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      Galectin-3在胎膜早破孕婦胎膜中的表達(dá)及意義

      2011-01-30 08:01:48榮衛(wèi)靈
      關(guān)鍵詞:羊膜胎膜絨毛

      榮衛(wèi)靈 ,王 南

      1.湖南省東安縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,湖南東安 425900;2.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院,湖南長(zhǎng)沙 410100

      胎膜早破(premature rupture of fetal membranes,PROM)是臨產(chǎn)前胎膜發(fā)生破裂,分為足月前胎膜早破(preterm premature rupture of fetal membranes,PPROM)和足月胎膜早破(term premature rupture of membranes,TPROM)。在所有妊娠中PROM發(fā)生率為2.0%~3.5%,早產(chǎn)合并PROM占30%~40%,但其發(fā)病原因尚不完全明了[1]。宮內(nèi)感染(IAI)是其發(fā)病的最主要原因,占PPROM孕婦的25%~39%[2]。

      Galectin-3是半乳糖凝集素家族成員之一,廣泛分布于多種組織,在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附、凋亡方面起重要作用,并參與免疫調(diào)節(jié)[3]。Galectin-3在生殖領(lǐng)域的研究已逐漸被人們重視,但對(duì)于Galectin-3在絨毛膜羊膜炎及PROM中所發(fā)揮的作用尚無(wú)報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)Galectin-3在正常分娩孕婦胎膜及PROM孕婦胎膜中的表達(dá)及其變化,探討Galectin-3在PROM中所發(fā)揮的作用。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料

      胎膜早破組:選取湖南省東安縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科2009年1月~2010年6月住院分娩的胎膜早破組50例,平均年齡(27.8.±3.1)歲;孕周 31+4~36+6周;其中,足月胎膜早破 26例(足月胎膜早破組),足月前胎膜早破24例(足月前胎膜早破組)。經(jīng)產(chǎn)后病理學(xué)檢測(cè)分為絨毛膜羊膜炎組和非絨毛膜羊膜炎組。對(duì)照組:選擇同期在湖南省東安縣人民醫(yī)院住院因社會(huì)因素剖宮產(chǎn)分娩的非胎膜早破的孕婦30例作為對(duì)照組,平均年齡(25.7±2.9)歲,孕 37~41 周。 所有病例均為初產(chǎn)婦,單胎,無(wú)內(nèi)外科合并癥及產(chǎn)科并發(fā)癥,近期無(wú)外傷和性交等誘因,年齡及孕次差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

      1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

      1.2.1 胎膜早破診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]主訴陰道流液,pH試紙堿性變色,對(duì)可疑病例消毒后放窺陰器檢查見(jiàn)后穹隆有液體或手觸見(jiàn)宮頸口有羊水流出。

      1.2.2 組織學(xué)絨毛膜羊膜炎[5]絨毛膜板及羊膜上白細(xì)胞呈彌散性聚集,白細(xì)胞浸潤(rùn)呈極性分布,中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)每高倍視野5~10個(gè)為輕度,11~30個(gè)為中度,>30個(gè)為重度。

      1.3 標(biāo)本收集及處理

      所有產(chǎn)婦在胎盤胎膜娩出后立即直視下剪取距胎膜破口>2 cm處的全層胎膜組織2塊,大小1 cm×1 cm,生理鹽水清洗表面羊水和血跡,固定于10%福爾馬林中,石蠟包埋,切片備用。

      1.4 免疫組化

      兔抗人Galectin-3多克隆抗體、免疫組化染色試劑盒SP-9000購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。石蠟切片脫蠟,蒸餾水沖洗3次,3%H2O2覆蓋10 min,滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,PBS漂洗5 min×3次,用枸櫞酸鈉進(jìn)行抗原修復(fù)20 min,PBS漂洗5 min×3次,滴加10%正常山羊血清孵育30 min,封閉非特異性抗原,滴加兔抗人 Galectin-3抗體(1∶50)37℃孵育2 h,PBS漂洗5 min×3次。滴加羊抗兔二抗37℃孵育15 min,滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液37℃孵育15 min,PBS漂洗5 min×3次,滴加DAB顯色劑顯色,應(yīng)用蘇木素復(fù)染2 min,沖洗,封片。顯微鏡下觀察,照相。

      1.5 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

      觀察陽(yáng)性反應(yīng)采用雙盲法,行半定量分析[6]。以光鏡下細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性。按染色強(qiáng)度評(píng)分:無(wú)色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分:陰性為0分,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%為1分,11%~50%為2分,51%~75%為3分,>75%為 4分。 染色強(qiáng)度與陽(yáng)性百分比的乘積>3為免疫反應(yīng)陽(yáng)性。并按乘積分?jǐn)?shù)分為 4 個(gè)等級(jí):-(0,1,2 分);+(3,4 分);++(6,8 分);+++(9,12分),根據(jù)兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師雙盲計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì),將“-”、“+”判定為陰性,將“++”、“+++”判定為陽(yáng)性。

