超微藿香正氣散對急性腹瀉大鼠腸黏膜保護及水電解質(zhì)的調(diào)節(jié)作用研究

羅堯岳 ，龍景文 ，王宇星 ，謝謹光 ，鄧寧昆 ，伍參榮 ，李 雅

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)湘杏學(xué)院2007級中西醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)班，湖南 長沙 410007）

超微藿香正氣散對急性腹瀉大鼠腸黏膜保護及水電解質(zhì)的調(diào)節(jié)作用研究

羅堯岳1，龍景文2，王宇星2，謝謹光2，鄧寧昆2，伍參榮1，李 雅1

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)湘杏學(xué)院2007級中西醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)班，湖南 長沙 410007）

目的 探討超微藿香正氣散對急性腹瀉大鼠腸黏膜保護和水電解質(zhì)的調(diào)節(jié)作用。方法 50只大鼠隨機分為空白組、模型組、超微粉組、細粉組、口服液組。采用番瀉葉煎液加寒冷刺激灌胃復(fù)制大鼠急性腹瀉模型，觀察大鼠腹瀉次數(shù)、糞便含水量的變化，用光鏡觀察大鼠結(jié)腸HE染色黏膜形態(tài)學(xué)變化，電極法檢測血清K+、Na+、Cl-濃度，酶聯(lián)免疫法檢測血漿環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平。結(jié)果 模型組大鼠腹瀉次數(shù)、糞便含水量明顯增加，血漿Na+、K+濃度降低、Cl-濃度升高，血漿cAMP水平升高，超微粉、細粉、口服液組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；超微粉組與細粉組比較，在降低大鼠腹瀉次數(shù)、糞便含水量，升高血漿Na+、K+濃度，降低血漿Cl-濃度、cAMP水平方面差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；超微粉組與口服液組比較，在降低大鼠腹瀉次數(shù)方面差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 超微藿香正氣散能調(diào)節(jié)急性腹瀉大鼠水電解質(zhì)平衡，降低血漿cAMP水平，對腸黏膜有保護作用，其作用優(yōu)于藿香正氣散細粉。

藿香正氣散；超微顆粒；腹瀉；腸黏膜；水電解質(zhì)；大鼠；藿香；白芷；紫蘇；大腹皮

藿香正氣散出自《太平惠民和劑局方》，由藿香、白芷、茯苓、大腹皮、半夏曲、桔梗、甘草、紫蘇葉、陳皮、厚樸、白術(shù)、生姜、大棗等13味組成。具有解表化濕，理氣和中的作用。廣泛運用于治療急性腹瀉、胃腸疾病、四時感冒等病癥。本研究采用粉體工程工藝對中藥實施細胞破壁加工而成的超微藿香正氣散，探討其對急性腹瀉大鼠腸黏膜保護和水電解質(zhì)的調(diào)節(jié)作用，現(xiàn)將實驗方法及結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 采用SD大鼠清潔級，體質(zhì)量200～220 g，雌雄各半，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物合格證號：SCXK（湘）2009-004。

1.1.2 藥物 藿香正氣散由大腹皮、白芷、紫蘇、茯苓各30 g，法夏、白術(shù)、陳皮、厚樸、桔梗各60 g，藿香90 g，炙甘草75 g組成。上述藥物由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科一次性購齊中藥飲片，制備實驗用藥。超微粉（粒徑平均15.4 μm）、細粉（粒徑平均55.8 μm）先加藥材10倍體積90℃生姜、大棗煎液，攪拌，靜止10 min，再加10倍體積水，2次液混合，濃縮、冷藏備用。藿香正氣口服液，太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司生產(chǎn)，批號：10040268，10 mL/支。

1.1.3 儀器 酶標儀為Sunrise Remote/Touch Screen型，產(chǎn)地：奧地利；Roche Modular pp全自動生化分析儀，產(chǎn)地：德國；光學(xué)顯微鏡motic，產(chǎn)地：廈門。

1.1.4 試劑 大鼠環(huán)磷酸腺苷（cAMP）試劑盒，編號：DZE30574，購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分組 大鼠購回后，將大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，再用隨機數(shù)字表法隨機分為5組：即空白對照組、模型組、超微粉組、細粉組、陽性對照(口服液)組，每組各10只。雄雌各半，單籠飼養(yǎng)。

