益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方對(duì)PCOS模型大鼠糖、脂代謝的影響※

● 陳 芊 張 斌 孫 選 孫云松 徐慧軍

益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方對(duì)PCOS模型大鼠糖、脂代謝的影響※

● 陳 芊 張 斌 孫 選 孫云松 徐慧軍

目的:觀察中藥益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方對(duì)PCOS模型大鼠胰島素抵抗及血糖、血脂的影響，以了解該方對(duì)PCOS糖脂代謝的影響，試圖探求其治療機(jī)理。方法:24日齡Wistar大鼠進(jìn)行皮下埋植左炔諾孕酮(左旋18－甲基炔諾酮硅膠棒)結(jié)合皮下注射hCG造模，分組灌服生理鹽水、二甲雙胍、中藥15天后，觀察各組大鼠體重變化及血空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)的水平。結(jié)果:PCOS模型大鼠體重增加幅度明顯大于正常組，血FBG、FINS、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA－IR)、TG、TC和LDL升高，HDL－C降低，運(yùn)用中藥益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方中高劑量后，模型大鼠體重增加量與正常大鼠相近，血HDL－C升高，其它血值明顯下降。結(jié)論:益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方可改善胰島素抵抗和高胰島素血癥、糖脂代謝紊亂，控制肥胖，促進(jìn)排卵，恢復(fù)卵巢功能。

益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方 多囊卵巢 胰島素抵抗 血糖 血脂

多囊卵巢綜合征(Polycysticovariansyndrome，PCOS)是一組以慢性無(wú)排卵、卵巢多囊性改變等為特征的綜合征候群，是育齡婦女群體高發(fā)的一種疾病，不僅涉及生殖系統(tǒng)，直接影響女性的生育功能，而且是一種代謝綜合征，常發(fā)生高胰島素血癥(High Insulin，HI)、高血脂、糖尿病和心血管疾病，在治療上涉及月經(jīng)失調(diào)、生育問(wèn)題、內(nèi)膜增生、遠(yuǎn)期代謝合并征等多學(xué)科問(wèn)題，因此隨著研究的深入，PCOS已經(jīng)超出了婦科疾病的范疇，其病理機(jī)制涉及到遺傳、內(nèi)分泌、免疫、代謝等多個(gè)系統(tǒng);而其給患者所造成的身心危害也更加引起人們的關(guān)注，是威脅到患者一生的疾病。至今醫(yī)學(xué)界對(duì)于該病的病因未達(dá)成共識(shí)，中醫(yī)藥的多系統(tǒng)調(diào)理、多靶點(diǎn)作用及整體觀念、辨證論治使其在治療PCOS方面存在獨(dú)特優(yōu)勢(shì)和巨大潛力，本研究旨在通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方對(duì)PCOS模型大鼠胰島素抵抗及血糖、血脂的影響，以了解該方對(duì)PCOS糖脂代謝的影響，試圖探求其治療機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品、儀器和試劑 益腎調(diào)肝湯I(xiàn)號(hào)方:山茱萸、菟絲子、仙靈脾、當(dāng)歸、柴胡、白術(shù)、山藥、陳皮、茯苓等，益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方:I號(hào)方基礎(chǔ)上加炮山甲、鱉甲等，中藥由青島市海慈醫(yī)院藥劑科提供。鹽酸二甲雙胍片:上海信誼九福藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H31022081，規(guī)格0.25g，批號(hào)081113。左旋18－甲基炔諾酮硅膠棒產(chǎn)自上海達(dá)華藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H10970174，每根硅膠棒含75mg左旋18－甲基炔諾酮，規(guī)格 39mm×2.4mm，批號(hào)080528。注射用hCG購(gòu)自廣東麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H44020674，規(guī)格1000IU/支，生產(chǎn)批號(hào):081102。顯微鏡:日本Olympus公司生產(chǎn)(型號(hào)CX31)，分析天平:上海精科天平公司生產(chǎn)TG328A型。大鼠卵泡刺激素(FSH)、黃體生成激素(LH)、雌二醇(E2)、睪酮(T)微粒子酶聯(lián)免疫測(cè)定法(MEIA)試劑均由美國(guó)Abbott公司(Abbott Laboratories)提供。全自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀:美國(guó)Abbott公司提供，儀器型號(hào)為AXSYMPLUS。

