生化分析儀總膽汁酸試劑的攜帶污染對總二氧化碳測定的干擾分析

唐 芳,何文軍,尹向陽,唐林國

(1.廣東省廣州市人口和計(jì)劃生育科學(xué)研究所中心實(shí)驗(yàn)室,廣州 510410;2.廣東省中醫(yī)院芳村分院檢驗(yàn)科,廣州 510370）

在生化分析儀的使用過程中,試劑間的攜帶污染問題長期存在[1-3],其隱蔽性強(qiáng),往往是導(dǎo)致錯誤結(jié)果甚至是引起誤診的一個重要原因,在實(shí)際工作中表現(xiàn)為某一項(xiàng)目的測定結(jié)果經(jīng)常偏低或偏高,或出現(xiàn)試劑不穩(wěn)定現(xiàn)象[4]。因此試劑間攜帶污染問題不容忽視。本科使用羅氏COBAS 400全自動生化分析儀原裝配套試劑檢測血清總二氧化碳(total carbon dioxide,TCO2)時,曾出現(xiàn)上午8:00校準(zhǔn)TCO2,第2天上午8:00如不再行校準(zhǔn),質(zhì)控結(jié)果偏低甚至失控的現(xiàn)象,而使用同型號儀器與試劑的另一家醫(yī)院卻不存在此問題。分析發(fā)現(xiàn)本科采用羅氏COBAS 400全自動生化分析儀開展的肝功能項(xiàng)目中,總膽汁酸(total bile acid,TBA)與 TCO2均使用409 nm波長,TBA試劑在管道中不易沖洗,為了解是否TBA對TCO2試劑產(chǎn)生干擾,進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)。

表1 TBA試劑組分與不同樣本混合后的TCO2檢測結(jié)果(mmo l/L)

表2 調(diào)整前后校準(zhǔn)周期及室內(nèi)質(zhì)控CV值的比較

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器 409 nm酶法TCO2試劑及TCO2校準(zhǔn)液(25 mmo l/L)由羅氏公司提供(原裝配套);TBA試劑(循環(huán)酶法)由東歐公司提供;TCO2質(zhì)控血清由英國RANDOX公司提供;COBAS 400全自動生化分析儀為羅氏公司產(chǎn)品。

1.2 方法 (1)分別將TBA-R1、TBA-R2試劑各200μL作為待測標(biāo)本檢測TCO2;(2)分別檢測TCO2校準(zhǔn)液、TCO2質(zhì)控血清、患者血清中TCO2;(3)分別將 TCO2校準(zhǔn)液、TCO2質(zhì)控血清、患者血清與R1試劑各100μL按比例 1∶1混合后檢測TCO2;(4)分別將 TCO2校準(zhǔn)液、TCO2質(zhì)控血清、患者血清與R2試劑各100μL混合后檢測TCO2;(5)按試劑應(yīng)用比例,分別將其與 TCO2校準(zhǔn)液 ,TCO2質(zhì)控血清,患者血清按(3∶1∶4)混合(即R1:90μL,R2:30μL,TCO2校準(zhǔn)液/TCO2質(zhì)控血清/患者血清:120μL)進(jìn)行檢測;(6)取40例患者血清,每例血清先采用COBAS 400全自動生化分析儀檢測TBA后,再檢測TCO2,計(jì)算40例患者血清TCO2的平均值①,然后在不測TBA情況下,直接檢測40例血清標(biāo)本的 TCO2,計(jì)算此時TCO2的平均值②。上述步驟均重復(fù)2次,取平均值。將測試項(xiàng)目 TCO2置于 TBA之前,設(shè)置附加清洗程序(每次加完TBA試劑后用專用清洗液和去離子水各清洗2次),統(tǒng)計(jì)調(diào)整參數(shù)前后各6個月的TCO2室內(nèi)質(zhì)控變異系數(shù)(coefficient of variation,CV)值,比較調(diào)整前后的校準(zhǔn)周期。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件對40例患者血清標(biāo)本TCO2的平均值①和平均值②結(jié)果進(jìn)行成組t檢驗(yàn),以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

TBA各試劑組分與不同樣本混合后TCO2的檢測結(jié)果見表1。TBA-R2試劑對 TCO2結(jié)果影響最大,其中,對 TCO2質(zhì)控血清的TCO2檢測結(jié)果影響尤為明顯。40例患者血清標(biāo)本,先測 TBA,再測TCO2所得的平均值①為20.2 mmol/L,不測TBA而直接檢測TCO2所得的平均值②為23.5 mmo l/L,平均值①和平均值②比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),提示TBA試劑所攜帶的污染對TCO2結(jié)果有影響。調(diào)整前后校準(zhǔn)周期及室內(nèi)質(zhì)控CV值見表2,調(diào)整測試順序和設(shè)置附加清洗程序后TCO2試劑穩(wěn)定性得到保證,調(diào)整前校準(zhǔn)周期為1 d,調(diào)整后為7 d,調(diào)整前后室內(nèi)質(zhì)控CV值結(jié)果接近。