1.2.2 造模方法 空白組：灌胃生理鹽水1 mL/100 g，其余各組灌胃番瀉葉浸液1 mL/100 g（含生藥1.80 g/kg，相當(dāng)于臨床等效劑量20 g）；空白組灌胃后歸籠，其余各組灌胃1 h后，冰水浴30 min，1次/d，共6 d。觀察大鼠的糞便情況，超過25%的糊狀、水樣便，少于25%塊狀、質(zhì)地堅硬的便視為造模成功。

1.2.3 給藥方法 造模成功后，空白組和模型組給予灌胃生理鹽水1 mL/100 g。陽性對照組：灌胃口服液1 mL/100 g（含藿香正氣口服液1.80 mL/kg，相當(dāng)于臨床等效劑量20 mL）；超微粉組：灌胃藿香正氣超微粉1 mL/100 g（含生藥1.61 g/kg，相當(dāng)于臨床等效劑量18 g）；細粉組：灌胃藿香正氣細粉1 mL/100 g（含生藥1.61 g/kg，相當(dāng)于臨床等效劑量18 g）。1次/d，均灌胃3 d。動物給藥劑量按動物與成人（70 kg）表面積比計算。

1.2.4 一般情況及腸黏膜的形態(tài)學(xué)觀察 觀察給藥后各組大鼠毛發(fā)的光澤度及有無脫落，肛周的污穢情況等。最后1次給藥5 h后，處死動物，無菌條件下取結(jié)腸，用中性甲醛固定。常規(guī)石蠟切片，HE染色，光鏡觀察腸黏膜形態(tài)學(xué)變化。

1.2.5 大鼠腹瀉次數(shù)的測定 觀察時間：每次給藥后的5 h內(nèi)，記錄各組稀便的次數(shù)，共觀察3 d。干便與稀便的區(qū)分：以濾紙上有無污跡為標準。糞便次數(shù)以每?；蛎慷?不能分清粒數(shù)者)為1次。比較各組動物腹瀉次數(shù)的差異。

1.2.6 糞便含水量的檢測 收集各組給藥后5 h內(nèi)的大鼠糞便，稱量糞便濕質(zhì)量，糞便放進烤箱的時間均為15 min，恒溫恒壓，稱干質(zhì)量，糞便濕質(zhì)量減去干質(zhì)量，得到含水量，共觀察3 d，取平均值。比較各組大鼠糞便含水量的差異。

1.2.7 血漿Na+、K+、Cl-及cAMP水平檢測 在3%戊巴比妥鈉(1 mL/kg腹腔注射)麻醉下，分離頸動脈，插入頸動脈導(dǎo)管，經(jīng)導(dǎo)管取血4 mL，注入抗凝試管中，混勻，3 000 r/min離心10 min分離血漿，分裝，-20℃保存。采用電極法檢測血漿Na+、K+、Cl-的濃度；采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測大鼠血漿cAMP濃度，按試劑盒說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況及腸黏膜的形態(tài)學(xué)觀察

實驗結(jié)果表明，灌服番瀉葉浸液加冰水浴的造模可引起大鼠排稀便次數(shù)明顯增加，稀便或水樣便增加，毛發(fā)失去光澤，說明造模成功。給藥3 d后，上述表現(xiàn)在各給藥組與模型組相比有明顯好轉(zhuǎn)。空白組大鼠腸黏膜上皮完整，排列整齊；模型組大鼠腸黏膜上皮不完整，脫落明顯，黏膜固有層松散，空泡樣改變；超微粉組大鼠腸黏膜上皮基本完整，有輕度脫落；細粉組大鼠腸黏膜上皮部分脫落，染色變淺，腸腔內(nèi)有脫落細胞；口服液組大鼠腸黏膜上皮部分脫落。見圖1。

圖1 各組大鼠腸黏膜的形態(tài)學(xué)變化光鏡圖（HE染色，10×40）

2.2 各組大鼠腹瀉次數(shù)的變化

第1天給藥后，超微粉、細粉、口服液組與模型組比較大鼠腹瀉次數(shù)減少，其中超微粉組有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；第2天給藥后，超微粉、細粉、口服液組與模型組比較大鼠腹瀉次數(shù)明顯減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（分別為P<0.01、P<0.05、P<0.01）。 第3天給藥后，超微粉、細粉、口服液組與模型組比較大鼠腹瀉次數(shù)明顯減少，均差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；細粉組與超微粉、口服液組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，超微粉組與口服液組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠腹瀉次數(shù)的比較 （n=10，）

