不同測(cè)定方法對(duì)綠茶中茶多酚含量測(cè)定結(jié)果的影響

周順珍 周?chē)?guó)蘭 何 萍 鄭文麗

(貴州省茶葉研究所，貴州湄潭 564100)

茶葉是中華民族傳統(tǒng)的保健飲品，目前中國(guó)茶園面積列居世界首位，產(chǎn)量居世界第二位。茶已成為越來(lái)越多中外人士飲品的選擇，不僅因?yàn)椴璞旧淼姆枷阏T人，而且飲茶作為一種保健方式正逐漸被人們所接受。茶多酚是茶葉中酚類(lèi)及其衍生物的總稱(chēng)，常稱(chēng)為多酚類(lèi)，它是茶葉中最重要的保健成分之一，它的藥理作用已得到人們的廣泛認(rèn)識(shí)。

目前測(cè)定綠茶中茶多酚含量的方法有GB/T 8313-2008《福林酚試劑比色法》(以下簡(jiǎn)稱(chēng)GB 2008)已于2008年10月1日實(shí)施，該新標(biāo)準(zhǔn)是對(duì)GB/T 8313-2002《酒石酸亞鐵比色法》(以下簡(jiǎn)稱(chēng)GB 2002)的修訂。新標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施后，舊標(biāo)準(zhǔn)已作廢，而原有的茶葉產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)茶多酚的指標(biāo)限量還未作相應(yīng)的修改，多數(shù)企業(yè)還不能接受，仍要求采用舊標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)。筆者在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，新標(biāo)準(zhǔn)與舊標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)結(jié)果有較大差異，為此對(duì)福林酚比色法測(cè)定綠茶中茶多酚含量進(jìn)行了探討。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

分析天平:CP114型，感量0.000 1g，奧豪斯儀器(上海)有限公司；

離心機(jī)：800型，上海浦東物理光學(xué)儀器廠；

過(guò)濾器：GG-17型，蘇州津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：TU-1810型，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；

酒石酸鉀鈉、硫酸亞鐵、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、福林酚試劑、沒(méi)食子酸、碳酸鈉、甲醇：分析純；

實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水；

茶葉樣品：于2010年4月由貴州省茶葉研究所提供的試驗(yàn)茶。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

(1)GB 2008標(biāo)準(zhǔn)

稱(chēng)取0.2 g均勻的茶葉磨碎試樣于10 mL離心管中(重復(fù)3次)，加入5 mL在70℃水浴中預(yù)熱過(guò)的70%甲醇溶液，輕輕搖動(dòng)(應(yīng)盡量避免樣品粘于試管壁上)，使其均勻濕潤(rùn)，然后立即移入70℃水浴中，浸提10 min(隔5 min搖動(dòng)一次)，浸提后冷卻至室溫，轉(zhuǎn)入離心機(jī)，以3 500 r/min離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶。殘?jiān)? mL 70%甲醇溶液提取一次。重復(fù)以上操作，然后合并提取液定容至10 mL，用過(guò)濾器減壓過(guò)0.45 μm膜。移取該溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，待測(cè)。

用移液管分別吸取不同體積的高濃度(10、20、30、40、50 μg/mL)沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)工作液A、B、C、D、E、水(作空白對(duì)照用)及測(cè)定液1.0 mL于25 mL容量瓶中，在每個(gè)容量瓶中分別加10%的福林酚試劑5.0 mL，搖勻。反應(yīng)8 min，反應(yīng)溫度15～25℃，然后加4.0 mL 7.5%Na2CO3溶液，加水定容至刻度，搖勻，室溫下放置60 min。用10 mm比色皿于765 nm波長(zhǎng)處用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度。用不同體積的高濃度沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)工作液A、B、C、D、E的光密度值作參考。

(2)GB 2002標(biāo)準(zhǔn)

稱(chēng)取3 g均勻的茶葉磨碎試樣于500 mL錐形瓶中(重復(fù)2次)，加沸蒸餾水450 mL，立即移入沸水浴中，浸提45 min(隔10 min搖瓶一次)，浸提完畢后立即趁熱減壓過(guò)濾。殘?jiān)蒙倭繜嵴麴s水洗滌2～3次。并將濾液轉(zhuǎn)入500 mL容量瓶中，冷卻后用蒸餾水定容至刻度，搖勻，待測(cè)。

用移液管吸取上述溶液1.0 mL于25 mL容量瓶中，加4 mL水、5 mL酒石酸亞鐵溶液，充分混合，再加pH 7.5的磷酸鹽緩沖液至刻度，用10 mm比色杯，在波長(zhǎng)540 nm處，以試劑空白溶液作參比，測(cè)定吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 測(cè)試液的選擇(GB 2008)

