HPLC法測定杠板歸不同藥用部位槲皮素的含量

李元宏，楊務(wù)彬，蘭 鴻（湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院藥學(xué)部，十堰市 442000）

杠板歸為蓼科蓼屬植物貫葉蓼Polygonum perfoliatum L.的全草，別名蛇倒退、梨頭刺、河白草、蛇不過、穿葉蓼等[1]，具有清熱解毒、利水消腫的作用，主治水腫、小便不利、痢疾、腹瀉、百日咳、癰癤瘡毒、皮炎、濕疹、毒蛇咬傷等，是一種具有很高藥用價(jià)值的傳統(tǒng)中草藥。在實(shí)際應(yīng)用中，筆者發(fā)現(xiàn)其不同藥用部位的治療效果不同，故本文以其主要活性成分槲皮素作為定量指標(biāo)，采用高效液相色譜（HPLC）法對杠板歸不同藥用部位槲皮素含量進(jìn)行測定。

1 儀器與試藥

LC-10A型HPLC儀、SPD-10A型紫外檢測器（日本島津公司）；HW-2000型色譜工作站（南京千譜軟件有限公司）；FA2004型電子分析天平（上海精科公司）。

槲皮素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100081-200406）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；杠板歸采自武當(dāng)山八仙觀3個(gè)不同地點(diǎn)，經(jīng)湖北醫(yī)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室陳吉炎教授鑒定為貫葉蓼P.perfoliatum L.。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DiamonsilTMC-18（200 mm×4.6 mm，5 μm），加裝Phenomenex保護(hù)柱；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：360 nm[2]；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.槲皮素對照品；B.供試品Fig 1 HPLC chromatogramsA.quercetin control；B.test sample

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)真空干燥至恒重的槲皮素對照品適量，用甲醇配成每1 mL含槲皮素0.50 mg的對照品貯備液。精密量取該貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含槲皮素0.050 mg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取杠板歸藥材粉末（過三號(hào)篩）約2.0 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液20 mL，加入鹽酸10 mL，置水浴中加熱水解3 h[3]，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取上述對照品貯備液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，分置6支10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀，每一濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，求平均峰面積。以平均峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，槲皮素進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝3.679×103X+19.746（r＝0.999 8，n＝18）。結(jié)果表明，槲皮素進(jìn)樣量在0.05～1.00 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果，RSD＝1.34%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、24 h各進(jìn)樣10 μL，測定峰面積。結(jié)果，RSD＝1.13%（n＝6），表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一批杠板歸粉末（約1.0 g）6份，精密加入槲皮素對照品貯備液3 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按上述方法測定槲皮素含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.8 樣品含量測定

取3個(gè)不同采樣點(diǎn)杠板歸根、莖、全草（藥材）粉末（過三號(hào)篩）各約2.0 g，葉粉末約1.0 g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，計(jì)算槲皮素含量。樣品含量測定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Result of content determination of samples（n＝3）

3 討論

本試驗(yàn)以杠板歸中槲皮素作為定量指標(biāo)，利用HPLC法對杠板歸的根、莖、葉及全草（藥材）中槲皮素含量進(jìn)行測定，結(jié)果證實(shí)杠板歸不同藥用部位槲皮素含量存在較大差異。

杠板歸以全草或干燥地上部分入藥，由于各藥用部位所含成分差異較大以及根、莖、葉在杠板歸藥材中所占比例懸殊，故應(yīng)在藥材收購、使用過程中引起重視。

綜上，本方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于杠板歸的質(zhì)量控制。

[1]《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編（上冊）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：425.

[2] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：155.

[3] 王啟硯，范常龍，劉 青.HPLC法測定杠板歸中槲皮素的含量[J].中國藥師，2010，13（10）：1 467.