表1 各組大鼠腹瀉次數(shù)的比較 （n=10，）

注：與模型組比較△P<0.05，△△P<0.01；與超微組比較*P<0.05，**P<0.01。

組 別空白組模型組超微粉組細粉組口服液組藥物劑量（g/kg）— —1.61 1.61 1.80第1天0 6.4±1.3 5.1±1.2△5.5±0.9 5.5±1.1第2天0 5.3±1.2 3.3±0.8△△4.3±0.7△3.8±0.8△△第3天0 4.2±1.1 1.3±0.5△△3.0±0.7△△**2.0±0.7△△*

2.3 各組大鼠糞便含水量的變化

超微粉、細粉、口服液組與模型組比較，糞便的含水量明顯減少（P<0.01）。細粉組與超微粉組、口服液組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (分別為P<0.01)。見表2。

表2 各組大鼠糞便含水量的比較 （n=10，）

表2 各組大鼠糞便含水量的比較 （n=10，）

注：與模型組比較△△P<0.01；與超微組比較**P<0.01。

組 別空白組模型組超微粉組微粉組口服液組藥物劑量（g/kg）— —1.61 1.61 1.80干質(zhì)量（g）19.17±2.77 23.31±1.60 19.86±1.90 20.23±2.62 19.70±1.93濕質(zhì)量（g）22.14±2.90 36.97±2.39 25.12±1.42 28.28±2.34 25.72±2.55含水量（g）2.97±0.88 13.59±2.51 5.26±1.66△△8.05±1.88△△**6.02±1.47△△

2.4 各組大鼠血漿Na+、K+、Cl-及cAMP水平

超微粉、細粉、口服液組大鼠血漿Na+濃度與模型組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（分別為P<0.01、P<0.05），超微粉組與細粉組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；超微粉、口服液組差異大鼠血漿K+濃度與模型組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（分別為 P<0.01、P<0.05），超微粉組與細粉組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；超微粉、細粉、口服液組大鼠血漿Cl-濃度與模型組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（分別為P<0.01、P<0.05）；超微粉、口服液組大鼠血漿cAMP水平與模型組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（分別為P<0.01、P<0.05），超微粉組與細粉組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見表 3。

表 3 各組大鼠血漿 Na+、K+、Cl-及 cAMP 水平的比較 （n=10，）

表 3 各組大鼠血漿 Na+、K+、Cl-及 cAMP 水平的比較 （n=10，）

注：與模型組比較△P<0.05，△△P<0.01；與超微組比較*P<0.05。

組 別空白組模型組超微粉組細粉組口服液組藥物劑量（g/kg）— —1.61 1.61 1.80 Na+(mmol/L)143.14±10.36 122.55±9.79 138.83±6.06△△130.53±9.57△*131.11±7.02△K+(mmol/L)7.54±1.25 5.53±1.09 7.07±0.92△△5.88±0.94*6.61±1.15△Cl-(mmol/L)95.58±6.72 124.03±10.53 104.92±13.24△△112.82±14.81△111.34±12.32△cAMP(nmol/L)18.99±2.55 24.23±3.19 19.09±2.47△△22.19±3.11*21.40±2.88△

3 討論

據(jù)國家疾控中心報道，我國每年急性腹瀉的發(fā)病率高達12%，給人們的健康、經(jīng)濟、生活質(zhì)量帶來嚴重影響。臨床研究表明，藿香正氣散治療急性腹瀉具有較好的療效[1-2]。因此，發(fā)揮中醫(yī)藥優(yōu)勢，研究和尋找臨床治療急性腹瀉安全、有效、使用方便的中藥制劑，具有重要意義。

藿香正氣散最初的制劑為散劑，現(xiàn)在臨床運用的劑型有多種，如藿香正氣丸、藿香正氣水、藿香正氣液、藿香正氣片、藿香正氣軟膠囊、藿香正氣滴丸等劑型，各有其特點和不足（如藿香正氣液有吸收快的作用，但所含的酊劑大部分患者不易接受；藿香正氣片吸收速度較慢；藿香正氣軟膠囊、藿香正氣滴丸制作工藝較復(fù)雜，制作成本高）。超微藿香正氣散是利用粉體工程工藝對中藥實施細胞破壁加工而成的粉劑，不但保持了原藥材的特性，且能提高有效成分的釋出和生物利用度，節(jié)省藥材等獨特的優(yōu)勢[3-4]。

