我國豬瘟的分子流行病學監(jiān)測及防控

王 琴

（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 北京 100081）

豬瘟又稱經(jīng)典豬瘟（Classical Swine Fever，CSF），是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起豬的高度致死性、接觸性傳染病，是嚴重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病，是世界糧農(nóng)組織和各國政府密切關注的主要傳染病之一，也是我國計劃要消滅的重大動物疫病之一。目前豬瘟遍布全世界，根據(jù)OIE 制定的《陸生動物衛(wèi)生法典》2007 年版，豬瘟被列為必須報告的動物疫病之一，在我國被列為“一類動物疫病”。歐美等發(fā)達國家通過疫苗免疫、撲殺等綜合防制技術(shù)措施已消滅了豬瘟。目前我國對豬瘟的控制采取的策略是強制免疫、撲殺及綜合防控措施。在綜合防控措施的實施中，加強飼養(yǎng)管理和生物安全措施，通過免疫、監(jiān)測和檢疫等措施來達到控制豬瘟的目的。因此，對我國豬瘟流行情況的掌握具有十分重要的意義，本文就近年豬瘟的流行情況及防控策略綜述如下：

1 我國近年豬瘟的分子流行病學監(jiān)測情況

豬瘟分子流行病學調(diào)查研究對闡明豬瘟病毒的遺傳變異特征和規(guī)律，掌握當前的流行現(xiàn)狀，溯源和追蹤每一起豬瘟發(fā)生的來源和去向，監(jiān)測現(xiàn)行使用的豬瘟疫苗的有效性，建立分子流行病學監(jiān)測系統(tǒng)，進而提出新的防制策略具有十分重要的科學意義。

國際上公認的可用于豬瘟分子流行病學研究的基因為豬瘟病毒基因組中最不穩(wěn)定的和主要產(chǎn)生中和抗體的E2 基因。國際學術(shù)界于2000 年將采用E2 基因序列分析將豬瘟病毒分為3 個基因群，10 個基因亞群。1997 年—2003 年在國家自然基金重大項目的支持下，由軍事獸醫(yī)研究所和中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所第一次開展了在全國范圍內(nèi)開展了大規(guī)模的豬瘟病毒病原生態(tài)學與分子流行病學研究。采用E2 基因主要區(qū)域分析了200 余株豬瘟病毒流行毒的基因序列，序列數(shù)據(jù)覆蓋全國所有31 個省、自治區(qū)和直轄市。通過與119 國外代表毒株基因序列所進行的多序列比較和系統(tǒng)發(fā)生分析，發(fā)現(xiàn)我國豬瘟病毒分為2 個基因群，4 個基因亞群，即基因2 群中的2.1、2.2、2.3 亞群和基因1 群中的1.1 亞群?；? 群與我國1945 年分離的石門強毒有很近的遺傳關系，在我國豬瘟流行中作用占次要地位?；? 群與歐洲流行的基因2 群病毒有較近遺傳關系，在我國豬瘟流行中占主導地位。說明我國豬瘟除自身傳播來源外可能還有國外的傳播來源。根據(jù)毒株的遺傳分型和來源繪制了我國第一張中國豬瘟病毒遺傳多樣性地理分布圖，從分布圖可以看出各基因群和亞群的分布無地理特點，與氣候和季節(jié)無關，但明顯地與養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展水平有關。

2004 年—2008 年，由中國動物衛(wèi)生與流行病學中心從浙江、福建、湖南、河南、黑龍江、遼寧、廣西、河北、湖北、山東等13 省區(qū)送檢病料中進行豬瘟病毒的分離和鑒定，均直接從病料中進行了E2 基因主要區(qū)域的RT-PCR 擴增和序列分析，獲得147 株豬瘟毒株E2 基因，序列分析表明我國主要流行的基因2 型中，仍然以基因2.1 亞型占主導地位，這是目前豬瘟的優(yōu)勢流行毒株，占總流行毒株的94%。豬瘟流行毒株與疫苗毒株的同源性為75.0%～87.9%；與石門經(jīng)典強毒株的同源性為75.4%～83.1%。

