冠心病發(fā)病與 C反應(yīng)蛋白及其基因多態(tài)性的相關(guān)性研究

王彬

冠心病發(fā)病與 C反應(yīng)蛋白及其基因多態(tài)性的相關(guān)性研究

王彬

目的 研究河南地區(qū)漢族人群血清C反應(yīng)蛋白水平(CRP)及其1059G/C基因多態(tài)性與冠心病之間的關(guān)系。方法 采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定 286例冠狀動(dòng)脈造影患者的血清 CRP水平,同時(shí)應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè) CRP的 1059G/C基因多態(tài)性,結(jié)合冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 冠心病組的自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換CRP(InCRP)水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),以年齡、性別、吸煙、高血壓、體重指數(shù)和InCRP水平為自變量的Logistic回歸分析,InCRP水平(Ro=1.44,P＜0.01)和體重指數(shù)(OR= 1.01,P＜0.05)與冠心病獨(dú)立相關(guān)。1059G/C基因多態(tài)性等位基因和基因型的分布頻率符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.297,P＞0.05)。兩組的1059G/C基因型和等位基因的分布趨勢(shì)相同,差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。C等位基因攜帶者的InCRP水平低于GG基因型(0.53±1.01比0.88±1.99 mg/l;P= 0.024),而冠狀動(dòng)脈病變程度不受1059G/C基因多態(tài)性的影響(χ2=1.374,P＞0.05)。結(jié)論 血清CRP水平升高可能是河南地區(qū)漢族人冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子;CRP水平可能受其 1059G/C基因多態(tài)性的影響。

冠心病;C反應(yīng)蛋白;基因多態(tài)性

C反應(yīng)蛋白(CRP)是一項(xiàng)敏感的反映機(jī)體炎癥狀態(tài)的指標(biāo)。自從1994年采用Behring NA Latex CRP的生化定量測(cè)定提高了 CRP測(cè)定的靈敏度和精確度,大量前瞻性臨床研究表明 CRP水平的升高與心血管疾病尤其是冠心病發(fā)病危險(xiǎn)度升高密切相關(guān)[1-6]。最近NH IJBI FHS研究[7]發(fā)現(xiàn)遺傳因素對(duì)血清GRP的水平發(fā)揮了35%～40%的作用,因此尋找CRP的基因標(biāo)志日益受到人們的重視。2002年 5月美國(guó) Zee等[8]在 1452例的 6.8年隨訪研究中發(fā)現(xiàn),CRP基因第2外顯的1059位G-C突變與血清CRP水平降低有關(guān),并證實(shí)CRP水平升高是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子之一。本研究旨在通過(guò)檢測(cè) 286例行冠狀動(dòng)脈造影的患者血清高敏 CRP水平和1059G/C基因多態(tài)性,以了解河南地區(qū)漢族中該基因多態(tài)性頻率,并討其與CRP水平及冠心病之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇于我院住院行冠狀動(dòng)脈造影的患者286例。應(yīng)用Judkind法行冠狀動(dòng)脈造影,由2名有經(jīng)驗(yàn)向醫(yī)師分析造影結(jié)果。冠狀動(dòng)脈病變以血管直徑狹窄程度＞50%為陽(yáng)性,嚴(yán)重程度分為正常冠狀動(dòng)脈、1支病變、2支病變、3支病變。根據(jù)造影結(jié)果分為兩組:①冠心病組:共 188例,其中心絞痛 108例,陳舊性心肌梗死 45例和急性心肌梗死 35例;②對(duì)照組:冠狀動(dòng)脈造影正常共 98例。所有研究對(duì)象均來(lái)自漢族人群,無(wú)血緣關(guān)系。

1.2 二研究方法

1.2.1 高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn) 采用《19991WHO/ISH高血壓治療指南》的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn),收縮壓＞140mm Hg和(或)舒張壓＞90 mm Hg。體重指數(shù)(BMI)=體重/身高(kg/m2)。

1.2.2 血灣高敏CRP的測(cè)定 所有人選對(duì)象于冠狀動(dòng)脈造影前一周內(nèi),采集清晨空腹靜脈血 2m l,應(yīng)用免疫比濁法檢測(cè)血清CRP值(OLYMPUS AU 400 Analyzer)試劑由德國(guó)利得曼公司提供。

