徐玲玲,湯 瀅,周春夢(mèng),肖 盈,張佩芬,許益鐫

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)生態(tài)研究室,廣州 510640)

桔小實(shí)蠅 Bactrocera dorsalis(Hendel)屬雙翅目 Diptera,實(shí)蠅科 Tephritidae,果實(shí)蠅屬 Bactrocera Macquart(崔俊霞等,2006),是一種重要的檢疫性害蟲(chóng)。該蟲(chóng)寄主范圍廣,可為害芒果、柑桔、番石榴等250多種植物(CABI and EPPO,1996)。在成蟲(chóng)產(chǎn)卵期,常將卵產(chǎn)在果皮下 1～8 mm處,多成塊狀排列,產(chǎn)卵孔針戳狀,在多數(shù)水果上,產(chǎn)卵孔肉眼不易觀察。

自中國(guó)加入 WTO以來(lái),國(guó)內(nèi)外貿(mào)易不斷加強(qiáng),境內(nèi)外農(nóng)產(chǎn)品的流通更為頻繁,桔小實(shí)蠅隨商品流通而傳播的風(fēng)險(xiǎn)加大(梁光紅等,2003)。而且,進(jìn)境旅客攜帶水果量小,批次多,隱蔽分散,難以控制,傳播桔小實(shí)蠅機(jī)率很高(詹開(kāi)瑞和趙士熙,2006)。目前,分子生物學(xué)手段已被用于桔小實(shí)蠅的快速鑒定(崔俊霞等,2006)。然而,桔小實(shí)蠅的檢疫很大程度上依賴(lài)于水果受害后所形成的表面特征,一些剛受害不久的果實(shí),由于其中桔小實(shí)蠅的卵尚未孵化或孵化不久未能在水果表面產(chǎn)生明顯的為害特征而使得在檢疫過(guò)程中容易被疏忽。另外,桔小實(shí)蠅的種群動(dòng)態(tài)調(diào)查主要采用性誘劑對(duì)雄成蟲(chóng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)其發(fā)生情況,但造成水果受害的卻是雌蟲(chóng),而對(duì)雌蟲(chóng)的監(jiān)測(cè)缺乏有效的方法。雌蟲(chóng)在水果表面留下的產(chǎn)卵孔可被利用以了解雌蟲(chóng)的發(fā)生情況,以此彌補(bǔ)性誘劑監(jiān)測(cè)的缺陷。桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔較小,直徑通常只有 0.2 mm(朱耀沂和葉萬(wàn)音,1987),多數(shù)水果表面的桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔難以肉眼辯認(rèn)。鑒于以上問(wèn)題,如果能借助染色劑對(duì)桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔進(jìn)行染色處理,使其清晰易見(jiàn),將具有重要有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

為此,本文以芒果、番石榴、夏橙為寄主水果,使用 6種染色劑對(duì)寄主水果上產(chǎn)卵孔進(jìn)行染色,測(cè)定相應(yīng)濃度和不同冷藏時(shí)間下的染色效果,以期為桔小實(shí)蠅的口岸檢疫和種群監(jiān)測(cè)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源

供試蟲(chóng)源采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)被桔小實(shí)蠅為害的蒲桃落果,帶回實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。挑取老熟幼蟲(chóng),置于細(xì)沙中化蛹,保持細(xì)沙一定濕度,用細(xì)紗網(wǎng)封口。8～10 d后,蛹羽化,將其置于 30 cm×30 cm×30 cm的木制籠子中,補(bǔ)充人工飼料(酵母粉：蔗糖 =1：3)和水分,保證桔小實(shí)蠅生長(zhǎng)發(fā)育所需光照,待 8～10 d后,挑取健康成蟲(chóng)進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 供試水果和染色劑

供試的 3種水果番石榴 Psidium guajava L.、芒果 Mangifera indica L.和夏橙 Citrus sinensis(L.)Osbeck均購(gòu)于市面;

甲基藍(lán)、龍膽紫、品紅、曙紅、藏紅和剛果紅等 6種染色劑由天津大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

1.3 不同染色劑對(duì)產(chǎn)卵孔的染色效果試驗(yàn)

