CD44v6和CEA-mRNA定量檢測(cè)在惡性胸腔積液鑒別診斷中的應(yīng)用

(廣西南寧市邕寧區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣西 南寧 530200 E-mail：bsnjhfyb@sina.com)

細(xì)胞黏附分子CD44廣泛分布于細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白,通常分為標(biāo)準(zhǔn)型CD44(CD44S)、上皮型 CD44(CD44E)和變異型CD44(CD44V)三種。細(xì)胞表面黏附分子(CD44v6)是CD44的一種拼接變異體[1]。近幾年來研究表明：人類多種惡性腫瘤組織,如胃癌、結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、鼻咽癌等普遍存在CD44v6的表達(dá)紊亂,而且CD44v6的高度表達(dá)與腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。CEA最早分離于人結(jié)腸癌,后來研究發(fā)現(xiàn)在多種癌癥時(shí)其血清含量均有明顯升高,是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物。CEA檢測(cè)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床,隨著分子生物學(xué)研究的進(jìn)展,檢測(cè)腫瘤相關(guān)mRNA的表達(dá),對(duì)腫瘤的診斷、監(jiān)測(cè)等方面顯示出了更高的特異性和敏感性。我們聯(lián)合檢測(cè)胸腔積液中的CD44v6和癌胚抗原信使核糖核酸(carcinoembryonic antigen messenger ribonucleic acid,CEA-mRNA)含量,旨在探討其在胸腔積液性質(zhì)鑒別和診斷的臨床意義,為臨床的治療提供科學(xué)的依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 90例病例均為2007年1月～2009年1月因胸腔積液在我院住院,其中惡性胸腔積液51例,男33例,女18例,平均年齡63.5歲。均經(jīng)細(xì)胞學(xué)或病理組織學(xué)確診,包括肺腺癌 31例,肺鱗癌 14例,小細(xì)胞未分化癌 4例,惡性間皮瘤1例,食管癌伴胸膜侵犯1例。良性胸腔積液 39例,男21例,女18例,平均年齡58.4歲,包括結(jié)核性胸膜炎23例,肺炎 12例,漏出性胸腔積液(肝硬化或心衰)4例,患者均依據(jù)臨床體征、影像學(xué)檢查、胸腔積液常規(guī)生化、細(xì)菌培養(yǎng)等檢查確診。兩組患者年齡、性別、體重等指標(biāo)差異無顯著性(P＞0.05),具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集 采用胸腔穿刺術(shù)采集積液,分5管放置：病理學(xué)檢查和細(xì)胞學(xué)檢查共用1管,化學(xué)免疫檢查1管,CEA-mRNA單獨(dú)1管,均留取2ml;厭氧菌培養(yǎng)留取1ml,結(jié)核桿菌檢查留取10ml。用肝素抗凝處理后立即送實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本如不能及時(shí)檢測(cè),應(yīng)盡快離心分離胸腔積液,提取有核細(xì)胞(檢測(cè)CEA-mRNA)封存于-20℃。

1.3 方法 CD44v6采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),儀器和試劑由美國(guó)RapidBio公司提供,CEA-mRNA采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)進(jìn)行檢測(cè),嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量數(shù)據(jù)用(±s)表示,采用 t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料率的比較采用χ2檢驗(yàn),P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者CD44v6陽性率比較 惡性胸腔積液組CD44v6陽性 31例,陽性率為 60.87%(31/51);良性胸腔積液組CD44v6陽性5例,陽性率為12.82%(5/39),惡性胸腔積液組陽性率明顯高于良性胸腔積液組(χ2=19.2,P＜0.05),見表1。

表1 兩組胸腔積液CD44v6陽性率比較

2.2 兩組患者CEA-mRNA陽性率比較 51例惡性胸腔積液中有41例為CEA-mRNA陽性,陽性率為80.39%(41/51);39例良性胸腔積液中有3例為陽性,陽性率為7.69%(3/39)。兩組陽性率比較差異有顯著性(χ2=43.9,P＜0.05),見表2。

