乳腺癌C-erbB-2表達(dá)在新輔助化療療效中的預(yù)見(jiàn)性

蔡 媛 喬紅梅 鄭 甦 馮建麗 車(chē)瀟良 馬 蓉

原癌基因Her - 2 /neu(C - erbB2)是人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體家族的第2個(gè)成員，該家族中的受體均位于細(xì)胞膜上，在許多組織中都能發(fā)現(xiàn)。研究表明C-erbB-2過(guò)表達(dá)可導(dǎo)致乳腺上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，增加腫瘤細(xì)胞的侵襲性，并對(duì)某些化療藥物耐藥[1]。本研究通過(guò)檢測(cè)化療前后乳腺癌組織中C-erbB-2的表達(dá)，以了解化療是否會(huì)影響C-erbB-2的表達(dá)；同時(shí)對(duì)新輔助化療的療效與C-erbB-2的表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行評(píng)測(cè)，以證實(shí)C-erbB-2在乳腺癌新輔助化療療效預(yù)測(cè)中的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2008年1月～2009年9月間滿(mǎn)足以下條件的53例乳腺癌患者：①化療前通過(guò)細(xì)針穿刺活檢首次確診為乳腺癌，并行C-erbB-2檢測(cè)；②臨床Ⅱ、Ⅲ期患者；③腫瘤病灶大小可以檢測(cè)；④無(wú)治療史；⑤心、肝、腎功能正常。初期檢查包括：體檢、乳腺鉬靶及B超，部分行乳腺M(fèi)RI檢查，常規(guī)行肝腎功能、心電圖、血常規(guī)、胸片或胸部CT、肝臟超聲檢查及全身骨掃描，部分患者加作胸部CT。原始腫瘤的大小通過(guò)乳腺B超或鉬靶測(cè)量，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況通過(guò)體檢及乳腺鉬靶、超聲或CT 的檢查獲得，每個(gè)化療周期結(jié)束后均重復(fù)進(jìn)行以上檢查項(xiàng)目來(lái)評(píng)估化療反應(yīng)。

所有患者均為女性，年齡38～65歲,中位年齡49歲。組織學(xué)類(lèi)型：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌46例,小管癌1例，浸潤(rùn)性小葉癌2例,黏液癌3例，微乳頭狀癌1例。臨床分期均為Ⅱa以上?；熃y(tǒng)一為2個(gè)周期，化療根據(jù)不同患者的身體狀況及經(jīng)濟(jì)情況給予不同化療方案，有以下幾種：主要選擇以含恩環(huán)類(lèi)的聯(lián)合化療方案，部分與紫杉類(lèi)聯(lián)合，僅1例給予CMF(環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶)方案。第1個(gè)周期結(jié)束后經(jīng)評(píng)價(jià)化療無(wú)效的患者更改化療方案重新進(jìn)入評(píng)價(jià)程序或改變總體治療計(jì)劃，改用手術(shù)、放療等。

1.2 方法

1.2.1 試劑 鼠抗人C-erbB-2單抗及其免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自福建MAXin- Bio公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)方法 應(yīng)用Elivision免疫組化法分別測(cè)定化療前、后乳腺癌組織中C-erbB-2的表達(dá)。全部病例術(shù)前作細(xì)針穿刺活檢或腫物切取活檢，獲取的標(biāo)本經(jīng)10％中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm 厚切片，用于常規(guī)及C-erbB-2的檢測(cè)。組織經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精至水化，pH 6.0檸檬酸緩沖液進(jìn)行高溫高壓抗原修復(fù)，滴加相應(yīng)一抗，室溫下孵育1 h，PBS沖洗，加生物素標(biāo)記的二抗，37℃30 min，PBS沖洗，DAB染色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用試劑盒已知陽(yáng)性片或組織內(nèi)殘存的正常乳腺組織作陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判定 根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)乳腺癌TNM分期第6版對(duì)腫瘤進(jìn)行臨床分期。根據(jù)Miller and payer分級(jí)對(duì)化療后的反應(yīng)情況進(jìn)行分類(lèi)：完全無(wú)反應(yīng)、病理緩解(包括部分緩解及完全緩解)、病理完全緩解。病理完全緩解(pathologic complete response,PCR)指乳腺及腋窩組織中均無(wú)浸潤(rùn)性癌，殘留的導(dǎo)管原位癌包括在PCR范疇中。

所有的免疫組化染色切片均采用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察，并由兩位高年資病理主治醫(yī)師雙盲法讀片。C-erbB-2陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞膜。按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的所占比例以及染色程度分為4級(jí)：(-)為<10％腫瘤細(xì)胞染色或無(wú)染色；(+)為≥10％的腫瘤細(xì)胞胞膜不連續(xù)、較弱的淡黃色；(++)為≥10％的腫瘤細(xì)胞胞膜連續(xù)的染色，呈黃或深黃色；(+++)為≥50％的腫瘤細(xì)胞胞膜連續(xù)染色，呈棕黃色。陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：其中將(-)、(+)定為C-erbB-2(-)，(++)、(+++)定為C-erbB-2( + )。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

組間差異性比較采用卡方檢驗(yàn)或精確概率法。所有數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析處理。

2 結(jié)果

2.1 新輔助化療的療效

53例乳腺癌患者新輔助化療后，病理完全無(wú)反應(yīng)的12例(22.6％)，病理緩解(包括部分緩解及完全緩解)41例(77.4％)，其中病理完全緩解3例(5.7％)。

