膠艾顆粒劑對正常小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響

李祥華，許甲鳳，杜亞明 (長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434000)

張家軍 (長江大學(xué)附屬第一醫(yī)院 荊州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 荊州 434000)

膠艾顆粒劑對正常小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響

李祥華，許甲鳳，杜亞明
(長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434000)

張家軍
(長江大學(xué)附屬第一醫(yī)院 荊州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 荊州 434000)

目的：探討膠艾顆粒劑的免疫作用及其機(jī)制。方法：取健康昆明小鼠80只隨機(jī)分為正常對照組、膠艾顆粒劑高、中、低劑量組，每組20只。正常對照組給予生理鹽水，膠艾顆粒劑高劑量組灌胃給予試藥20g/kg，中劑量組給予10g/kg，低劑量組給予5g/kg，連續(xù)15d。采用重量法稱量小鼠脾臟和胸腺質(zhì)量，以其質(zhì)量與體質(zhì)量之比作為胸腺和脾臟指數(shù)。Giemsa染色計(jì)數(shù)腹腔巨噬細(xì)胞(PMΦ)并計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。用比色法測定紅細(xì)胞(RBC)裂解釋放的空斑形成細(xì)胞(PFC)量。采用溫育法計(jì)算綿羊RBC(SRBC)致敏小鼠抗體生成能力。觀察Giemsa染色后淋巴細(xì)胞個(gè)數(shù)并計(jì)算母細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。結(jié)果：膠艾顆粒劑能增加小鼠脾臟和胸腺的重量(高、中劑量組均P<0.01 ，低劑量組P<0.05)；增強(qiáng)小鼠PMΦ的吞噬能力(高、中劑量組均P<0.01，低劑量組P<0.05)；提高小鼠溶血值，增加PFC數(shù)(高劑量組P<0.01，中、低劑量組均P<0.05)；促進(jìn)SRBC致敏小鼠抗體生成(高劑量組P<0.01，中、低劑量組均P<0.05)；能提高小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率(高劑量組P<0.01，中、低劑量組均P<0.05)。高劑量組作用與低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：膠艾顆粒劑的免疫增強(qiáng)作用可能與其能使胸腺和脾臟質(zhì)量增加，PMΦ的吞噬能力增強(qiáng)，淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率升高及抗體能力加強(qiáng)等作用有關(guān)。

膠艾顆粒劑；免疫；免疫調(diào)節(jié)劑；小鼠

膠艾顆粒劑是由膠艾湯經(jīng)劑型改造而成。原方是張仲景治療婦人下血之良方，為補(bǔ)血止血、調(diào)經(jīng)安胎之劑，是臨床治療功能性子宮出血的一個(gè)重要方劑。前期研究表明膠艾顆粒劑有止血[1]和補(bǔ)血健脾[2]作用。筆者探討了膠艾顆粒劑對正常小鼠免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 試驗(yàn)藥物 膠艾顆粒劑，湖北省荊州市津奉藥業(yè)發(fā)展有限公司，批號2006091601。

1.1.2動物 清潔級小鼠，體質(zhì)量(20±2)g；雌雄各半，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物許可證號：SYXK(鄂)2004-0028。

1.1.3 試劑 Giemsa染液、淋巴細(xì)胞分離液，上?；瘜W(xué)試劑廠，批號 070713；PRMI-1640、植物血凝素(PHA)，Sigma公司(美國)，批號 3305RB560；L-谷氨酰胺，上海東風(fēng)化學(xué)試劑廠，批號0511143；小牛血清，杭州四季青生物工程公司，批號20070506。

1.1.4儀器 ThermoLabsystems Multisken M3 型酶標(biāo)儀，芬蘭；LD4-2A型低速離心機(jī)，北京離心機(jī)廠；765C型分光光度計(jì)，上海分析儀器廠；Leica DMLB2型光學(xué)顯微鏡，德國；PG3022型酶聯(lián)免疫檢測儀，華東電子管廠。

1.2方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物分組與處理 取小白鼠，隨機(jī)分為正常對照組，膠艾顆粒劑(試藥)高、 中、低劑量組，共4組，每組20只。試藥組每組分別灌胃給予膠艾顆粒劑(使每ml含藥液2g)，試藥高劑量組20g/kg，試藥中劑量組10g/kg，試藥低劑量組5g/kg， 1次/d，連續(xù)15d。正常對照組給予同樣量的生理鹽水。

1.2.2 小鼠免疫器官指數(shù)的檢測 方法計(jì)算每組動物器官指數(shù)。

1.2.3小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(PMΦ)吞噬功能的檢測 方法每鼠腹腔注射(ip)10%蛋白胨0.2ml，32 h后ip新鮮雞RBC 0.5ml，30min后處死動物，立即剖腹，洗出腹腔液，37℃溫育15min后離心，取細(xì)胞懸液涂片，甲醇固定，Giemsa染色后在油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)PMΦ。以PMΦ吞噬雞 RBC 的吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)為指標(biāo)表示藥物對小鼠PMΦ吞噬功能的影響。

1.2.4小鼠空斑形成細(xì)胞(PFC)的檢測 方法每鼠ip 5% SRBC 0.2ml，4d后放血致死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液 ( 約5×106個(gè)/ml )。取該懸液0.5ml，加入0.2% SRBC和1∶10 小鼠血清各0.5ml，混勻。另設(shè)不加補(bǔ)體作為空白對照，37℃ 溫育1h 后離心，取上清液比色(波長為413nm)，測定 紅細(xì)胞裂解釋放的PFC量 ( 以D413值表示 ) 。