圖1 應用豬瘟單抗標記的熒光抗體對細胞的染色

1985 年—2009 年，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所通過野外檢測對遼寧、廣東、湖北、北京、河南、河北、浙江等21 個省區(qū)送檢病料進行豬瘟病毒的分離和鑒定，在對病料進行了E2 基因主要區(qū)域的RT-PCR 擴增和序列分析后獲得157 株豬瘟毒株E2 基因核酸序列。經(jīng)序列分析發(fā)現(xiàn)豬瘟流行毒株與疫苗毒株的同源性為77.3%～95.1%；與石門經(jīng)典強毒株的同源性為78.7%～99.5%。157 條序列中基因1 型占62.2%，均為1.1 亞型；基因2 群占38.7%，其中2.1 亞群占28.2%，2.2亞群占8.3%，2.3 亞型占1.3%。

通過這些年對我國部分地區(qū)的豬瘟分子流行病學分析表明，由于監(jiān)測的地區(qū)和豬場較為局限。因此，流行毒株在基因群中的分布也比較局限，2004 年—2008 年的13 個省豬瘟的流行94%為基因2.1 亞群，而1985 年—2009 年對21 個省監(jiān)測結(jié)果顯示豬瘟的流行62.2%為基因1.1 亞群。但是通過監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)我國的豬瘟流行在大部分地區(qū)依然是基因2.1 亞群和1.1 亞群，沒有發(fā)現(xiàn)基因3 群。因此，在我國，需要防控的豬瘟病毒基因型依然是2.1、2.2、2.3 和1.1 亞群。

我國豬瘟病毒的分子流行病學研究闡明了我國豬瘟病毒的遺傳變異及遺傳多樣性現(xiàn)狀，揭示了我國豬瘟較為復雜流行態(tài)勢，表明了豬群的隨意流動是傳播與擴散該病的重要原因。同時確立了分子流行病學研究在我國豬瘟流行病學調(diào)查中的重要地位。結(jié)果不僅對我國豬瘟防制具有重要的指導意義，而且填補了國際上豬瘟病毒分子流行病學研究缺乏中國數(shù)據(jù)這一空白，對建立該病毒的全球監(jiān)測體系具有深遠意義。

2 不同致病力和基因群流行株豬瘟病毒對疫苗的免疫保護性實驗研究

既然我國豬瘟流行毒株之間存在抗原差異，為了研究豬瘟兔化弱毒疫苗對不同野毒的免疫保護效果，分別采用臨床高致病力毒株HeN-5/98 株(2.2 基因亞群)、HeN10（96）(2.2基因亞群)、BJ3（96）（1.1 基因亞群）和BJ4（96）（1.1 基因亞群）；中等致病力毒株JL2（94）（2.2 基因亞群）、GX3（98）（2.2 基因亞群）、GD14（95）（1.1 基因亞群）和HeB2（95）（2.2基因亞群）和低致病力毒株FJ6（99）（2.2 基因亞群）進行了豬瘟兔化弱毒疫苗對它們免疫保護相關試驗。這些流行毒株與疫苗株之間的同源性最低為74%，疫苗免疫后不論是采取一株流行毒株的攻擊還是兩株流行毒株交叉攻擊，單個毒株攻擊還是高中低三個毒株混合攻擊。試驗結(jié)果均表明，我國現(xiàn)用的豬瘟兔化弱毒疫苗能完全能抵抗不同致病力流行毒株的單獨感染或多毒株的混合感染。12 年來，對我國豬瘟病毒流行毒株的分子流行病學研究表明，豬瘟病毒流行株與疫苗株的同源性沒有低于74%,表明流行株抗原性未發(fā)生變異，研究工作充分證明我國現(xiàn)用的豬瘟疫苗對目前的豬瘟流行株具有廣泛的免疫交叉保護性，疫苗仍然有效。

圖2 加強母豬豬瘟監(jiān)測

3 我國豬瘟綜合防控

通過對我國豬瘟病原特性、流行病學、分子流行病學、病毒持續(xù)感染機理和疫苗免疫學等方面進行了大量研究，查明并掌握了我國豬瘟長期持續(xù)存在的根源和多點散發(fā)流行惡性循環(huán)的規(guī)律和機理，也找到了消除豬瘟根源，凈化豬場、控制豬瘟的突破口。針對我國國情特點，建立了一整套在我國國情切實可行的消除根源、凈化豬場、控制豬瘟的綜合防治技術(shù)措施。具體措施如下：

