流感病毒檢驗(yàn)方法對(duì)比觀察

汪偉生

目前流感病毒實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法主要有膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)和RT－PCR檢測(cè)技術(shù)，可用于早期流感檢驗(yàn)且檢測(cè)時(shí)間短[1]。我們于2009年11月對(duì)某小學(xué)內(nèi)暴發(fā)的流感疫情中的病例分別采用GICA和RT－PCR檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn)，觀察這兩種方法檢驗(yàn)結(jié)果的一致性，探討其在突發(fā)性公共衛(wèi)生事件以有臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 樣本來(lái)源 2009年11月，我市某小學(xué)發(fā)生流感局部顯性，共有38例出現(xiàn)急性呼吸道感染，其中男20例，女18例，年齡6～10歲。患兒表現(xiàn)為發(fā)熱(體溫超過(guò)38℃)、不同程度的咳嗽和咽痛。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 流感膠體金快速診斷試劑條(由美國(guó)基代爾公司生產(chǎn))，RNA提取試劑Rneasy Mini Kit、RNA擴(kuò)增試劑One Step RT－PCR Kit、(均由 QIAGEN 公司生產(chǎn))，PCR 擴(kuò)增儀MJ Research PTC-200(由美國(guó)MJ RESEARCH公司生產(chǎn))。

1.3 樣本選取方法 用壓舌板抵信患者舌根部，用2根咽拭子同時(shí)并列探入咽部，取扁桃體隱窩處的上皮細(xì)胞組織。一根咽拭子浸入pH值為7.4～7.6的Hank’s液中，另一根咽拭子浸入膠體金快速檢測(cè)裂解液中。

1.4 實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)方法

1.4.1 GICA法 充分?jǐn)嚢枋⒂袠颖镜募?xì)胞裂解液，以吸管取3～4滴裂解液滴入檢測(cè)卡加樣孔中，于15 min后觀察檢驗(yàn)結(jié)果。如檢測(cè)區(qū)與對(duì)照區(qū)分別一條紅色帶，表明結(jié)果為陽(yáng)性;如對(duì)照區(qū)有一條紅色帶而檢測(cè)區(qū)無(wú)紅色帶，表明結(jié)果為陰性。

1.4.2 RT-PCR法 取100 μl混合均勻的采樣液，注入微量離心管內(nèi)用于提取樣本核酸。在PCR擴(kuò)增儀中放入PCR反應(yīng)管，用凝膠成像系統(tǒng)分析觀察檢測(cè)結(jié)果及其電泳表現(xiàn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以χ2檢驗(yàn)，P＜0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

采用GICA法進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)，38份樣本中28份檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率73.68%。采用RT-PCR法結(jié)果，38份樣本中30份檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率78.95%。經(jīng)比較，GICA法與RT-PCR法樣本檢驗(yàn)結(jié)果一致的樣本數(shù)為25份，檢驗(yàn)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

流感癥狀與普通感冒極為相似，很容易被誤診并在人群密集場(chǎng)所形成暴發(fā)式的疫情，引起濫用抗生素等一系列問(wèn)題[2]。流感病毒檢驗(yàn)的傳統(tǒng)方法是進(jìn)行病毒培養(yǎng)，可用于病毒分型和抗原變異分析。但是這種方法檢測(cè)歷時(shí)長(zhǎng)，操作步驟復(fù)雜，易受檢驗(yàn)人員素質(zhì)因素的影響。RT-PCR檢驗(yàn)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件有一定的要求，需要借助大型檢驗(yàn)儀器，檢驗(yàn)成本高[3]。GICA檢驗(yàn)技術(shù)是一種新型的以膠體金為示蹤標(biāo)記物用于檢驗(yàn)抗原抗體反應(yīng)技術(shù)。這一技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便、檢驗(yàn)用時(shí)短、成本低，不易受人為因素影響等突出優(yōu)點(diǎn)。在本組資料中，GICA法的陽(yáng)性率略低于RT-PCR法，但檢驗(yàn)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？傊?，GICA檢驗(yàn)方法是流感病毒疫情與臨床檢驗(yàn)的有價(jià)值的篩查手段。

[1]中國(guó)疾病預(yù)防控制中心.全國(guó)流感/人禽流感監(jiān)測(cè)實(shí)施方案(2005～2010年度).15.

[2]朱玉芝，楊明，蘇楊.流感病毒快速檢測(cè)分離鑒定新技術(shù)的應(yīng)用.中國(guó)公共衛(wèi)生管理，2006，22(3):233-2341

[3]尤鳳興，居麗雯，張敬平，等.流感病毒快速檢測(cè)特異性和敏感性研究.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，24(8):598-601.