富馬酸阿奇霉素的體內(nèi)抗菌活性與安全性評(píng)價(jià)*

王 麗 孫豐斌 米 寧 辛?xí)悦?趙曉民 高允生

(1.泰山醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，山東 泰安 271016；2.山東泰邦生物制品有限公司，山東 泰安 271016)

阿奇霉素(azithromycin，AM)為15元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，抗菌作用機(jī)制與紅霉素相似，抗菌譜較廣，具有細(xì)胞滲透性強(qiáng)、半衰期長等藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)，對(duì)革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、支原體、衣原體、厭氧菌等均具有較強(qiáng)抗菌作用，臨床廣泛應(yīng)用于呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)、皮膚和軟組織感染[1,2]。富馬酸阿奇霉素(azithromycin fumarate，AMF)為AM的富馬酸鹽(商品名：億松)，是由山東誠創(chuàng)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司與山東德藥制藥股份有限公司研制生產(chǎn)水溶性口服制劑。本文以紅霉素(erythromycin, EM)為對(duì)照，對(duì)AMF和AM的體內(nèi)抗菌活性進(jìn)行了比較研究，并對(duì)AMF的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1藥品 AMF由山東誠創(chuàng)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司提供，批號(hào)970406，效價(jià)828.6 U?mg-1；AM由山東齊魯制藥廠提供，批號(hào)940422，效價(jià)957 U?mg-1；EM由大連制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)950604，效價(jià)1000 U?mg-1。三種藥物均用0.5%羧甲基纖維素納(CMC)在使用前配制成混懸液供實(shí)驗(yàn)用。AMF按其所含AM計(jì)算劑量。

1.1.2菌株 金黃色葡萄球菌(26001，金葡菌)和乙型溶血性鏈球菌(32210-11，鏈球菌)，均為泰安市區(qū)臨床分離的致病菌，由泰山醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室鑒定和提供。

1.1.3動(dòng)物 昆明種小白鼠，空腹體重18～22 g，由山東省衛(wèi)生防疫站實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)950103。實(shí)驗(yàn)前禁食供水12 h。

1.2 體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)[3]

1.2.1菌液制備

取臨床分離的致病金葡菌和鏈球菌，分別接種于2 ml肉湯培養(yǎng)基中，37℃孵育6 h；取0.1 ml轉(zhuǎn)種于10 ml肉湯培養(yǎng)基中，37℃孵育18 h，得實(shí)驗(yàn)用菌原液。菌原液用5%胃膜素進(jìn)行低比值系列稀釋，得實(shí)驗(yàn)用感染菌液。

1.2.2感染菌量預(yù)試

取空腹體重18～22 g小鼠分為若干組，每組4只，分別腹腔注射(ip)不同濃度的金葡菌或鏈球菌感染菌液，每鼠0.5 ml。觀察48 h內(nèi)各組小鼠存活情況，分別確定兩種致病菌對(duì)感染小鼠的最小100%致死菌量(MLD)。

1.2.3金葡菌全身感染小鼠的實(shí)驗(yàn)治療

取空腹體重18～22 g小鼠190只，♀♂各半，按1 MLD菌量每鼠ip金葡菌液0.5 ml制備全身感染模型。將感染小鼠按性別和體重隨機(jī)分為19組，每組10只。其中，用AMF、AM、EM灌胃給藥(ig)治療各6個(gè)劑量組，0.5%CMC空白對(duì)照1組。AMF、AM和EM各實(shí)驗(yàn)治療組的給藥劑量根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定，三種藥物相鄰劑量組間的公比均為0.75，AMF各組劑量分別為15.0、19.9、26.6、35.4、47.3、63.0 mg?kg-1體重，AM各組劑量分別為26.6、35.4、47.3、63.0、84.0、112.0 mg?kg-1體重，EM各組劑量分別為53.8、71.7、95.6、127.5、170.0、226.7 mg?kg-1體重。各組每次ig容量均為20 mg?kg-1體重，分別于感染后即刻和6 h后各給藥一次，空白對(duì)照組同法給予等容量0.5%CMC。定時(shí)觀察記錄7天內(nèi)各組小鼠的反應(yīng)和死亡情況，對(duì)觀察期內(nèi)死亡小鼠立即進(jìn)行解剖觀察。

1.2.4鏈球菌全身感染小鼠的實(shí)驗(yàn)治療

小鼠感染鏈球菌、分組、實(shí)驗(yàn)治療和觀察方法均與“1.2.3”相同。小鼠感染后，AMF各組治療劑量分別為8.4、11.2、15.0、19.9、26.6、35.4 mg.kg-1體重，AM各組劑量分別為10.1、13.5、18.0、24.0、32.0、42.5 mg?kg-1體重，EM各組劑量分別為22.5、30.0、40.0、53.3、71.1、94.8 mg?kg-1體重。

1.3 急性毒性實(shí)驗(yàn)[4]

取空腹體重18～22 g小鼠70只，♀♂各半，按性別和體重隨機(jī)分為7組，每組10只。其中，6組單次ig不同劑量的AMF，1組同法給予等容量0.5%CMC。根據(jù)預(yù)試結(jié)果，AMF最高和最低劑量組分別為4833.6和2144.7 mg?kg-1體重，各劑量組間公比為0.85，各組ig容量均為20 mg?kg-1體重。給藥后即刻觀察動(dòng)物反應(yīng)，并定時(shí)觀察記錄7 d內(nèi)小鼠的毒性癥狀及死亡情況，對(duì)觀察期內(nèi)死亡小鼠立即進(jìn)行解剖觀察。