3.1 加強豬的科學飼養(yǎng)管理，增強免疫應答能力

通過對我國豬瘟病毒流行株的致病性分析表明，豬瘟病毒流行株在臨床上表現(xiàn)的致病特征存在差異，經(jīng)研究認為，臨床上動物體內(nèi)不同抗體水平對病毒的特異性影響，年齡、營養(yǎng)狀況、飼養(yǎng)條件、持續(xù)感染、免疫耐受和環(huán)境因素等對病毒的非特異性干擾，是導致發(fā)病特點表現(xiàn)出輕重緩急、初次分離毒株表現(xiàn)不同致病力的原因。因此，加強科學飼養(yǎng)管理，保證圈舍溫度適宜，養(yǎng)殖密度合理，定期消毒，確保豬的體質(zhì)健康。各飼養(yǎng)場、屠宰廠（場）、動物防疫監(jiān)督檢查站等要建立嚴格的衛(wèi)生（消毒）管理制度；作好豬圈（舍）、加工廠、用具、車輛、糞便、道路和人員的定期消毒并定期對消毒效果進行監(jiān)測。作好養(yǎng)豬場（戶）、加工廠的衛(wèi)生、殺蟲、滅鼠工作，減少豬瘟病毒侵入的危險性。

3.2 科學免疫程序，實施強化免疫，正確使用零時免疫

任何豬場、任何時候，都不可能制訂一個通用的免疫程序。對豬瘟疫苗的免疫程序要根據(jù)當時當?shù)氐牧餍胁∈贰曫B(yǎng)管理和豬群的免疫抗體水平等因素綜合考慮。由于各豬場母豬群的免疫狀態(tài)不盡一致，仔豬母源抗體消長規(guī)律也不相同，為獲得較高的免疫保護率，各豬場應建立免疫監(jiān)測制度，了解母源抗體降低時間，選定首免日齡，從而制定個性化免疫程序，只有這樣才能最大限度地降低母源抗體對免疫注射的干擾。“零時免疫”方法在理論上是可行的，因多數(shù)母源抗體不能通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，初生仔豬體內(nèi)母源抗體極少，不足以干擾弱毒疫苗與免疫細胞的接觸?！傲銜r免疫”能使疫苗毒在體內(nèi)有足夠的增殖時間而不被血液中母源抗體中和，使仔豬盡早獲得主動免疫。但實際操作卻難以實施，如母豬分娩過程可能拖長或者母豬晚上產(chǎn)仔，仔豬出生后已吮吸了初乳，疫苗稀釋后保存時間過長等，都會導致免疫失敗。因此，如何采用“零時免疫”應把握好各個環(huán)節(jié)。

當有效免疫率達85%以上發(fā)生豬瘟機率較小。注射后抗體達不到保護水平的應及時補種，如補種后抗體水平仍上不去的豬仔很可能發(fā)生了先天感染或免疫耐受，要堅決淘汰，避免發(fā)生免疫失敗現(xiàn)象，杜絕傳染源。堅持定期對豬群抗體水平監(jiān)測，制定科學的免疫程序十分重要。

3.3 加強豬群抗體水平監(jiān)測

堅持定期對豬群抗體水平監(jiān)測，制定科學的免疫程序。對于仔豬，為了獲得確實的免疫效果，必須掌握恰當?shù)淖⒚鐣r機。如果注苗過早，新生仔豬從初乳中獲的母源抗體會仍很高，將會干擾機體免疫抗體的產(chǎn)生，同時注苗后還會中和母源抗體，使仔豬失去免疫能力而發(fā)病；用苗過晚，而仔豬體內(nèi)母源抗體逐漸耗竭，同時被動免疫又未能及時形成，在這段空隙中，強毒又可以攻破防御系統(tǒng)而引起發(fā)病。因此，對豬群豬瘟抗體水平監(jiān)測至關重要，通過監(jiān)測結(jié)果，確定最佳免疫時間。根據(jù)農(nóng)業(yè)部《2009 年高致病性禽流感和口蹄疫等主要動物疫病免疫方案》并結(jié)合抗體水平的監(jiān)測結(jié)果來確定最佳免疫時間，才能對豬瘟的預防才能取得良好的免疫效果。尤其是對種豬及后備種豬的抗體水平顯得更為重要。