1.2.3 CRP的10599G/C基因型分析 抽取外周靜脈血5 m l枸櫞酸鈉抗凝;采用低滲溶血法獲得白細(xì)胞,以常規(guī)酚/氯仿抽提法提取DNA,TE溶解保存。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR)核苷酸分型技術(shù)檢測(cè)1059G/C基因多態(tài)性。根據(jù) Cao等[9]提出的引物,序列如下:上游引物5'-GATCTGTGTGTGATCTGAGAAACCTCT-3'下游引物5'-GAGGTACCAGAGACAGAGACGTG-3'。PCR反應(yīng)體系50μl,基因組DNA 100ng,10×PCR緩沖液5μl,200mmol/LdNTP, 1單位TaqDNA聚合酶。PCR反應(yīng)條件:變性94℃5min;循環(huán):94℃1 min,56℃1m in,72℃1 min,共35個(gè)循環(huán);延伸72℃5m in。取純化后PCR產(chǎn)物 20μl,限制性?xún)?nèi)切酶III (Roche)酶切。55℃水浴4h。酶切片段經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙錠染色后通過(guò)UV凝膠成像系統(tǒng)判斷結(jié)果。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 10.0軟件進(jìn)行分析?；蛐秃偷任换蝾l率采用直接計(jì)。研究對(duì)象與Hardy-Weinberg平衡的符合程度,基因型和等位基因頻率的組間比較采用四格表 χ2檢驗(yàn)和R×C列聯(lián)表χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（±s)表示,主要檢測(cè)指標(biāo)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),對(duì)于偏態(tài)分布的資料經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換達(dá)到近似正態(tài)分布,再進(jìn)行 t檢驗(yàn)。以 P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的一般臨床資科和血清CRP水平的比較(表1)由于血清CRP水平呈偏態(tài)分布,取其自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換為In-CRP,經(jīng)Kolmogorov-Sm irnov檢驗(yàn)近似正態(tài)分布(z=0.977,P =0.296)。兩組之間在年齡、性別、吸煙、高血壓和體重指數(shù)等方面差異均無(wú)顯著性(P＞0.05);但冠心病組的InCRP水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)(表1)。以年齡、性別、吸、高血壓、體重指數(shù)和InCRP水平為自變的Logistic二回歸分析顯示,InCRP水平(OR=1.44,P＜0.01)和體重指數(shù)(OR= 1.01,P＜0.05)。與冠心病的危險(xiǎn)性獨(dú)立相關(guān)。

表1 兩組一般臨床資料和血清lnCRP水平比較

2.2 兩組間1059G/C基因型和等位基因的分布 經(jīng)PCR擴(kuò)增片段大小為744bp,根據(jù)限制性?xún)?nèi)切酶MaeⅢ酶切的情況,表現(xiàn)為GG基因型(310 bp、233 bp、201 bp)、GC基因型(432bp、310 bp、233bp、201bp)和CC基因型(434 bp、310 bp)。在286例研究對(duì)象中GG、GC、CC基因型和G、C等位基因的分布頻率為83.7、14.2、2.0和91.4、8.6,符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.297,P＞0.05)。冠心病和對(duì)照組的1059G/C基因型和等位基因的分布趨勢(shì)相同,差異無(wú)顯著性(P＞0.05)(表2)。

注:DNA分子量標(biāo)志;1:PCR產(chǎn)物;2,4:GC基因型;3,6,7:GG基因型;5:CC基因型

3.3 1059G/C基因多態(tài)性對(duì)CRP和冠狀動(dòng)脈病變程度的影響 本研究中GG、GC和CC基因型的lnCRP水平分別為(0.88±0.99)、(0.54±1.04)、(0.33±0.53)lnmg/L,GG基因型的血清lnCRP水平(0.88±0.99)顯著高于GC+CC基因型(0.53±1.01)lnmg/L(P＜0.05);而冠狀動(dòng)脈病變程度不受1059G/C基因多態(tài)性的影響(χ2=1.374,P＞0.05)(表3)。

表2 兩組間 1059G/C基因型和等位基因的頻率分布(例,%)

注:因CC基因型例數(shù)較少,與GC型合為一組;表3同此表

表3 1059G/C基因多態(tài)性與lnCRP和冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系

3 討論

炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的病程進(jìn)展中起著顯著的作用。C反應(yīng)蛋白(CRP)是炎癥急性相反應(yīng)的標(biāo)志物,正常情況下以微量形式存在于健康人的血清中。隨著 CRP的高靈敏度測(cè)定的進(jìn)展使人們相信 CRP是一種微炎癥的指標(biāo),近年來(lái)的研究揭示高敏CRP水平與冠心病的發(fā)生過(guò)程直接相關(guān),并能獨(dú)立預(yù)測(cè)近期的遠(yuǎn)期心臟事件的發(fā)生,認(rèn)為它是一個(gè)被低估了的未充分利用的指標(biāo)[10]。MONICAAugsburg隊(duì)列研究[2]對(duì) 936名表面健康的中年男性隨訪 8年,結(jié)果表明高敏CRP水平與冠狀動(dòng)脈疾病的發(fā)病率間存在顯著的正相關(guān)關(guān)系。即時(shí)對(duì)于認(rèn)為發(fā)生心血管疾病危險(xiǎn)度低的女性來(lái)說(shuō), Ridker等[3]的研究結(jié)果也證實(shí)高敏CRP測(cè)定是12種標(biāo)志物中(包括炎癥、脂質(zhì)和脂蛋白以及高半胱氨酸)心血管疾病最強(qiáng)的單變量預(yù)測(cè)因素。NSTACS研究[11]表明高敏CRP水平是非ST段抬高的急性冠狀動(dòng)脈綜合征接受介入治療后近期和遠(yuǎn)期病死率的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。

