高效液相色譜-二級管陣列檢測器法測定美白類、祛斑類化妝品和香波中氫醌、苯酚含量

田富饒 楊蘭花 王旭強

(義烏出入境檢驗檢疫局，義烏 322000)

氫醌和苯酚具有一定的滲透力和美白功效，常被添加于美白類化妝品中。由于氫醌、苯酚對人體均有毒性，被國家明令禁止在護膚類化妝品中使用，可是現在很多美容院為了爭取顧客，迎合其快速祛斑的心理需求，四處尋找一涂即白的“神奇水”、“魔力膏”，一些不法廠商為了牟取暴利，投其所好，無視國家法規(guī)，在化妝品中加入大量的違禁物質。

氫醌(對苯二酚)屬于超抑制酪氨酸酶和黑色素細胞毒劑，它通常以2%～4% 的濃度作為工業(yè)生產中的脫色劑使用，后來有人把它用在治療黃褐斑上，確實很有效。于是“氫醌霜”就盛行起來了，并一度被認為是祛斑的首選產品。但后來人們發(fā)現，長期使用“氫醌霜”會導致黑色素細胞死亡，使色素脫失，發(fā)生白斑，或引起褐黃病(oehronosis)。倘若大面積使用，還會引起全身中毒，使肝、腎功能受到嚴重的傷害，甚至導致死亡。因此目前美國、法國的祛斑產品中禁止使用氫醌，而且在產品包裝盒的顯著位置還明確標明“本品中不含氫醌”的字樣。我國強制性國家標準GB 7916-1987《化妝品衛(wèi)生標準》規(guī)定了化妝品中禁用及限用物質，其中對氫醌及苯酚作了明確規(guī)定：氫醌可以在染發(fā)類化妝品中作氧化著色劑，苯酚也只能在洗發(fā)類化妝品中限量使用，禁止加在其它類化妝品中。

近幾年來，國內美白、祛斑產品市場發(fā)展十分迅速，這些產品在給人們帶來皮膚白皙、色斑淡化、祛除色素沉著的同時，給消費者造成傷害的問題也比比皆是，如皮膚紅腫、脫皮等現象時有發(fā)生。所以監(jiān)測檢驗祛斑美白類化妝品的質量，保證消費者用到衛(wèi)生、安全的化妝品已成為當前檢驗檢疫工作的重點。

目前，氫醌、苯酚的檢測方法有分光光度法、氣相色譜法[1]、液相色譜法[2，3]、氣質聯用法[4]。筆者建立了二極管陣列檢測器的高效液相色譜法，該方法具有樣品前處理簡單、快速、靈敏度高、成本低、測定結果準確可靠等特點，為美白類、祛斑類化妝品和香波等日用化學品中氫醌和苯酚的檢測提供了一種有效的分析手段。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1200型，附帶DAD二極管陣列檢測器，美國安捷倫公司；

超聲波清洗器：D-78224型，德國Elma公司；

高速離心機：3-30K型，德國Sigma公司；

分析天平：AL204型，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；

超純水儀：Milli-Q型，美國密理博公司；

有機性樣品濾膜：0.45 μm；

甲醇：色譜純；

氫醌標準物質：Lot 00526，純度99.0%，德國Dr．Ehrenstorfer公司；

苯酚標準物質： Lot 80428，純度 99.5%，德國Dr．Ehrenstorfer公司。

1.2 標準儲備溶液配制

分別精密稱取氫醌、苯酚標準品0.099、0.1212 g，用甲醇溶解后定容至100 mL棕色容量瓶中，分別得到0.990、1.212 mg/mL的氫醌、苯酚標準儲備液，于4℃暗處保存。臨用時將標準儲備液用甲醇稀釋成所需濃度的混合標準工作溶液。

1.3 樣品前處理

準確稱取試樣1.00 g于具塞比色管中，必要時在水浴上餾除乙醇等揮發(fā)性有機溶劑，用甲醇定容至10 mL，充分振蕩，于超聲波清洗器中常溫超聲提取15 min，離心，取上清液過0.45 μm濾膜后備用，同時做試劑空白。

1.4 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB- CN (250 mm×4.6 mm, 5-Micron )；流動相：水-甲醇(體積比為75∶25),等度洗脫；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；進樣量：10 μL；檢測器：二極管陣列(DAD)檢測器，檢測波長為280 nm。