1.2 實(shí)驗(yàn)造模［1，2］選 24日齡大鼠體重(45～55g)之間Wistar雌性大鼠(青島市動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(魯)20030010)，麻醉后皮下埋植左炔諾孕酮(左旋18－甲基炔諾酮硅膠棒)3mm/只，3d后(27日齡)實(shí)驗(yàn)組每天皮下注射hCG 1.5 IU，2次/日，共9天;對(duì)照組大鼠27日齡始每日頸背部皮下注射與實(shí)驗(yàn)組等量生理鹽水，共9天。采用陰道細(xì)胞學(xué)檢查來(lái)判定是否造模成功。

1.3 分組給藥 選擇造模成功60只大鼠及未造模10只大鼠，分7組，未造模10只大鼠為正常對(duì)照組(Ⅰ組);造模的60只大鼠隨機(jī)分為6小組，每組10只。依據(jù)人與各種動(dòng)物以及各種動(dòng)物之間用藥劑量換算系數(shù)表?yè)Q算實(shí)驗(yàn)給藥劑量，灌胃給藥，每天1次，持續(xù)15天。模型對(duì)照組(Ⅱ組)與正常對(duì)照組(Ⅰ組)每日一次生理鹽水;西藥對(duì)照組(Ⅲ組)每日一次二甲雙胍按成人劑量(500mg/60kg)的7倍(58 mg/kg);中藥對(duì)照組(Ⅳ組)每日一次益腎調(diào)肝湯I(xiàn)號(hào)方按成人劑量(2.95g/kg)的7倍(21.7g/kg);中藥低、中、高劑量組(Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組):每日一次益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方按成人劑量(3.37g/kg)的3.5倍(11.8g/kg)、7 倍(23.6g/kg)、14 倍(47.2g/kg)。實(shí)驗(yàn)全過(guò)程動(dòng)物自由飲水、進(jìn)食。

1.4 觀察指標(biāo) 灌胃完成后1天即第16天晚20時(shí)起禁食過(guò)夜，次日動(dòng)物稱(chēng)重記下體重;麻醉各組大鼠，開(kāi)胸心臟采血，微粒子酶聯(lián)免疫測(cè)定法(MEIA)方法測(cè)定下列數(shù)值:測(cè)量血清學(xué)測(cè)定空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 16.0版本統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠試驗(yàn)前后體重情況 ①正常對(duì)照組(Ⅰ組)與其它組的差別有顯著性意義(P＜0.05)，其它各組間的差別無(wú)顯著性意義(P＞0.05)，表明造模成功。②經(jīng)造模后PCOS模型大鼠體重增加，比正常組大鼠體重重(P＜0.05)，試驗(yàn)處理后各組大鼠體重均增加，但增加的量有差別，運(yùn)用西藥鹽酸二甲雙胍片、中藥益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方中高劑量后，模型大鼠的體重增加量與正常大鼠相近(P＞0.05)，而用益腎調(diào)肝湯I(xiàn)號(hào)方及Ⅱ號(hào)方低劑量后模型大鼠的體重增加量與給予生理鹽水的模型大鼠相近(P＞0.05)，并明顯高于正常組大鼠(P＜0.05)，即運(yùn)用上兩方劑的模型大鼠的體重仍增加明顯。見(jiàn)表1。

2.2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA－IR及血脂的比較 經(jīng)造模后PCOS模型大鼠血清空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA－IR)及甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)升高(P＜0.01)，而高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)降低(P＜0.01)，運(yùn)用西藥鹽酸二甲雙胍片、中藥益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方中高劑量后，模型大鼠血HDL－C升高(P＜0.05)，其它值的明顯下降(P＜0.05)，而用益腎調(diào)肝湯I(xiàn)號(hào)方及Ⅱ號(hào)方低劑量后模型大鼠的上述值變化不明顯(P＞0.05)，并明顯高于正常組大鼠(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組大鼠試驗(yàn)前后體重情況(±s)

表1 各組大鼠試驗(yàn)前后體重情況(±s)

