)制、毒副作用、作用新靶點(diǎn)及藥物篩選是非常有效的手段，可大大加快中藥現(xiàn)代化進(jìn)程。

3 基因芯片存在的缺陷

基因芯片已廣泛應(yīng)用于人體腫瘤分析，其高速度、高效率和大信息量的特點(diǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)基因分析法。但基因芯片在腫瘤研究中也有缺點(diǎn)，如Northern雜交出的差異表達(dá)基因經(jīng)microarray篩選有可能漏檢；另外DNA芯片上原位合成探針難免有錯(cuò)誤核苷酸摻入及混入雜質(zhì)，使整個(gè)雜交背景增高，降低特異性。可見(jiàn)，如何排除這些無(wú)關(guān)基因的影響也是一個(gè)目前研究的重要課題。

基因芯片技術(shù)是一種非常行之有效的手段，但如何正確地分析所得的大量信息存在一定的困難，主要是缺乏足夠的生物信息學(xué)知識(shí)支持。此外，細(xì)胞行使功能的是蛋白質(zhì)等成分，由DNA到mRNA再到蛋白質(zhì)這個(gè)基因表達(dá)的全過(guò)程有許多的調(diào)控因素，僅僅明白其中的一段是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠全面的。而在許多情況下，細(xì)胞內(nèi)mRNA的含量并不與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)；蛋白質(zhì)只需要經(jīng)過(guò)磷酸化/去磷酸化等簡(jiǎn)單的修飾，就可以極大地改變活性，而基因表達(dá)的變化則受到許多復(fù)雜因素的影響。

4 結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)，分子生物學(xué)知識(shí)和技術(shù)突飛猛進(jìn)，取得了巨大成就，為生命科學(xué)領(lǐng)域注入了新的活力。分子生物學(xué)是從微觀的分子水平研究生命，這與以“整體觀念”為指導(dǎo)思想的中醫(yī)藥學(xué)存在極大的差異。如何用中醫(yī)藥理論解讀分子生物學(xué)技術(shù)所取得的海量數(shù)據(jù)，如何用這些數(shù)據(jù)詮釋和發(fā)展中藥藥理學(xué)，是分子生物學(xué)與中藥藥理學(xué)融合的根本所在，也是難點(diǎn)所在。在中藥藥理學(xué)中應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)必須以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，以現(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究為基礎(chǔ)，借鑒西藥藥理學(xué)現(xiàn)代研究思路，綜合現(xiàn)代植物化學(xué)、分析技術(shù)，運(yùn)用系統(tǒng)生物學(xué)知識(shí)，實(shí)現(xiàn)從理論到技術(shù)的系統(tǒng)結(jié)合。中醫(yī)藥理論及中藥和其復(fù)方的特殊性，使得探索的過(guò)程充滿艱辛，但分子生物學(xué)的引入必然引起中藥藥理學(xué)質(zhì)的飛躍，促進(jìn)中藥腫瘤藥理規(guī)范發(fā)展也是毋庸置疑的。只有當(dāng)基因芯片同其他技術(shù)有機(jī)結(jié)合時(shí)，才能在中醫(yī)藥現(xiàn)代化這一系統(tǒng)工程中發(fā)揮最佳作用。

[1] Waddell N.Microarray-based DNA profiling to study genomic aberrations[J].IUBMB Life，2008，60（7）：437.

[2] 王廣良，陳成彬，高建明，等.細(xì)胞周期相關(guān)基因微陣列在中藥抑制肝癌細(xì)胞增殖作用機(jī)理研究中的應(yīng)用[J].中國(guó)中藥雜志，2005，30（1）：50.

[3] 劉秀珍，張如意，欒海云，等.基因芯片技術(shù)及應(yīng)用[J].濱州醫(yī)學(xué)院報(bào)，2007，30（1）：57.

[4] 龔麗紅，韓鳳娟，侯麗輝，等.基因技術(shù)在中藥抗癌作用機(jī)理研究中的應(yīng)用[J].中醫(yī)藥信息，2007，24（2）：42.

[5] 孫 蓉，張麗美，伊建偉，等.分子生物學(xué)技術(shù)在中藥毒理學(xué)研究中的應(yīng)用前景[J].中國(guó)藥物警戒，2006，3（6）：339.

[6] 陳明偉，倪 磊，趙小革，等.人參皂苷Rg3對(duì)腫瘤血管生長(zhǎng)調(diào)控因子蛋白表達(dá)抑理作用的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2005，30（5）：357.

[7] 黃益玲，胡火軍，黃利鳴，等.天花粉蛋白誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2007，23（1）：99.

[8] 王懷宇，劉陜西.應(yīng)用基因芯片研究雄黃對(duì)NB4細(xì)胞的作用[J].中國(guó)中藥雜志，2002，27（8）：600.

[9] Iizuka N，Oka M，Yamamoto K，et al.Identification of common or distinct genes related to antitumor activities of a medicinal herb and its major component by oligonucleotide microarray[J].Int J Cancer，2003，107（4）：666.

[10] 趙愛(ài)光，趙海磊，楊金坤，等.cDNA微陣列技術(shù)檢測(cè)胃腸安復(fù)方對(duì)人胃癌細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2004，12（2）：67.

[11] 沈曄華，劉魯明，陸 燕，等.清胰消積中藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性胰腺癌基因表達(dá)的影響[J].中國(guó)癌癥雜志，2005，15（5）：454.

[12] 唐先明，王振月，趙海鵬，等.基因芯片技術(shù)在中藥基因組學(xué)研究中的應(yīng)用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（5）：1 097.

[13] Wang Y，Rea T，Bian J，et al.Identification of the genes responsive to etoposide-induced apoptosis：application of DNA chip technology[J].FEBS Lett，1999，445（2-3）：269.

[14] 陶 嫄，韓 俊，于小麗，等.基因芯片技術(shù)在中藥研發(fā)中的應(yīng)用[J].黑龍江醫(yī)藥，2009，22（4）：458.

[15] Hara A，Iizuka N，Hamamoto Y，et al.Molecular dissection of a medicinal herb with anti-tumor activity by oligonucleotide microarray[J].Life Sci，2005，77（9）：991.

[16] 托 婭，蘇秀蘭，路桂榮，等.基因芯片在抗腫瘤血管生成中草藥相關(guān)基因篩選中的應(yīng)用[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，23（3）：273.

[17] 荊志偉，王 忠，高思華，等.基因芯片技術(shù)與中藥研究——中藥基因組學(xué)[J].中國(guó)中藥雜志，2007，32（4）：289.