高效液相色譜法測(cè)定食品中的姜黃素

夏 春

(安徽國(guó)家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化與監(jiān)測(cè)中心，合肥 230051)

色素與食品的關(guān)系密不可分，色素賦予食品誘人的色澤，從而給消費(fèi)者帶來(lái)良好的感官質(zhì)量和強(qiáng)烈購(gòu)買(mǎi)欲。姜黃素(Curcumin)作為食品的著色劑一直為人們所利用，是國(guó)內(nèi)外允許使用的重要天然食用色素之一。姜黃素(E100)是歐盟批準(zhǔn)使用的食品添加劑，據(jù)2010年9月6日食品伙伴網(wǎng)訊：歐洲食品安全局根據(jù)歐洲委員會(huì)的要求，食品添加劑及營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑科學(xué)委員會(huì)(ANS)被要求重新科學(xué)評(píng)估姜黃素(E100)作為食用色素的安全性。我國(guó)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2007[1]規(guī)定姜黃素可作為食用色素在人造黃油、碳酸飲料、膠基糖果、巧克力制品、冷凍飲品等食品中使用，同時(shí)規(guī)定了使用量。GB 2760-2007[1]規(guī)定姜黃在食品中最大使用量以姜黃素計(jì)。目前姜黃素的測(cè)定方法主要為薄層色譜和液相色譜法等[2-5]，我國(guó)目前尚未制定食品中姜黃素的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，因此建立一種快速、簡(jiǎn)便、高靈敏的檢測(cè)方法十分必要。為此筆者建立了高效液相色譜法測(cè)定食品中的姜黃素。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：附帶LC20A型PDA檢測(cè)器，日本島津公司；

甲醇、乙腈：色譜純；

乙腈、乙酸氨、正己烷：分析純；

姜黃素對(duì)照品：純度不低于99%，CAS-458-37-3；

姜黃素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：1 mg/mL，準(zhǔn)確稱(chēng)取10 mg姜黃素對(duì)照品，以甲醇溶解定容至10 mL，于0～4℃避光保存，儲(chǔ)存時(shí)間為6個(gè)月。

1.2 液相色譜分析條件

色譜柱：反相C18柱(250 mm×4 .6 mm，5 μm)，美國(guó)Agilent公司；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.05%乙酸氨水溶液(B)洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)：430 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

液態(tài)樣品直接取樣，固態(tài)樣品置入粉碎機(jī)(或均質(zhì)機(jī))中粉碎均勻。

酒類(lèi)、碳酸飲料等食品：取1 mL樣品，超聲脫氣，以甲醇定容至10 mL，漩渦均勻，超聲10 min，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，作為測(cè)試液。

果蔬汁飲料等食品(含固態(tài)顆粒流體)：取1 mL樣品，以10 000 r/min離心5 min，將清液轉(zhuǎn)入25 mL試管中，加入10 mL甲醇，漩渦均勻，超聲10 min，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，作為測(cè)試液。

固態(tài)樣品：稱(chēng)取5.0 g試樣，置于50 mL具塞試管瓶中，加50 mL甲醇，漩渦均勻，超聲提取10 min，冷凍離心(-10℃，10 000 r/min)10 min，取1 mL經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，作為測(cè)試液。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

對(duì)姜黃素對(duì)照品進(jìn)行紫外可見(jiàn)波長(zhǎng)掃描，姜黃素在425 nm處有最大吸收峰，掃描圖見(jiàn)圖1?！妒称诽砑觿?姜黃色素》標(biāo)準(zhǔn)[6]指出在425 nm附近有最大吸收峰，因此方法選擇425 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，在該波長(zhǎng)處檢測(cè)靈敏度高、干擾小。姜黃素對(duì)照品色譜圖見(jiàn)圖2。

圖1 姜黃素對(duì)照品的波長(zhǎng)掃描圖

圖2 姜黃素對(duì)照品的液相色譜圖

2.2 提取方式的選擇

姜黃素溶于甲醇、乙醇、丙酮、冰乙酸等試劑，不溶于水、乙醚等試劑。進(jìn)行提取溶劑選擇試驗(yàn)，幾種試劑對(duì)姜黃素的提取率基本滿(mǎn)足試驗(yàn)要求,其中甲醇的提取率最高，因此提取試劑選擇甲醇。

用同一試劑分別采用索氏法、加熱回流法、超聲波振蕩法對(duì)供試品進(jìn)行提取[4,7]，結(jié)果用前兩種方法試驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)，操作較繁瑣；而采用超聲波振蕩法提取效果最佳。因此實(shí)驗(yàn)選擇超聲波振蕩提取法。

2.3 線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

分別吸取適量姜黃素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用甲醇稀釋成濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，進(jìn)樣分析，以峰面積為縱坐標(biāo)(y)，姜黃素濃度為橫坐標(biāo)(x)進(jìn)行線性回歸，在0.5～50.0 μg/mL范圍內(nèi)，得到良好的線性關(guān)系,線性方程為y=7 440x-29 500，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。根據(jù)信噪比S/N=10,計(jì)算姜黃素的檢出限為1 mg/kg。

2.4 精密度和回收試驗(yàn)

在已知不含姜黃素的碳酸飲料中分別添加3種不同濃度的姜黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)水平平行6次測(cè)定，得到加標(biāo)回收率為89.0%～98.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.13% ～3.26%，試驗(yàn)數(shù)據(jù)列于表1。

2.5 樣品測(cè)定

采用本方法對(duì)人造黃油、碳酸飲料、膠基糖果、巧克力制品等食品中姜黃素進(jìn)行檢測(cè)，部分樣品中檢出姜黃素，并根據(jù)GB 2760-2007進(jìn)行了判定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 加標(biāo)回收試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

姜黃素提取方法簡(jiǎn)單、快速；液相色譜法測(cè)定準(zhǔn)確、重復(fù)性好、靈敏度高，滿(mǎn)足食品中姜黃素的測(cè)定、監(jiān)測(cè)和監(jiān)督的要求。

[1] GB 2760-2007 食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2] 甘賓賓，蔡卓.HPLC法測(cè)定保健食品中姜黃素含量的研究[J].化工技術(shù)與開(kāi)發(fā)，2007，36(8)，38-39.

[3] 施冰.高效液相色譜法測(cè)定食品中姜黃素[J].福建分析測(cè)試，2008，17(3)：28-30.

[4] 羅紅霞，方清茂，潘曉鷗.姜黃素的提取及其含量測(cè)定研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥業(yè),2004(6)：74-75.

[5] 徐仲溪，王坤波.姜黃素的高效薄層色譜分析[J].食品科技，2004，25(6)：156-159.

[6] QB 1415-1991 食品添加劑 姜黃色素[S]

[7] 劉樹(shù)興，胡小軍，張薇.超聲強(qiáng)化提取姜黃色素的研究[J].食品科技，2004(2)：53-55.