組別 動(dòng)物總數(shù)(只) 試驗(yàn)前體重(g) 試驗(yàn)后體重(g) 差值(M±Q)正常對(duì)照組(Ⅰ組) 10 164.40 ±10.21 173.70 ±11.93 9.40 ±4.58★模型對(duì)照組(Ⅱ組) 10 195.30 ±17.03▲▲ 214.10 ±12.85 18.50 ±7.58▲▲西藥對(duì)照組(Ⅲ組) 10 187.10 ±15.42▲ 197.50 ±14.32 10.40 ±6.35★中藥對(duì)照組(Ⅳ組) 10 199.70 ±15.13▲▲ 218.70 ±10.73 19.00 ±6.12▲▲中藥低劑量組(Ⅴ組) 10 188.00 ±10.07▲ 206.40 ±8.67 18.50 ±7.03▲▲中藥中劑量組(Ⅵ組) 10 185.20 ±16.65▲ 196.90 ±10.74 11.70 ±10.56★中藥高劑量組(Ⅶ組) 10 185.10 ±13.63▲ 194.70 ±9.04 9.60 ±7.23★

表2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA－IR及血脂的比較(±s)

表2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA－IR及血脂的比較(±s)

注:★與模型對(duì)照組比較，P＜0.05;★★ 與模型對(duì)照組比較，P＜0.01;▲與正常對(duì)照組比較，P＜0.05;▲▲與正常對(duì)照組比較，P ＜0.01。

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3 討論

PCOS患者中有30%伴有糖耐量受損(IGT)，7.5%合并糖尿病。PCOS患者與體重相當(dāng)?shù)呐詫?duì)照組比較，高胰島素血癥(HI)和胰島素抵抗(IR)的發(fā)生率更高，程度更嚴(yán)重。超過(guò)40%的PCOS患者伴有肥胖，伴有肥胖的患者與體重相當(dāng)?shù)膶?duì)照組及低體重的PCOS患者比較，IR更為明顯。PCOS－IR患者空腹胰島素(FT)和糖耐量試驗(yàn)(OGTT)后胰島素水平均高，而HI可引起卵巢和腎上腺分泌雄激素增多，過(guò)高的雄激素又反過(guò)來(lái)影響胰島素的功能，加重胰島素抵抗，造成PCOS在發(fā)病機(jī)制上的惡性循環(huán)［1］。研究發(fā)現(xiàn)HI因胰島素(INS)受體后的磷酸化異常進(jìn)而刺激卵巢和腎上腺的細(xì)胞色素P450C17α—羥化酶mRNA的表達(dá)和活性而使雄激素合成增多［2］。P450C17a具有17烴化酶和17、20裂解酶的雙重活性，使卵巢分泌的睪酮(T)增多和腎上腺的硫酸脫氫表雄酮(DHEAS)增多。另外一些研究發(fā)現(xiàn)HI加重垂體促性腺激素的不協(xié)調(diào)作用，LH升高，HLH刺激P450C17α活性使卵巢T合成及分泌增多［3］;HI還能抑制肝臟合成性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)使游離T升高，致雄激素的活性增加［4］。由此可見(jiàn)INS對(duì)卵巢源及腎上腺源雄激素的增加發(fā)揮著促進(jìn)作用，提示HI在IR的PCOS高雄激素的形成中有不可忽視的作用。

PCOS患者的胰島素抵抗不僅影響血脂的代謝，而且影響血脂的吸收利用。HI、IR促進(jìn)肝臟分泌VLDL，引起膽固醇從HDL到VLDL的轉(zhuǎn)化加速，導(dǎo)致血中HDL濃度降低;胰島素依賴(lài)性抗脂解作用減弱;PCOS卵巢分泌性激素異常，表現(xiàn)為雄激素過(guò)多和雌激素相對(duì)不足，而雄激素(主要是T)降低腹部脂肪細(xì)胞的脂蛋白脂酶活性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)經(jīng)造模后PCOS模型大鼠體重增重，血清FBG、FINS及HOMAIR升高(P＜0.01)，血清 TG、TC、LDL－C明顯升高，而HDL－C降低(P＜0.01)，給予西藥鹽酸二甲雙胍片后體重減輕，血 FBG、FINS、HOMA －IR、TG、TC、LDL－C明顯下降(P＜0.05)，HDL－C升高(P＜0.05)，表明二甲雙胍能改善PCOS大鼠IR以及血糖和血脂代謝，控制體重，可成為治療PCOS重要的藥，上述結(jié)果與一些報(bào)道相符［5、6］。本研究以二甲雙胍作為實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照藥，中高劑量益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方的效應(yīng)與二甲雙胍作用基本一致，而用益腎調(diào)肝湯I(xiàn)號(hào)方及Ⅱ號(hào)方低劑量后模型大鼠的上述值變化不明顯，說(shuō)明益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方能用于臨床PCOS患者的胰島素抵抗、血糖血脂代謝異常治療。但二甲雙胍常有胃腸不適及頭痛頭暈不良反應(yīng)，還可出現(xiàn)潮熱、心悸，減少維生素B12吸收引起貧血，劑量控制不當(dāng)易引起乳酸性酸中毒，中藥無(wú)此副作用，可見(jiàn)益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方較二甲雙胍更有治療優(yōu)勢(shì)。

