高效液相色譜法測定當(dāng)歸活血膠囊中芍藥苷的含量

李 進(jìn)，陳秋香，梁 曉，鄧曼靜*

（長沙市第八醫(yī)院，湖南 長沙 410100）

高效液相色譜法測定當(dāng)歸活血膠囊中芍藥苷的含量

李 進(jìn)，陳秋香，梁 曉，鄧曼靜*

（長沙市第八醫(yī)院，湖南 長沙 410100）

目的 建立高效液相法測定當(dāng)歸活血膠囊中芍藥苷含量的方法。方法 采用Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（14:86）；檢測波長為 230 nm。結(jié)果 芍藥苷在 0.142～1.42μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r＝0.999 8）；平均加樣回收率為97.28%，RSD=1.60%。結(jié)論 該方法重復(fù)性好，操作簡單、準(zhǔn)確，可用于當(dāng)歸活血膠囊的質(zhì)量控制。

當(dāng)歸活血膠囊；芍藥苷；含量測定；高效液相法；白芍；當(dāng)歸；威靈仙

當(dāng)歸活血膠囊是本院骨傷科的協(xié)定處方，其處方由白芍、當(dāng)歸、續(xù)斷、威靈仙、骨碎補(bǔ)、生地黃、澤蘭、五加皮等10味中藥組成，具有活血舒筋止痛、祛瘀生新的功效，用于治療外傷早期。原標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定，為了更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文建立高效液相色譜法測定處方中君藥白芍中有效成分芍藥苷的含量，為當(dāng)歸活血膠囊的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀和紫外檢測器；CT-100柱溫箱。CQ-250型超聲波清洗器（必能信超聲上海有限公司）。AB 265-S電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]。

1.2 試藥

乙腈為色譜純，甲醇、乙醇、磷酸為分析純，水為重蒸水。芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200632）；當(dāng)歸活血膠囊（長沙市中醫(yī)醫(yī)院提供， 批號：080120、080211、080312、080414、080529、080618、080808、090415、090421、090201)。

2 方法與結(jié)果

圖1 芍藥苷測定的HPLC圖

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥12 h的芍藥苷對照品7.1 mg，加乙醇制成每1 mL含0.071 mg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取當(dāng)歸活血膠囊20粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉約0.8 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理45 min，放冷，再稱定質(zhì)量，以50%的乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 陰性對照溶液的制備

按處方比例稱取除白芍外其它藥材適量，依照當(dāng)歸活血膠囊的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

2.4 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；檢測波長：230 nm； 流速：1.0 mL/min； 柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)以芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。在上述色譜條件下對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液的色譜圖分別見圖1。結(jié)果表明，陰性無干擾。

2.5 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取芍藥苷對照品溶液 2、4、12、18、20 μL，注入液相色譜儀，測定，以芍藥苷的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：

結(jié)果表明芍藥苷在0.142～1.42μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取芍藥苷對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積積分值的RSD=0.71%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批當(dāng)歸活血膠囊（批號：0801020）5份，每份約0.8 g，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，進(jìn)行含量測定。結(jié)果平均含量0.657 1 mg/g，RSD為2.06%，表明本方法具有較好的重復(fù)性。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的供試品溶液，每隔2 h進(jìn)樣1次，每次10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積積分值的RSD為2.62%，結(jié)果表明樣品在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

貯備溶液:精密稱取芍藥苷對照品5.70 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1 mL中含芍藥苷0.228 mg的溶液。

取已知含量（0.657 1 mg/g）的當(dāng)歸活血膠囊(批號：080312)，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，取約 1.4 g(6 份)，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入貯備溶液1、2、3號 2.4 mL，4、5、6 號 4 mL，7、8、9 號 4.6 mL，水浴揮干，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品測定

按擬定的含量測定方法，測定10批當(dāng)歸活血膠囊中芍藥苷的含量，每批5份，結(jié)果見表2。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品測定結(jié)果 （n=5）

3 討論

供試品溶液制備：曾對提取溶媒、提取時(shí)間、提取方法進(jìn)行了考察，結(jié)果以加入50%乙醇、超聲處理45 min為佳。

比較了文獻(xiàn)測定芍藥苷含量的幾種溶劑系統(tǒng)，甲醇-水(68∶32)[1]、甲醇-0.1%甲酸溶液(50∶50)[2]、甲醇-水-磷酸(25∶75∶0.2)[3]，乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）[4]。 結(jié)果以乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）為流動(dòng)相時(shí)，當(dāng)歸活血膠囊中的芍藥苷峰與其他峰分離度最好。選用HPLC測定當(dāng)歸活血膠囊中芍藥苷的含量，操作簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于當(dāng)歸活血膠囊質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。

根據(jù)測定的結(jié)果，并考慮到方中白芍藥材的產(chǎn)地、采收、加工等因素，暫定當(dāng)歸活血膠囊中芍藥苷含量不得少于0.50 mg/g。

[1]Wang Q， Yang H Y， Liu W N， et a1.Determination of paeoniflorin in rat plasma by a liquid chromatography—tandem mass spectrometry method coupled with solid—phase extraction[J].Biomed Chromatogr，2006，20（2）：173.

[2]Xia S M， Shen R， SunX Y， et a1.Development and validation of a sensitive hquid chromatography—tandem mass spectrometry methodforthe determination of paeoniflorin in rat brain and its application to pharmacokinetic study[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2007，857(1)：32.

[3]王文芝，楊洪偉，曲 明.HPLC法測定乳核內(nèi)消液中芍藥苷的含量[J].中國中醫(yī)藥科技，2010,17(4):297.

[4]王文芝，楊洪偉，曲 明.HPLC法測定除脂生發(fā)片中芍藥苷的含量[J].海峽藥學(xué)，2009,21(5)：54.

（本文編輯 徐愛良）

Determination of paeoniflorin in Danggui Huoxue capsules with HPLC

LI Jin,CHEN Qiu-xiang,LIANG Xiao,DENG Man-jing
(Eighth Hospital of Changsha,Changsha,Hunan 410100,China)

Objective To establish a high performance liquid chromatography(HPLC)method for the determination of paeoniflorin in Danggui Huoxue capsule.Methods The separation of paeoniflorin was performed on Diamonsil C18column with a detection wavelength of 230 nm.The mobile phase was composed of acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution(14:86).Result The linear range of paeoniflorin was 0.142～1.42 mg(r=0.999 8).The average recovery was 97.28%and the RSD was 1.60%.Conclusion The method is simple,accurate with good reproducibility and can be used for the quality control of Dangguihuoxue Capsule.

Dangui Huoxue capsules;paeoniflorin;determination;HPLC;radix paeoniae alba;angelica sinensis;radix clematidis

R284.1

B

10.3969/j.issn.1674－070X.2011.05.010.031.03

2010－12－12

李 進(jìn)（1959-），女，湖南長沙人，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥房及制劑工作。

* 鄧曼靜，女，主任藥師，E-mail：dmj914@sina.com。