表2 兩組胸腔積液CEA-mRNA陽性率比較

2.3 兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胸腔積液的診斷價(jià)值 CD44v6、CEAm-RNA對(duì)惡性胸腔積液的診斷靈敏度分別為60.87%(31/51),80.39%(41/51);特異性分別為 87.18%(34/39),92.31%(36/39);兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)惡性胸腔積液的靈敏度為64.71%(33/51),特異性為94.87%(37/39)。

3 討論

胸腔積液是呼吸內(nèi)科常見疾病,按照性質(zhì)主要分為良性胸腔積液和惡性胸腔積液,良性胸腔積液主要見于結(jié)核性胸膜炎,惡性胸腔積液主要見于肺癌等。胸腔積液的治療包括全身治療和局部治療,兩種積液性質(zhì)治療方法也有所不同,因此,治療前鑒別胸腔積液的性質(zhì)非常重要。通過理學(xué)檢查、細(xì)胞學(xué)檢查、免疫化學(xué)檢查和腫瘤標(biāo)記物檢查鑒別兩種胸腔積液的性質(zhì)并不難。

CEA是有代表性的腫瘤標(biāo)志物,早已用于臨床,但因其敏感性較低,不能檢測(cè)微轉(zhuǎn)移的發(fā)生,在很大程度上不能滿足應(yīng)用需要。隨著分子生物學(xué)研究的進(jìn)展,檢測(cè)腫瘤相關(guān)mRNA的表達(dá),對(duì)腫瘤的診斷、監(jiān)測(cè)等方面顯示出了更高的特異性和敏感性。CEA-mRNA僅存在于腫瘤細(xì)胞內(nèi),是活化了的相關(guān)癌基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,是指導(dǎo)合成CEA的模板。與CEA這種可以被分泌至細(xì)胞外的表達(dá)終產(chǎn)物相比,它不能游離于細(xì)胞外,是反映被檢測(cè)部位存在有腫瘤細(xì)胞或某些幼稚細(xì)胞的指標(biāo)[2]。另外,腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散是癌癥致死的主要原因,癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散必須依靠細(xì)胞的黏附和基質(zhì)的降解。CD44v6恰恰參與細(xì)胞的黏附,許多研究表明[3],CD44v6參與了多種腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。CD44v6在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用日益被人們所認(rèn)識(shí)。本資料結(jié)果也顯示,惡性胸腔積液組CD44v6和CEA-mRNA明顯高于良性胸腔積液,兩組比較差異有顯著性(P＜0.05),兩者聯(lián)合檢測(cè)特異性和敏感性高于單項(xiàng)檢測(cè)。因此,作者認(rèn)為除了對(duì)胸腔積液進(jìn)行常規(guī)理學(xué)檢查、細(xì)胞學(xué)檢查、免疫化學(xué)檢查和多種腫瘤標(biāo)記物檢查,還聯(lián)合檢測(cè)胸腔積液中的CD44v6和CEA-mRNA,并結(jié)合臨床體征和影像學(xué)檢查,對(duì)惡性腫瘤的早期鑒別診斷、病情監(jiān)測(cè)、療效評(píng)價(jià)等方面具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值,可以彌補(bǔ)脫落細(xì)胞學(xué)檢測(cè)陽性率過低的缺點(diǎn)。

[1]孟龍,張陽德,王一兵.非小細(xì)胞肺癌中 VEGF-C、CD44v6的表達(dá)及臨床意義[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2010,48(4)：84-86.

[2]張凌,熊建萍,鐘陸行.熒光定量PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)移性大腸癌患者化療前后外周血CEAmRNA的表達(dá)及臨床意義[J].實(shí)用腫瘤雜志,2006,21(5)：443-446.

[3]付根學(xué).CD44v6與惡性腫瘤[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2010,48(12)：11-24.