1.4 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用DAS ver 1.0軟件包，按Bliss法分別計(jì)算AMF、AM、EM治療金葡菌和鏈球菌感染小鼠的半數(shù)有效量(ED50)及其95%可信限，小鼠AMF急性毒性實(shí)驗(yàn)的半數(shù)致死量(LD50)及其95%可信限。計(jì)算AMF的化療指數(shù)(CI)，CI= LD50/ ED50。各藥物間ED50比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)全身感染小鼠的保護(hù)作用

在觀察期內(nèi)，金葡菌和鏈球菌感染的對(duì)照組小鼠全部死亡，其平均存活時(shí)間(n=10)分別為18.70 ± 6.20 h和20.35 ± 6.51 h。各劑量AMF、AM、EM治療組小鼠，在7d觀察期結(jié)束時(shí)均有部分或全部動(dòng)物存活，表明三種藥物對(duì)金葡菌和鏈球菌全身感染小鼠具有保護(hù)作用。根據(jù)三種藥物的ED50，AMF和AM對(duì)金葡菌和鏈球菌感染小鼠的體內(nèi)抗菌活性均優(yōu)于EM(P<0.01)。AMF治療組與AM組比較，AMF對(duì)金葡菌感染的治療作用優(yōu)于AM(P<0.01)，而兩藥對(duì)鏈球菌感染的治療作用無明顯差異(P>0.05)。結(jié)果見表1。

對(duì)各藥物治療組和空白對(duì)照組死亡小鼠進(jìn)行解剖觀察，可見前肢皮下淋巴結(jié)及頜下淋巴結(jié)腫大，十二指腸及其相鄰空腸有3～7 cm不同長度的壞死，其他臟器和組織未見明顯異常。各藥物治療組與空白對(duì)照組死亡小鼠的剖檢結(jié)果無明顯差異。

表1 富馬酸阿奇霉素(AMF)、阿奇霉素 (AM)和紅霉素(EM)對(duì)感染致病菌的小鼠的體內(nèi)的抗菌活性

致病菌(1MLD)/Cfu.mouse-1藥物ED50/mg?kg-195%置信限/ mg?kg-1金黃色葡萄球菌 26001 / 1.86×105 AMF33.38 * #27.07～39.69AM58.22 *47.64～68.80EM116.9294.56～139.28溶血性鏈球菌32210-11 / 2.12×105AMF18.25 *14.75～21.75AM17.81*14.63～20.99EM47.5138.21～56.81

*P<0.01 vs EM ;#P<0.01 vs AM

2.2 小鼠ig AMF的急性毒性

對(duì)照組小鼠在觀察期結(jié)束時(shí)全部存活，食欲及活動(dòng)情況正常。各劑量AMF組在ig后約0.5h，小鼠表現(xiàn)為自發(fā)活動(dòng)減少，俯臥。給藥后1.5～7h，多數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)呼吸急促或困難，四肢痙攣或驚厥，部分動(dòng)物在給藥后1～4 d內(nèi)死亡。各劑量組小鼠的毒性反應(yīng)強(qiáng)度、死亡速度和死亡率均與藥物劑量呈正相關(guān)，其LD50為3273.4 mg?kg-1體重，95%可信限為 2834.6～3780.1 mg?kg-1體重。死亡小鼠進(jìn)行解剖觀察未見臟器組織異常。

2.3 小鼠ig AMF的化療指數(shù)

根據(jù)AMF的LD50和ED50計(jì)算，其對(duì)金葡菌和鏈球菌感染小鼠ig的化療指數(shù)分別為98.1和179.4。

3 討 論

AM是具有獨(dú)特抗菌活性和藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。其不僅抗菌譜較廣，抗菌活性較強(qiáng)，抗菌后效應(yīng)明顯，而且對(duì)酸穩(wěn)定，生物利用度高，半衰期長，組織細(xì)胞內(nèi)分布濃度高，并能向感染病灶組織靶向轉(zhuǎn)運(yùn)和分布，臨床用藥方便，療程短[1,2,5,6]。這些特點(diǎn)使阿奇霉素在臨床得到越來越廣泛的應(yīng)用，已有多種新制劑和新劑型用于臨床。AMF為新研制生產(chǎn)的水溶性口服制劑，為方便臨床治療提供了新的有效藥物。

體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AMF、AM和EM灌胃給藥對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性全身感染模型均具有顯著的治療保護(hù)作用。三種藥物的ED50比較，AMF和AM對(duì)金葡菌感染的體內(nèi)抗菌活性分別是EM的3.5倍和2.0倍，對(duì)鏈球菌感染的體內(nèi)抗菌活性分別為EM的2.6倍和2.7倍，與文獻(xiàn)報(bào)道的研究結(jié)果相一致[7-9]。AMF與AM治療感染小鼠的ED50比較，AMF對(duì)金葡菌感染的體內(nèi)抗菌活性為AM的1.74倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；對(duì)鏈球菌感染的治療作用兩藥無明顯差異(P>0.05)。

小鼠ig AMF的LD50為3273.4 mg?kg-1，按體重計(jì)算相當(dāng)于人每日臨床用量(250～500 mg)的455～909倍。其ig治療金葡菌和鏈球菌感染小鼠的化療指數(shù)分別為98.1和179.4。此體內(nèi)抗菌活性和急性毒性研究表明，AMF具有顯著抗菌活性和良好的安全性，其對(duì)致病金葡菌和鏈球菌感染的療效優(yōu)于AM或相同，提示其具有良好的臨床應(yīng)用前景。

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