1.2.5 小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率試驗(yàn) 方法，取血0.1ml加入1.8ml滅菌的PRMI-1640(內(nèi)含20%小牛血清，30.0g/L谷氨酰胺1.0ml)，再加入PHA 0.1ml，37℃溫育3d后吸出血清，加8.5g/L氯化銨4ml，混勻后37℃水浴10min，離心。取沉淀物滴加于玻片上，Giemsa染色液染色，油鏡下觀察200個(gè)淋巴細(xì)胞，計(jì)算其母細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。

1.2.6SRBC致敏小鼠抗體生成的檢測 方法，每鼠ip10% SRBC 0.2ml，停藥后次日脫頸椎取血，離心取血清，56℃滅活30min，以生理鹽水倍比稀釋，將不同稀釋度的血清分別加入血凝板內(nèi)，每孔20μl，再加 0.5% SRBC20μl，混勻，37℃孵育3h，觀察血凝程度，計(jì)算抗體積數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1膠艾顆粒劑對小鼠免疫器官指數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，試藥三個(gè)劑量組均可增加脾臟和胸腺指數(shù)，與正常對照組比較，高、中劑量組(P<0.01)和低劑量組 (P<0.05) 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，高劑量組作用優(yōu)于低劑量組 (P<0.05)。結(jié)果見表1。

表1 膠艾顆粒劑對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

注：與正常對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2膠艾顆粒劑對小鼠PMΦ吞噬功能的影響結(jié)果表明，試藥三個(gè)劑量組均能提高PMΦ吞噬百分率和吞噬指數(shù)。高、中劑量組與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，試藥低劑量組與正常對照組比較，也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。試藥高劑量組與低劑量組比較，雖有一定差異，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表2。

表2 膠艾顆粒劑對小鼠PMΦ吞噬功能的影響

注：與正常對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3膠艾顆粒劑對小鼠PFC的影響結(jié)果表明，試藥各組均能提高小鼠溶血值，增加PFC數(shù)，與正常對照組比較，高劑量組差異明顯(P<0.01)，中、低劑量組也有一定差異(P<0.05)。高劑量組與低劑量組比較，亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表3。

2.4膠艾顆粒劑對小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，試藥不同劑量均能提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，與正常對照組比較，試藥高劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；試藥中、低劑量組也有一定差異(P<0.05)。高劑量組與低劑量組比較也顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P<0.05)。結(jié)果見表3。

2.5膠艾顆粒劑對SRBC致敏小鼠抗體生成的影響結(jié)果顯示，試藥各劑量組均能增加實(shí)驗(yàn)動物抗體積數(shù)。但高劑量組的作用更明顯，與正常對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與低劑量組比較，亦顯示一定差異(P<0.05)。中、低劑量組與正常對照組比較，有一定的差異 (P<0.05)。結(jié)果見表3。

表3 膠艾顆粒劑對小鼠PFC和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

注：與正常對照組比較，*P<0.05,**P<0.01。

3 討 論

胸腺和脾臟為體內(nèi)主要的免疫器官。胸腺為初級淋巴器官，游走的造血干細(xì)胞進(jìn)入胸腺原基，在此分化增殖成T淋巴細(xì)胞，與細(xì)胞免疫有關(guān)。脾臟為次級淋巴細(xì)胞，免疫活性細(xì)胞移行于此，并在此處因受免疫過程中異體抗原刺激而進(jìn)一步增殖分化和成熟。脾臟中有T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，還有巨嗜細(xì)胞，與體液免疫、細(xì)胞免疫均有密切關(guān)系。一些免疫抑制劑能降低胸腺和脾臟質(zhì)量，同樣一些免疫增強(qiáng)劑能使胸腺和脾臟的質(zhì)量增加。我們的前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，膠艾顆粒劑能顯著升高血清HC50和血清K值，能增加Hb含量和RBC數(shù)量[2]。在本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)膠艾顆粒劑能夠顯著增加胸腺和脾臟的質(zhì)量，能使淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率升高，且與劑量呈正相關(guān)。

PMΦ在免疫應(yīng)答的各個(gè)環(huán)節(jié)中起著重要作用。方中阿膠、當(dāng)歸、白芍、地黃、艾葉都有免疫增強(qiáng)作用，能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫機(jī)制，起著扶正固本作用。結(jié)果顯示，膠艾顆粒劑可明顯升高PMΦ的吞噬百分率。這說明膠艾顆粒劑能增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。能使SRBC溶解，產(chǎn)生空斑，提高小鼠溶血值，增加PFC數(shù)。其作用強(qiáng)弱與劑量有關(guān)。

SRBC免疫小鼠后可使其淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗SRBC抗體。在給予膠艾顆粒劑治療后，各治療組能顯著增加小鼠抗體積數(shù)。

以上結(jié)果提示，膠艾顆粒劑具有調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力。這對于處在體質(zhì)虛弱、抗病能力低下的機(jī)體，在治療疾病的同時(shí)，膠艾顆粒劑可以起到扶正固本的作用。

[1]李祥華，張家均，杜亞明，等. 膠艾顆粒劑對虛寒失血?jiǎng)游锍鲅挠绊慬J]. 中藥藥理與臨床，2007：23 (3)：11-12.

[2]李祥華，張家均，許甲鳳，等. 膠艾顆粒劑對動物血虛和脾虛的影響[J]. 中藥藥理與臨床，2008：24(6)：7-8.

[3]李儀奎. 中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991：155.

[4]徐叔云，卞如濂，陳修. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 3版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1433-1456.

[5]陳奇. 中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社. 1993：747-749.

[編輯] 一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2010.03.002

R285.5

A

1673-1409(2010)03-R003-03