本研究在 286例進(jìn)行擇期冠狀動(dòng)脈造影檢查的人群中,冠心病組的血清高敏CRP水平顯著高于對(duì)照組,以Logistic回歸分析顯示CRP和體重指數(shù)與造影證實(shí)的冠心病獨(dú)立相關(guān),表明高敏CRP水平升高的人群通過(guò)口服阿司匹林和他汀類(lèi)藥物進(jìn)行抗炎治療,可能會(huì)降低冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)度,內(nèi)科醫(yī)師健康研究 (PHS)[4]和膽固醇及復(fù)發(fā)事件研究(CARE)[12]的結(jié)果也對(duì)這一觀點(diǎn)提供了有力的支持。

2000年加拿大Cao等[9]首次報(bào)道了CRP的第 2外顯子的1059位GC突變,由于血清CRP水平與冠心病的關(guān)系,提出 1059G/C基因多態(tài)性可能為冠心病的候選基因。我們運(yùn)用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)了286例研究對(duì)象的1059G/C基因多態(tài)性,發(fā)現(xiàn)河南地區(qū)漢族人中存在CRP的1059G/C基因多態(tài)性,1059C等位基因的頻率為8.6%,GG基因型的高敏CRP水平顯著高于GC+CC基因型,提示1059C等位基因與CRP基線水平降低相關(guān),同時(shí)研究未發(fā)現(xiàn) 1059G/C基因多態(tài)性與冠心病發(fā)生和冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性,這與 Zee等[8]的研究結(jié)果一致。有學(xué)者認(rèn)為,由于 1059G/C基因突變沒(méi)有改變氨基酸序列[9],它只是通過(guò)關(guān)聯(lián)其他未被發(fā)現(xiàn)的 CRP基因功能突變或附近的基因來(lái)影響 CRP表達(dá)的水平,因此,雖然未能證實(shí) 1059G/C基因多態(tài)性本身能預(yù)測(cè)冠心病的發(fā)生,但是,本研究發(fā)現(xiàn)遺傳因素可能影晌CRP的水平。CRP主要由白介素-6(IL-6)通過(guò)劑量依賴(lài)方式刺激肝細(xì)胞及活化巨噬細(xì)胞合成,Vickers等[13]研究發(fā)現(xiàn)IL-6的-174G/C基因多態(tài)性影響血清CRP水平表達(dá),-174C等位基因與CRP基線水平高密切相關(guān),并證實(shí)遺傳因素對(duì)CRP水平起了39%的作用。

目前有關(guān) CRP致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制尚不明確。近年研究表明 CRP可誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)組織因子,激活凝血系統(tǒng)和補(bǔ)體系統(tǒng),導(dǎo)致機(jī)體凝血、纖溶機(jī)制失衡,增加心血管事件的危險(xiǎn)[10]。德國(guó)Hoffemeister等[14]的新近研究表明,在不穩(wěn)定性心絞痛患者的急性期反應(yīng)中,CRP水平高與致斑塊不穩(wěn)定的未端補(bǔ)體系統(tǒng)的激活有關(guān),從而為理論上解釋CRP對(duì)急性冠狀動(dòng)脈綜合征的預(yù)測(cè)價(jià)值提供了依據(jù)。

我們的初步研究顯示高敏 CRP水平升高可能是河南地區(qū)漢族人冠心病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,并可能受其 1059G/C基因多態(tài)性的影響。由于高敏CRP測(cè)定可能更好地預(yù)測(cè)心血管疾病的發(fā)病危險(xiǎn)度,具有重大的臨床和公共衛(wèi)生意義,因此尚需要進(jìn)一步大規(guī)模臨床研究證實(shí)。

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Plasma C-reactive protein leveland the 1059G/C polymorphism of CRP in patientswith coronary artery disease

WANGBin.

Objective To investigate the relationship between plasma levelsof ultra-sensitive C-reactive protein(CRP)or1059G/C polymorphism and angiographically documented coronary artery disease(CHD)in Chinese.Methods Plasma level ofultra-sensitive CRPwas determined by Immunoturbidimetric analyzetr in288 patientsundergoing selective coronary angiography,and the 1059G/C polymorphism of CRP gene was screened by PCR.Results CHDgroup showed significantly higherp lasma levelof in CRP than controlgroup(P＜0.05) in CRP(OR=1.44,P＜0.01)and body mass index(OR=1.01,P＜0.05)were risk factors associated with CHD on logistic regression analysis.The allele and genotype frequencies were consistentwith that predicter by Hardy-Weinberg equilibrium in the present study population(χ2=0.297,P＞0.05).There was no significant difference between CHD group and control group for1059G/C polymorphism(P＞0.05).Plasma in CRP level wassignificantly lower among carriers of 1059C Allele as compared with non-carriers GG genotype(0.53± 1.01vs 0.88±1.99 mg/l;P=0.024)There was also no significant difference in the number of stenotic vessels by 1059G/C polymorphism(χ2=1.374,P＞0.05).Conclusion Baseline plasmaultra-sensitive Creactive proteinmaybe an independent risk factor of CHD and the levelmay be influenced by 1059G/C polymorphism of the CRP gene in Chinese.

Coronary artery disease;C-reactive protein;Gene polymorphism

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