2.2 新輔助化療前后C-erbB-2表達(dá)變化情況

53例乳腺癌患者中，3例化療后病理完全緩解無(wú)癌組織進(jìn)行檢測(cè)，余50例患者中C-erbB-2的變化情況：化療前后表達(dá)一致的43例，一致性為86％；表達(dá)發(fā)生完全相反改變的是7(14.0％)例，其中由化療前3例陰性轉(zhuǎn)為化療后陽(yáng)性，4例由陽(yáng)性轉(zhuǎn)為陰性。化療前后C-erbB-2的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.051，P=0.822)(表1)。

2.3 C-erbB-2陽(yáng)、陰性組化療有效率差異比較

C-erbB-2表達(dá)陽(yáng)性的病例化療有效率為86.7％(13/15)、表達(dá)陰性的病例化療有效率為73.7％(28/38)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無(wú)差異性(P= 0.472)(表2)。

表1 新輔助化療前后ER、PR、C-erbB-2表達(dá)變化的比較(例)

表2 C-erbB-2表達(dá)陽(yáng)性、陰性組化療有效率差異比較

3 討論

新輔助化療是乳腺癌規(guī)范化治療的一部分，研究[2～6]顯示其療效顯著。本研究中53例乳腺癌患者新輔助化療后病理緩解率達(dá)77.4％，病理完全緩解率達(dá)5.7％?；煹目傆行逝c文獻(xiàn)研究結(jié)果相近，但達(dá)到PCR者稍低于國(guó)外研究結(jié)果(10％～20％)[2～4]。新輔助化療后達(dá)到PCR的比率盡管不高，但研究[2～4]顯示達(dá)到PCR的患者相對(duì)化療后腫瘤依然有殘留的患者其無(wú)病生存率及總生存率均明顯增加。

新輔助化療有其不盡人意之處。一些新輔助化療無(wú)效的病例，由于手術(shù)治療時(shí)間的推延，使某些原本可經(jīng)手術(shù)切除的腫瘤變?yōu)椴荒芮谐?；化療?huì)導(dǎo)致腫瘤的真正病理分期變得模糊不清，從而影響后期的治療以及療效的評(píng)價(jià)；臨床反應(yīng)有效的病例又會(huì)造成某些腫瘤預(yù)后因素信息的丟失，如淋巴結(jié)狀況與腫瘤大小，有可能導(dǎo)致后期治療不當(dāng)。因此能在新輔助化療前即預(yù)知療效，從而選擇敏感病例，并選擇適宜藥物進(jìn)行化療將能彌補(bǔ)其不足，提供乳腺癌個(gè)體化治療的新模式。

目前臨床上入選新輔助化療方案的乳腺癌患者，均需要在化療前行細(xì)針穿刺活檢獲取病變組織，然后對(duì)病變組織分型確診，同時(shí)檢測(cè)ER、PR、C-erbB2的表達(dá)，檢測(cè)結(jié)果將作為后期治療、評(píng)判預(yù)后及研究的指標(biāo)[7]。細(xì)針穿刺活檢獲得的組織，相對(duì)于腫瘤而言組織很少，據(jù)其檢測(cè)的結(jié)果能否代表整個(gè)瘤體的特性呢？Taucher等[8]研究1994～2000年間722例乳腺疾病患者的術(shù)前穿刺標(biāo)本與術(shù)后大標(biāo)本的病理特征及ER、PR的檢測(cè)情況被對(duì)照研究，62.3％(450/722)的病例活檢診斷為惡性，術(shù)后證實(shí)無(wú)1例誤診，可見(jiàn)這樣的研究基礎(chǔ)是可行的。本研究通過(guò)測(cè)定乳腺癌患者新輔助化療前后C-erbB-2的表達(dá)，結(jié)果顯示化療前后C-erbB-2表達(dá)的一致性為86％；陽(yáng)陰性發(fā)生改變的是14％，提示新輔助化療對(duì)乳腺癌組織中C-erbB-2的表達(dá)無(wú)明顯影響，以活檢標(biāo)本C-erbB-2的檢測(cè)結(jié)果做研究是可行的，活檢標(biāo)本C-erbB-2的檢測(cè)結(jié)果能代表整個(gè)瘤體的特性。已有一些C-erbB-2與新輔助化療療效相關(guān)性的研究，但結(jié)論不一。Miyoshi等[9]對(duì)78例患者給予4個(gè)周期的多西紫杉醇的新輔助化療方案后，對(duì)照研究了化療療效與腫瘤生物因子及病理參數(shù)的關(guān)系，PCR率的高低與是否絕經(jīng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及ER、PR、c-erbB2、ki-67的表達(dá)均無(wú)關(guān)，僅與乳腺癌細(xì)胞核的級(jí)別有關(guān)，核的級(jí)別低者較級(jí)別高者PCR率更高。Tiezzi等[10]通過(guò)對(duì)68例患者行多西紫杉醇、表柔沙星聯(lián)合化療，并行多變量分析，只有c-erbB2的高表達(dá)與無(wú)病生存率、總生存率相關(guān)，而ER、PR、P51、P21等的表達(dá)及臨床病理特征均不能預(yù)示化療的病例緩解率。結(jié)論是僅僅c-erbB2的表達(dá)對(duì)化療后病例緩解是一重要的預(yù)示因子。還有研究顯示，c-erbB2在阿霉素和環(huán)磷酰胺化療方案中可提示化療的療效，c-erbB2陽(yáng)性較陰性病例有較高的病例緩解率，但加入多西紫杉醇后c-erbB2陽(yáng)性、陰性的化療效果一樣[11]。本研究結(jié)果顯示： C-erbB-2的表達(dá)與化療療效無(wú)相關(guān)性，提示C-erbB-2不能作為新輔助化療療效的預(yù)測(cè)因子。依靠靶向因子的表達(dá)進(jìn)行新輔助化療敏感病例的選擇方面可能還需要更多病例研究證實(shí)。

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