      1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

      實(shí)驗(yàn)結(jié)果均應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0處理,進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 各組Galectin-3的表達(dá)情況

      Galectin-3蛋白的陽(yáng)性表達(dá)主要集中在絨毛膜滋養(yǎng)層胞質(zhì)及胞核中,以胞漿為主,呈棕色或黃色,在羊膜層和蛻膜層亦有少量表達(dá),其在胎膜早破組表達(dá)明顯增強(qiáng)(圖1~2)。

      在胎膜早破組與對(duì)照組比較,Galectin-3的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Galectin-3在足月前胎膜早破組與足月胎膜早破組均有表達(dá),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表1。

      2.2 Galectin-3表達(dá)與絨毛膜羊膜炎的關(guān)系

      產(chǎn)后對(duì)全體孕婦行胎膜病理檢查,其中重度絨毛膜羊膜炎者16例,占20.0%,中度絨毛膜羊膜炎者14例,占17.5%,中重度絨毛膜羊膜炎患者均見(jiàn)于胎膜早破組;輕度絨毛膜羊膜炎者13例,占16.3%,其中胎膜早破組 11例(13.8%),對(duì)照組僅有2例(2.5%)。見(jiàn)表2。

      與非絨毛膜羊膜炎組比較,Galectin-3在絨毛膜羊膜炎組絨毛膜滋養(yǎng)層、羊膜層和蛻膜層的表達(dá)明顯增加(圖3~4)。同時(shí),隨著絨毛膜羊膜炎的病理分級(jí)不同,Galectin-3的表達(dá)的陽(yáng)性率也不同,且隨著病理炎癥程度的增加,其表達(dá)的陽(yáng)性率也增加。見(jiàn)表3。

      表1 各組Galectin-3的表達(dá)情況

      表2 兩組病理檢查結(jié)果比較(例)

      3 討論

      胎膜早破的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確,一般認(rèn)為是多因素造成的[7-8],但在胎膜早破中胎膜局部最基本的病理變化是炎癥和胎膜本身結(jié)構(gòu)改變,炎性反應(yīng)在胎膜早破發(fā)生中的作用越來(lái)越受到重視。

      Galectin-3是一種β-半乳糖結(jié)合蛋白,主要存在于細(xì)胞質(zhì)中,但也可以在細(xì)胞核、細(xì)胞表面或者細(xì)胞外,其功能具有多樣性[9]。現(xiàn)已證實(shí)Galectin-3參與許多生理和病理過(guò)程,包括細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞黏附、炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、腫瘤轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡。近來(lái)的研究表明其在急性炎癥反應(yīng)及固有性免疫的調(diào)節(jié)中作為一種細(xì)胞因子發(fā)揮著重要的作用[10-11]。

      表3 Galectin-3的表達(dá)與絨毛膜羊膜炎的關(guān)系

      本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化的方法檢測(cè)胎膜早破組和對(duì)照組胎膜中Galectin-3的表達(dá)情況,結(jié)果表明Galectin-3在PROM組胎膜中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組。且Galectin-3的表達(dá)與絨毛膜羊膜炎有關(guān),炎癥程度越高,Galectin-3的表達(dá)陽(yáng)性率越高,表明PROM與絨毛膜羊膜炎密切相關(guān)。

      多項(xiàng)研究表明PROM與感染有關(guān)[12],而Galectin-3正是在免疫調(diào)節(jié)、炎性反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。Galectin-3被認(rèn)為是一種促炎因子,在炎癥的急性期,Galectin-3可能發(fā)揮著減弱細(xì)胞間黏附、促壞死細(xì)胞脫落的作用;而到炎癥晚期,Galectin-3高表達(dá)時(shí),它將促進(jìn)細(xì)胞間細(xì)胞-基質(zhì)間黏附。在炎癥反應(yīng)中,Galectin-3主要在兩個(gè)方面扮演了重要的角色:①存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的Galectin-3呈現(xiàn)強(qiáng)大的促炎作用,促進(jìn)炎性細(xì)胞活化,抑制免疫細(xì)胞凋亡,促進(jìn)炎癥反應(yīng)[13]。②在細(xì)胞核高表達(dá)的Galectin-3促進(jìn)細(xì)胞增殖,加速細(xì)胞的損傷修復(fù)[14]。

      目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)有關(guān)Galectin-3表達(dá)與PROM相關(guān)的報(bào)道,但筆者通過(guò)本實(shí)驗(yàn)證實(shí)Galectin-3的陽(yáng)性表達(dá)與PROM存在一定的相關(guān)性,且Galectin-3的陽(yáng)性表達(dá)率隨PROM患者絨毛膜羊膜炎炎癥程度的增加而增加。我們推測(cè)PROM患者胎膜中Galectin-3表達(dá)增加與白介素、IFN-γ釋放相關(guān),且Galectin-3表達(dá)的增加促進(jìn)了細(xì)胞間細(xì)胞-基質(zhì)間的黏附,促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶的合成,從而降解細(xì)胞外基質(zhì),使胎膜變薄,導(dǎo)致胎膜破裂的發(fā)生。

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