由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)0.45 μm膜折疊時(shí)易碎，過(guò)濾得不到理想的濾液，且過(guò)濾極慢，因此采用過(guò)濾器減壓過(guò)0.45 μm膜。在設(shè)置2次重復(fù)測(cè)定時(shí)誤差較大，可能是過(guò)濾時(shí)洗瓶造成，為此設(shè)置重復(fù)5次，分別得到濾液1～濾液5，并對(duì)其進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果列于表1。從表1可以看出，在制備樣品溶液過(guò)濾時(shí)洗瓶造成濾液1與濾液2～濾液5測(cè)定結(jié)果偏差較大，濾液2～濾液5測(cè)定結(jié)果的偏差在誤差范圍內(nèi)，因此實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)重復(fù)3次，濾液1用于洗過(guò)濾器，濾液2、濾液3作為測(cè)試液。

表1 過(guò)濾時(shí)對(duì)樣品溶液濃度的影響

2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

以空白水為參比，在765 nm處用紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定兩組0、10、20、30、40、50 μg/mL和0、20、40、60、80、100 μg/mL 5個(gè)不同濃度的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，沒(méi)食子酸濃度c(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性方程為A= 0.004 2c+0.001 4，r2=0.996；A=0.004 1c+0.006 6，r2=0.998 2，滿足分光光度法的實(shí)驗(yàn)要求。

2.3 試驗(yàn)結(jié)果比對(duì)

采用兩種方法對(duì)1#～6#茶葉樣品進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果列于表2。

表2 兩種方法測(cè)定結(jié)果比對(duì) %

由表2中可以看出，茶多酚含量較高的1#～4#樣品，新標(biāo)準(zhǔn)比舊標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定結(jié)果下降了29.7%～30.3%；茶多酚含量較低的5#、6#樣品，新標(biāo)準(zhǔn)比舊標(biāo)準(zhǔn)降低了32.6%～34.2%。由此可得出茶葉中茶多酚含量越低，兩種測(cè)定方法測(cè)得值差異越大。筆者在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，GB 2002作為茶葉中茶多酚含量測(cè)定的前處理方法,具有簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)，儀器設(shè)備簡(jiǎn)單的特點(diǎn)；而GB 2008作為前處理方法操作難度較大，較適合于重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和質(zhì)監(jiān)部門(mén)。

3 討論

通過(guò)試驗(yàn)，筆者認(rèn)為造成兩種方法測(cè)定結(jié)果較大差異的原因可能是：

(1)原理不同。GB 2002茶葉中多酚類(lèi)物質(zhì)能與亞鐵離子形成紫藍(lán)色絡(luò)合物，最大吸收波長(zhǎng)為540 nm，GB 2008福林酚試劑氧化茶多酚中—OH基團(tuán)，并顯藍(lán)色，最大吸收波長(zhǎng)為765 nm。

(2)樣品提取方法不同。GB 2002提取樣品時(shí)采用沸水，而GB2008提取樣品時(shí)采用70℃的70%甲醇。

(3)參考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不同。GB 2002采用經(jīng)驗(yàn)系數(shù)來(lái)計(jì)算樣品中茶多酚的含量，而GB 2008則采用沒(méi)食子酸作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)?yè)Q算樣品中茶多酚含量，計(jì)算更為準(zhǔn)確。這就提出了新的問(wèn)題：新標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施后，舊標(biāo)準(zhǔn)已作廢，原有的茶葉產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)茶多酚的指標(biāo)限量已不適用，要作相應(yīng)的修改。在企業(yè)送樣檢測(cè)茶多酚項(xiàng)目時(shí)，要向企業(yè)說(shuō)明情況，以免企業(yè)對(duì)檢測(cè)出的數(shù)據(jù)有疑問(wèn)，引起誤解。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GB 2008標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)不詳細(xì)，如標(biāo)準(zhǔn)中寫(xiě)到用移液管分別吸取沒(méi)食子酸工作液及測(cè)試液各1.0 mL于刻度試管內(nèi)，應(yīng)注明該刻度試管的容量；制備樣品溶液時(shí)不宜攪拌，只能輕輕搖動(dòng)試管；測(cè)試液過(guò)0.45 μm膜時(shí)需用過(guò)濾器。

[1] 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所.農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)手冊(cè) 茶葉卷 [M].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008：1.

[2] GB/T 8313-2002 茶 茶多酚的測(cè)定[S].

[3] GB/T 8313-2008 茶葉中茶多酚和兒茶素類(lèi)的檢測(cè)[S].

[4] 黃皓，毛志方,涂云飛,等.兩種方法測(cè)定茶葉中茶多酚含量的比較[J].中國(guó)加工，2009(2)：43-44.