2 結果與討論

2.1 檢測波長

在190～370 nm 波長范圍內進行全波長掃描，氫醌、苯酚均在222、280 nm處有特征吸收，氫醌、苯酚在222 nm 處有一最大吸收峰，在此波長下測定氫醌、苯酚具有較高的靈敏度，但實驗發(fā)現，在此條件下樣品中許多組分都有吸收，對測定產生干擾。為保證二者同時測定，選擇280 nm作為檢測波長。在此條件下氫醌、苯酚有較好的分離效果，干擾少，靈敏度高，分析速度快。

2.2 提取溶劑

根據各個物質的理化性質，選擇了甲醇、甲醇-水、乙腈作為提取溶劑，結果表明，乙腈的提取效果最差且毒性大；甲醇-水系統引入了大量的水溶性雜質；甲醇對各物質的提取效果最好，是理想的提取溶劑，且毒性相對較小，操作簡單。

2.3 提取時間

按照1.3樣品前處理方法，分別在10、 15、 20、 25、 30 min測定提取物的峰面積，結果見表1。由表1可知，最佳提取時間為15 min。

表1 提取時間試驗結果

2.4 色譜柱及流動相

選擇Agilent ZORBAXEclipse XDB -Cl8( 150 mm×4.6 mm, 5-Micron )和Agilent ZORBAX Eclipse XDB- CN ( 250 mm×4.6 mm, 5-Micron )色譜柱及甲醇、不同比例的甲醇-水為流動相，分別進行試驗。試驗結果表明，在Agilent ZORBAX Eclipse XDB- CN柱上以甲醇-水 (體積比為25∶75)為流動相，分析時間短，峰型好，靈敏度高，符合分析要求。在此條件下，氫醌和苯酚混合標準溶液及洗發(fā)香波樣品中添加標準溶液后的色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 氫醌和苯酚混合標準溶液色譜圖

圖2 洗發(fā)香波樣品中添加了氫醌和苯酚混合標準溶液的色譜圖

2.5 線性方程和檢出限

利用氫醌和苯酚標準儲備液配制成氫醌濃度依次為7.920、15.840、31.680、39.600、79.200 mg/L，苯酚濃度依次為9.696、19.392、38.784、48.480、96.960 mg/L的系列標準混合工作溶液。按照1.4的條件分別進行測定，以氫醌或苯酚的濃度(x)對相應的峰面積(y)進行線性回歸，在7.920～79.200 mg/L范圍內氫醌線性方程為y= 10.370 75x-1.156 02，相關系數r=0.999 99；在9.696～96.960 mg/L范圍內，苯酚的線性方程為y=4.176 40x+0.172 47，相關系數r=0.999 99。以3倍信噪比計算氫醌和苯酚的檢出限分別為0.049 29、0.125 8 mg/kg。

2.6 精密度試驗

對氫醌濃度為7.920 mg/L和苯酚濃度為9.696 mg/L的混合標準溶液連續(xù)進樣6次，測定結果見表2。

表2 精密度試驗結果

2.7 回收試驗

對不含氫醌和苯酚的洗發(fā)香波樣品進行加標回收試驗，加入3個不同濃度的混合標準溶液，每個濃度平行測定6次，按1.3方法進行樣品處理，在1.4條件下進行測定，結果見表3。由表3可知，加標回收率為99.05%～100.90%。

表3 加標回收試驗結果(n=6)

3 結論

建立的美白類、祛斑類化妝品和香波中氫醌和苯酚的高效液相色譜-二極管陣列檢測器測定方法，樣品前處理簡單，操作方便，線性范圍較寬，檢出限低，精密度和準確度高，同時檢測成本較低，可滿足用戶的實際需要，也為化妝品質量監(jiān)督提供有力的技術支撐。

[1] 劉秋華,趙晶,賀勇,等.市售美白祛斑化妝品氫醌、苯酚含量調查[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2003, 13(2):212.

[2] 楊紅,劉秋華.化妝品中的氫醌、苯酚確認方法[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2005, 15(5):550-553.

[3] 張玉黔,李宏志,賈薇,等.高效液相色譜法同時測定化妝品中氫醌、苯酚、抗生素和防腐劑等11種物質[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008, 18(8):1 548-1 550.

[4] 趙同剛.化妝品衛(wèi)生規(guī)范[M].北京：軍事醫(yī)學科學出版社，2007.