取新鮮完好番石榴、芒果、夏橙各 6個(gè),分別置于 3個(gè)飼養(yǎng)有桔小實(shí)蠅的木制籠子中,桔小實(shí)蠅迅速布滿(mǎn)水果表皮,搜尋試探,并將針狀產(chǎn)卵器插入果皮下產(chǎn)卵。

經(jīng)產(chǎn)卵 1～2 h后,取出水果用 70%的酒精沖洗,待風(fēng)干后,分別放入濃度為 1%的甲基藍(lán)、龍膽紫、品紅、曙紅、藏紅、剛果紅等 6種染色劑中,染色3 min,取出用清水沖洗干凈。觀察并記錄水果表皮被染顏色、染色斑點(diǎn)大小、染色深淺等情況,挑取染色孔如發(fā)現(xiàn)有卵就確定為產(chǎn)卵孔,每 30個(gè)被染色的斑點(diǎn)為一個(gè)處理,每處理重復(fù) 5次。染色率的計(jì)算方法如下：

1.4 染色劑濃度對(duì)產(chǎn)卵孔染色效果的影響試驗(yàn)

根據(jù) 1.3試驗(yàn)結(jié)果篩選出 3種寄主水果最適染色劑,分別在濃度為 0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%和 3%的條件下進(jìn)行染色。試驗(yàn)中每 30個(gè)被染色斑點(diǎn)為一個(gè)處理,每處理重復(fù) 5次。

1.5 冷藏時(shí)間對(duì)產(chǎn)卵孔染色效果的影響試驗(yàn)

將水果分別置于 3個(gè)養(yǎng)蟲(chóng)箱中,產(chǎn)卵 1～2 h取出被產(chǎn)卵水果置于 5℃的冰箱中冷藏保存。冷藏保存期間,每天觀察果皮顏色、果皮皺縮及腐爛變化情況,并做好記錄。在在冷藏保存 0 d,1 d,2 d,3 d,4 d,5 d取出水果進(jìn)行染色,檢查產(chǎn)卵孔,計(jì)算染色率。試驗(yàn)中每 30個(gè)被染色斑點(diǎn)為一個(gè)處理,每處理重復(fù) 5次。

2 結(jié)果與分析

2.1 3種寄主水果產(chǎn)卵孔的染色效果

在室溫條件下,濃度為 1%的 6種染色劑分別對(duì)芒果、番石榴、夏橙 3種寄主水果染色結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明,不同染色劑對(duì)芒果上桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔的染色效果存在顯著差異(F=4.454,P=0.005)。甲基藍(lán)和藏紅對(duì)芒果產(chǎn)卵孔染色效果較好,染色率分別為 90.67%和 86.00%;而龍膽紫的染色效果最差,染色率僅為 60.67%。甲基藍(lán)將芒果產(chǎn)卵孔染成藍(lán)色斑點(diǎn),與芒果黃色果皮產(chǎn)生明顯對(duì)比,使得肉眼清晰易辨,而芒果健康果皮不被染上顏色,結(jié)合染色率和染色現(xiàn)象,可確定芒果最適染色劑為甲基藍(lán)。由表 1可知,不同染色劑對(duì)番石榴上桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔的染色效果存在差異(F=4.381,P=0.006)。藏紅對(duì)番石榴產(chǎn)卵孔的染色率最高,為 88.67%;藏紅將番石榴產(chǎn)卵孔染色后,產(chǎn)卵孔清晰可見(jiàn),呈紫紅色,明顯區(qū)別于番石榴青綠色果皮,結(jié)合染色率和染色現(xiàn)象,確定藏紅為番石榴最適染色劑。染色劑的種類(lèi)對(duì)夏橙上桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔的染色率卻無(wú)顯著影響(F=1.889,P=0.134),但剛果紅對(duì)夏橙產(chǎn)卵孔染色效果較好,染色率達(dá) 98.00%,高于甲基藍(lán)和曙紅的染色率;剛果紅將夏橙產(chǎn)卵孔染成深紅色,與夏橙深綠色果皮明顯不同,結(jié)合染色率和染色現(xiàn)象,確定剛果紅為夏橙的最適染色劑。