我們通過(guò)臨床觀察研究認(rèn)為PCOS以腎虛為本、肝失調(diào)暢為要，瘀血、痰濁阻滯為標(biāo)。肝腎虧虛，肝郁克脾，氣血津液運(yùn)行失常，氣滯血瘀，痰濕內(nèi)停，脈絡(luò)受阻，故經(jīng)血調(diào)暢失常。補(bǔ)腎調(diào)肝為治療PCOS的根本大法，活血化瘀、健脾燥濕是必要手段。益腎調(diào)肝湯I(xiàn)號(hào)方全方以補(bǔ)益肝腎為主，兼以理氣活血、調(diào)經(jīng)疏肝，能改善卵巢功能，促進(jìn)排卵［7］。由于PCOS發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，虛實(shí)錯(cuò)雜，多種病機(jī)集于一身或相互轉(zhuǎn)化，脈絡(luò)瘀阻血脈不暢，腎陰、腎陽(yáng)的化生受阻，惟瘀去而新生，因此加大行血破堅(jiān)之力，方能有助于正本清源。益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方源于此在I號(hào)方基礎(chǔ)上加穿山甲、鱉甲等破堅(jiān)消癥之品，能入肝而調(diào)氣血、散瘀結(jié)，助藥達(dá)病所，使全方肝腎同補(bǔ)，破血化癥，除濕祛痰，補(bǔ)中有行，標(biāo)本兼治，甚合PCOS本虛標(biāo)實(shí)的病機(jī)，能取得較Ⅰ號(hào)方更好的療效，不過(guò)需要達(dá)到一定劑量即常量或更高劑量才能有效。臨床驗(yàn)證益腎調(diào)肝湯Ⅱ號(hào)方根據(jù)月經(jīng)周期不同階段陰陽(yáng)氣血的變化加減，治療多囊卵巢綜合征有滿意療效［8］。

［1］吳效科，周珊英，蘇延華.多囊卵巢綜合征患者的胰島素抵抗［J］.中華婦產(chǎn)科學(xué)雜志，1999，34:698 －700.

［2］Dale P0，Tanbo T，et al.Fertil steril，1992，58:487 －491.

［3］Barberi RL，Makri s A，et al.J clip Endocrind metab，1986，62:904.

［4］Zhang L，Rodriguex H，etal.Proc Natl Acad SciUSA 1995，92:10619－10623.

［5］姚 軍譯，錢(qián)榮立校.多囊卵某綜合征與代謝綜合征［J］.中華糖尿病雜志，2005，13(2):151.

［6］Seli E，Duleba AJ.Should patientswith polycystic ovarian syndrome be treated with metformin［J］.Hum Reprod，2002，17(9):2230－2236.

［7］陳 芊，張 華，顏建敏，等.益腎調(diào)肝湯對(duì)排卵障礙卵巢功能的免疫調(diào)節(jié)［J］.中國(guó)自然醫(yī)學(xué)雜志，2007，9(4):336 －339.

［8］益腎調(diào)肝Ⅱ號(hào)方治療多囊卵巢綜合征療效觀察［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息，2008年，(9):61－62.

山東省青島市衛(wèi)生局科研項(xiàng)目(No:青衛(wèi)中醫(yī)字2008－zyw035)

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