LC-MS/MS方法測定中成藥麻仁丸中添加偽品大黃的研究

孫愛萍， 張西如， 谷菲菲

(1.河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院機(jī)電工程系，河北 石家莊050026;2.河北省藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊050011)

中成藥“麻仁丸”的化學(xué)成分為白芍、大黃、厚樸、火麻仁、苦杏仁、枳實(shí)。具有瀉熱通腸，涼血解毒，逐瘀通經(jīng)的功能。用于實(shí)熱便秘，積滯腹痛，瀉痢不爽，濕熱黃疸等癥［1］。其中大黃為常用中藥，來源于蓼科植物掌葉大黃(R.palmatum L)、唐古特大黃(R.tanguticum)或藥用大黃(R.officinale Baill)的干燥根及根莖［2］。正品大黃和偽品大黃同為蓼科植物，含有相同的大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚［3-5］。正品大黃含有番瀉苷A和番瀉苷B的瀉下成分，而不含土大黃苷。偽品大黃因不含番瀉苷A和番瀉苷B，含土大黃苷而無瀉下作用［6］。土大黃苷具有抗菌、改善微循環(huán)、降血脂、降血糖、抗腫瘤、抑制過敏反應(yīng)、調(diào)控機(jī)體免疫防御系統(tǒng)、抗血栓以及抗氧化等作用。長期以來大黃藥材混亂現(xiàn)象比較嚴(yán)重，偽品大黃充當(dāng)正品大黃藥用的情況常有發(fā)生，于是就導(dǎo)致了“病準(zhǔn)方對藥不靈，成藥效果又不佳”的現(xiàn)象發(fā)生，加之含大黃的成藥標(biāo)準(zhǔn)中存在著未完善的地方，從而不能完全保證用藥安全有效。因此，有必要建立靈敏、可靠的分析方法對中成藥麻仁丸制劑中摻入的偽品大黃進(jìn)行鑒定。作者建立了液相色譜及直接電噴霧串聯(lián)四級桿質(zhì)譜法［7-10］，可以快速、準(zhǔn)確地對麻仁丸中是否含有土大黃苷作出判斷，進(jìn)一步判斷是否有用偽品大黃充當(dāng)正品大黃藥用的情況。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-20AD液相色譜儀-API3200質(zhì)譜聯(lián)用儀;賽多利斯BP211D型電子天平。

1.2 試藥 土大黃苷對照品(批號794-200103，中國藥品生物制品檢定所);麻仁丸樣品均為市售樣品。所用試劑乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

2 色譜條件

2.1 HPLC條件 色譜柱:資生堂 C18(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相:以水-乙腈(45∶55);紫外波長:200～400 nm;柱溫:35 ℃;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 LC-MS條件

HPLC條件:0.01 mol/L醋酸銨-乙腈(40∶60);流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:5 μL。

MS條件:電噴霧離子化負(fù)離子檢測方式(ESI-);質(zhì)核比范圍:100～600;離子源電壓:-5 000 V;霧化氣:10 L/min(高純氮?dú)?，加熱輔助氣:10 L/min(高純氮?dú)?，氣簾氣:10 L/min(壓縮空氣)，離子源溫度:500℃ ，錐孔電壓:-10 V，去簇電壓:-65 V，碰撞能量:-20 V。

3 溶液的配制

3.1 對照品溶液的制備 精密稱取土大黃苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

3.2 供試品溶液的制備 取本品蜜丸適量，剪碎，精密稱取4 g，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，精密量取濾液5 mL，至100 mL的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm的濾膜過濾，即得。

4 土大黃苷對照品的色譜、光譜及質(zhì)譜行為

采用負(fù)離子檢測方式對土大黃苷對照品進(jìn)行HPLC、MS和MRM分析，保留時(shí)間為26 min。土大黃苷的準(zhǔn)分子離子［M-H］-峰為m/z 419;對m/z419進(jìn)行離子掃描，產(chǎn)生的主要碎片離子m/z為257和241，相應(yīng)的圖譜見圖1，推測其質(zhì)譜裂解途徑如圖2所示。

圖1 土大黃苷的一級(A)和二級(B)質(zhì)譜圖

圖2 土大黃苷對照品在ESI(-)方式下的質(zhì)譜裂解

5 供試品溶液的定性檢測

在相同的色譜及質(zhì)譜條件下對麻仁丸的供試品溶液進(jìn)行HPLC、MS和MS-MS分析，在樣品中檢測到土大黃苷的準(zhǔn)分子離子即m/z 419，對m/z 419進(jìn)行二級全掃描質(zhì)譜分析，產(chǎn)生與土大黃苷對照品完全一致的碎片離子，且紫外光譜、保留時(shí)間分別與土大黃苷對照品相同。

結(jié)合紫外光譜、液相色譜保留時(shí)間、準(zhǔn)分子離子和二級質(zhì)譜裂解碎片四方面的信息，可以證明所檢查的麻仁丸樣品中有土大黃苷存在，既而可以判斷麻仁丸中被非法摻入了偽品大黃。

6 討論

對液質(zhì)聯(lián)用的條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明，采用0.01 mol/L醋酸銨-乙腈為流動相離子化好，峰響應(yīng)值高，色譜峰峰對稱，色譜分離結(jié)果較為理想?？疾炝瞬煌x子化模式對分析結(jié)果的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在負(fù)離子模式下可獲得較好的質(zhì)譜信號。

［1］中國藥典［S］.一部.2005.

［2］焦東海，杜上鑒.大黃研究［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2000.

［3］盧 靜.大黃真?zhèn)纹返蔫b別［J］.海峽藥學(xué)，2008，20(1):36.

［4］薛慶海.大黃的鑒別及不同炮制品的運(yùn)用［J］.首都醫(yī)藥，2009，16(14):56-57.

［5］楊成英.大黃及其混偽品的鑒別［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2003，14(12):747.

［6］樓之岑.大黃研究的回顧與前瞻［J］.北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，25(增刊):1-3.

［7］孫 佩.大黃藥材及飲片的土大黃新檢驗(yàn)方法［J］.四川中醫(yī)，2008，26(12):59-60.

［8］王秀冬，畢建進(jìn)，黃麗華，等.HPLC測定河套大黃中土大黃苷的含量［J］.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2007，31(5):28-29.

［9］沈于蘭，楊 敏，欒 潔，等.對大黃中土大黃苷檢測方法的改進(jìn)［J］.中國藥事，2010，24(5):493-495.

［10］孫 慧，朱 超，章弘揚(yáng).大黃及其炮制品的液質(zhì)聯(lián)用分析及物質(zhì)基礎(chǔ)比較［J］.中成藥，2009，31(3):420-421.