表 1 不同染色劑在 3種寄主水果上桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔的染色率Table 1 Dyeing rate of 3dye for oviposition apertures of B.dorsalis

2.2 不同濃度條件下染色劑對(duì)桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔的染色效果

根據(jù) 2.1的結(jié)果,分別選擇甲基藍(lán)、藏紅和剛果紅作為芒果、番石榴和夏橙的染色劑。結(jié)果表明,在供試的 6種濃度條件下各寄主水果上桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔染色率均存在差異(P＜0.05)。但在染色劑濃度為 0.5%時(shí)染色效果較佳,同時(shí)節(jié)約染色劑,故可選擇 0.5%的染色劑濃度(表 2)。

表 2 不同濃度條件下 3種寄主水果上桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔的染色率Table 2 Dyeing rate of different concentrations for oviposition apertures of B.dorsalis

2.3 不同冷藏時(shí)間條件下染色劑對(duì)桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔

寄主水果被桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵后,在 5℃條件下,冷藏保存 0～5 d,水果表皮仍完好,芒果、番石榴略顯皺縮,無(wú)腐爛現(xiàn)象,染色后,產(chǎn)卵孔清晰可見(jiàn),染色率大多在 90%以上。結(jié)果表明,被桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵后的芒果和番石榴經(jīng)過(guò)不同時(shí)間的冷藏產(chǎn)卵孔染色率無(wú)顯著差異(P＞0.05)。但夏橙在冷藏后,不同的冷藏時(shí)間產(chǎn)卵孔的染色率產(chǎn)生明顯差異(F=3.988,P=0.009),除了第 3天染色率為 76.83%,其余均大于 80%(表 3)。由此可見(jiàn),該方法亦適用于持續(xù)冷藏保存的水果產(chǎn)卵孔檢測(cè)。

表 3 不同冷藏時(shí)間條件下 3種寄主水果上桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵孔的染色率Table 3 Dyeing rate of dye for oviposition apertures of B.dorsalis on fresh fruit after cold conservation

3 結(jié)論與討論

桔小實(shí)蠅在新鮮水果上留下針戳狀的產(chǎn)卵孔,以肉眼很難找出其位置。但供試的 3種水果上的產(chǎn)卵孔經(jīng)過(guò)染色后,形成了直徑 0.2～0.5 mm的色斑,可容易被找出。不同的水果適用的染色劑種類(lèi)不同,如甲基藍(lán)對(duì)芒果上產(chǎn)卵孔的染色效果較好,而龍膽紫染色后顏色較淡而較易受干擾。番石榴上產(chǎn)卵孔經(jīng)藏紅染色后較易辨別,而剛果紅則更適合于夏橙。

桔小實(shí)蠅的為害程度調(diào)查一般以果實(shí)受害率為指標(biāo)。但鮮果上受害狀則因季節(jié)、受害果種類(lèi)不同而存在差異,通常自產(chǎn)卵 5～10 d后其中的幼蟲(chóng)至中齡或老齡才能顯示出表面的受害特征(朱耀沂和葉萬(wàn)音,1987)。然而此時(shí)的調(diào)查結(jié)果受到卵的孵化率和幼蟲(chóng)死亡率等因素的影響,未能準(zhǔn)確反映雌蟲(chóng)的產(chǎn)卵情況。而通過(guò)染色的試驗(yàn)?zāi)芊从辰坌?shí)蠅在田間的產(chǎn)卵動(dòng)態(tài),更適時(shí)和準(zhǔn)備掌握桔小實(shí)蠅對(duì)水果的為害情況。因此,在熟悉當(dāng)?shù)亟坌?shí)蠅發(fā)生情況的基礎(chǔ)上,雖然染色法可作為調(diào)查的手段。在進(jìn)出境截獲的水果上,由于實(shí)蠅種類(lèi)較多而且為害特征相近,在不清楚水果的來(lái)源情況下,雖然染色法不能直接用于判定是否遭受桔小實(shí)蠅為害,但是染色法可用于檢查是否存在實(shí)蠅類(lèi)害蟲(chóng)產(chǎn)卵孔,經(jīng)進(jìn)一步飼養(yǎng)觀察可判斷具體的實(shí)蠅種類(lèi)。

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