目前，關(guān)于急性腹瀉的發(fā)病機制，研究認為：主要是致病因素激活腺苷酸環(huán)化酶，細胞內(nèi)的ATP轉(zhuǎn)變成cAMP，使腸黏膜細胞cAMP含量迅速增加，Na+-K+-ATP酶活性改變，從而促使腸黏膜細胞中液中K+溢出，Na+，Cl-等水分進入細胞內(nèi)，細胞腫脹壞死，腸腔水分的分泌明顯增加而導(dǎo)致腹瀉，引起機體電解質(zhì)紊亂，甚至造成腹瀉患者生命危險。

本研究表明：采用經(jīng)灌胃番瀉葉煎劑加寒冷刺激誘導(dǎo)大鼠急性腹瀉模型，大鼠腹瀉次數(shù)、糞便含水量明顯增加，血漿 Na+、K+濃度降低、Cl-濃度升高，血漿cAMP水平升高。藿香正氣超微粉、藿香正氣細粉、藿香正氣口服液均能不同程度調(diào)節(jié)急性腹瀉大鼠水電解質(zhì)平衡，降低血漿cAMP水平，對腸黏膜有一定保護作用。其中藿香正氣超微粉功效優(yōu)于藿香正氣細粉。

[1]呂明惠.藿香正氣散加味治療急性腹瀉療效分析 [J].天津中醫(yī)，1997，14（5）：214.

[2]顧琰東.藿香正氣散煎劑保留灌腸治療小兒夏季腹瀉例析[J].實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2002，16（4）：217.

[3]梅全喜，梅笑風(fēng).中藥新型飲片的特點與存在問題探討[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（4）：1-4.

[4]蔡光先，楊永華.單味中藥超微飲片研制與開發(fā)[J].醫(yī)學(xué)研究通訊，2005，34（4）：31，54.

（本文編輯 彭芝配）

Effects of micro-pieces Huoxiang Zhengqi powder on protection of intestinal mucosa and regulation of water electrolyte in rats with acute diarrhea

LUO Yao-yue， LONG Jing-wen,WANG Yu-xing， XIE Jing-guang，DENG Ning-kun， WU Can-rong， LI Ya
(TCM University of Hunan， Changsha， Hunan 410007， China)

Objective To investigate the effect of micro-pieces Huoxiang Zhengqi powder on protection of intestinal mucosa and regulation of water electrolyte in rats with acute diarrhea.Methods 50 ratswere randomly divided into blank group,modelgroup,micro-pieces pow der group,powder group and oral solution group.The gavage senna decoction combined with cold stimulation was used to induce the rat models,the changes of diarrhea times and water content in fecal were measured,the HE staining colon mucosa morphology was detected with light microscopy,the serum concentration of K+,Na+and Cl with electrode and plasma level of cAMP with enzyme-linked immunosorbent.Results In model group,the diarrhea times and fecal water content were significantly increased,plasma K+，Na+concentration decreased,Cl concentration and plasma cAMP levels increased;compared micro-pieces powder group,powder group and oral solution group with model group，the differences were significant(P<0.05)； compared superfine pow-der group with the powder group,the differences of decreasing diarrhea times and fecal water content,increasing plasma K+，Na+concentration,decreasing plasma Cl-concentration and cAMP levels were significant(P<0.05);compared superfine powder group with oral solution,the difference of reducing diarrhea times was significant(P<0.05).Conclusion The micro-pieces Huoxiang Zhengqi powder can regulate water and electrolyte balance in rats with acute diarrhea,decrease plasma cAMP levels,is effective to protect the intestinal mucosa,and is better than traditional powder.

Huoxiang Zhengqi powder;micro-pieces；diarrhea;intestinal mucosa；water and electrolyte；rats；rugosa；Angelica；basil；pericarpium arecae

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2011.05.005.016.04

2011－02－21

湖南省中醫(yī)藥管理局科研項目（2009014）；2009年度湖南省大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實驗計劃項目（2009）。

羅堯岳（1973-），男，湖南沅陵人，副教授，主要從事方劑學(xué)實驗研究。