3 討 論

在使用生化分析儀的過程中,試劑針以及管道不可避免要同各種不同的試劑接觸[5-6]。一般的生化項(xiàng)目分析僅需要幾微升體積的標(biāo)本,而試劑的加樣體積往往需要幾十微升至幾百微升,當(dāng)遇到較難清洗的試劑時,常規(guī)的方式難以徹底清洗干凈。如果前一個分析項(xiàng)目的試劑組分中含有干擾下一個分析項(xiàng)目的成分,就極易造成分析項(xiàng)目間的試劑攜帶污染[7]。

生化分析儀在使用過程中,不同檢測項(xiàng)目間會存在交叉污染。檢測人員需了解相鄰檢測項(xiàng)目是否存在干擾或被干擾的可能[8]。COBAS 400全自動生化分析儀采用的試劑除TBA為開放試劑外,其余均為原裝配套試劑,R1、R2試劑使用同一試劑針。采用409 nm酶法檢測TCO2,即利用磷酸烯醇式丙酮羧化酶催化樣本中的TCO2生成草酰乙酸和磷酸,草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶催化下形成蘋果酸,同時還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinam ide adenine dinucleotide,reduced,NADH)類似物氧化成NAD+類似物,在409 nm波長處可檢測吸光度的下降值,樣品中TCO2含量與吸光度成正比,與TBA測定使用了相同的波長[9-11],TBA試劑成分的殘留對TCO2試劑產(chǎn)生影響,導(dǎo)致后者不穩(wěn)定,影響檢測結(jié)果。盡管 COBAS 400全自動生化分析儀使用1次性比色杯,而管道內(nèi)并未用大量去離子水沖洗,導(dǎo)致TBA試劑在管道中殘留,這是試劑污染產(chǎn)生的重要原因。

本實(shí)驗(yàn)提示TBA試劑對血清TCO2的測定有明顯干擾,其中 R1試劑對 TCO2的影響較R2小,兩者混合后影響有所減少,R1試劑的吸樣量為幾百微升,而R2試劑的吸樣量僅為幾十微升,兩者用量懸殊也可能是本實(shí)驗(yàn)試劑攜帶污染影響降低的原因之一。調(diào)整附加清洗程序的順序后此類現(xiàn)象消失,質(zhì)控情況明顯好轉(zhuǎn)。這種通過調(diào)整測試順序和設(shè)置附加清洗程序的方法,延長TCO2校準(zhǔn)周期,質(zhì)控CV值同每天校準(zhǔn)一次時無明顯差異,達(dá)到了預(yù)期效果,保證了在1個質(zhì)控期(24 h)內(nèi)結(jié)果的準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性,從而延長TCO2校準(zhǔn)周期,減少失控次數(shù),達(dá)到了保證質(zhì)量的同時,節(jié)約了人力和試劑成本。

[1] 胡亞遠(yuǎn),沈舜欽.生化自動分析技術(shù)的現(xiàn)狀及發(fā)展方向[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2007,20(4):375-394.

[2] 粟文堂,楊華喜,劉雯.Dimension AR全自動生化分析儀CO2電極測血清總CO2的應(yīng)用及評價(jià)[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2007(9):1122-1123.

[3] 張秀明,李健齋,魏明竟,等.現(xiàn)代臨床生化檢驗(yàn)學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2001:759-765.

[4] 張國偉,張少鋒.雅培C8000生化分析儀總蛋白試劑的攜帶污染對血清鎂測定的干擾及對策[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2007,22(6):749-750.

[5] 顧國寶,陳潔,李燕,等.全自動生化儀使用中項(xiàng)目間的交叉污染的探討[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2002,17(3):176-177.

[6] 陳繼中,李旭光,唐吉斌.試劑攜帶污染對血清總膽汁酸測定結(jié)果的影響及消除措施[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2006,21(3):228-230.

[7] 蔣興亮,任娟.雙試劑溴甲酚綠法測定清蛋白的臨床評價(jià)[J].重慶醫(yī)學(xué),2009,38(4):454-455.

[8] 李健,秦甦.日立7060-C生化分析儀使用中交叉污染的研究[J].重慶醫(yī)學(xué),2005,34(3):435.

[9] 丁振若,于文彬,蘇明權(quán),等.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2007:681-682.

[10]韓志鈞,黃志鋒,盧業(yè)成,等.臨床化學(xué)常用項(xiàng)目分析法[M].3版.沈陽:遼寧科學(xué)技術(shù)出版社,2005:357-377.

[11]Lynch MB.The measurement of total carbon dioxide(tCO2)in b lood specimens[J].Am JKidney Dis,2001,37(5):1106-1108.