3.4 強化豬瘟病毒的分子流行病學監(jiān)測制度

分子流行病學分析充分說明我國豬瘟流行態(tài)勢十分復雜，每一個行政地區(qū)豬瘟流行有多個傳播來源?；? 群病毒代表1 個分支,與我國1945 年最早分離的石門強毒株有很近的遺傳關系，該分支引發(fā)的豬瘟流行一直在我國延續(xù)，顯示我國豬瘟傳播的自身來源，但其流行規(guī)模較小。然而起主導流行的2 群病毒與歐洲流行的2 群病毒在遺傳上有親緣關系。由于我國長期從歐盟國家引進豬種，而我國從未向歐盟出口活豬及豬肉制品，暗示歐洲發(fā)生的豬瘟在我國豬瘟流行中可能具有流行病學意義。通過監(jiān)測，目前我國依然沒有發(fā)現(xiàn)基因3 群的豬瘟流行毒株。因此，在我國加強不間斷的豬瘟病毒分子流行病學監(jiān)測，對于防堵在我國周邊國家如日本、韓國、中國臺灣等地流行的基因3 群的侵入具有十分重要的意義。豬瘟分子流行病學的監(jiān)測不僅對追蹤流行毒株的來源與去向，而且也為今后隨時發(fā)現(xiàn)和監(jiān)測新的變異株提供了科學的依據(jù)。這一手段對我國豬瘟的防控具有重要的指導意義。

3.5 加強病原監(jiān)測，淘汰病原陽性豬，凈化豬群

綜合防治的關鍵技術(shù)是凈化措施，采取以狠抓種豬群凈化，培育健康種群為主的綜合防控措施。堅持定期對豬群進行病原檢測，篩選陽性豬，堅決淘汰陽性豬，尤其是陽性種豬，避免產(chǎn)出帶毒仔豬，徹底消滅傳染源。監(jiān)測方法可首先采用豬瘟免疫熒光技術(shù)或抗原ELISA 方法進行初步篩查，淘汰陽性豬后，再采用分子診斷技術(shù)(如熒光定量RT-PCR 或其他方法)進行再次篩查，最后徹底淘汰陽性及可疑的帶毒豬，達到基本徹底清除病原的目的。建立新的無帶毒健康種豬群，繁衍健康后代。病死豬、死胎、胎衣等，應深埋作無害化處理。糞尿等要及時清除并經(jīng)發(fā)酵處理，殺滅蚊蠅，定期滅鼠，減少豬瘟從疫源地造成的嚴重傳播。

3.6 傳播途徑的嚴格控制

遺傳分型還表明，運輸和貿(mào)易帶來的豬群流動是傳播與擴散豬瘟的重要途徑。如廣東省毗連香港，連接內(nèi)地，是我國生豬及豬肉制品運輸與交易最繁忙的地區(qū)，同時也是內(nèi)地生豬出口海外的主要集散地。遺傳分型表明該省有所有4 個亞型毒株流行。其他一些省份也有類似特征，提示我國生豬的無序流通已導致不同基因型病毒同時在同一地區(qū)甚至可能在同一群體中流行。這不僅嚴重危害著我國的養(yǎng)豬業(yè)和養(yǎng)豬產(chǎn)品的內(nèi)外貿(mào)易，而且警示我們，我國豬群中隨時存在著由于不同基因型病毒重組產(chǎn)生新變異株的潛在危險。因此，認真貫徹疫情報告制度和流行病學調(diào)查的制度化，追蹤每一起豬瘟發(fā)生的來源及去向，對豬瘟防治具有十分重要的意義。

3.7 自繁自養(yǎng)，全進全出

盡管臨床上存在著不同致病特性的流行株，但通過本動物不斷傳代均可使致病力回復或復壯，甚至超過經(jīng)典石門株致病力，并都穩(wěn)定在較強程度，這種現(xiàn)象提示某些豬瘟病毒毒株在豬群中持續(xù)存在時如果經(jīng)連續(xù)傳代，致病力會慢慢增強。因而，養(yǎng)豬場嚴格執(zhí)行“全進全出”制的飼養(yǎng)模式是相當重要的。同時，為避免由于引種不當造成的外來豬瘟病毒感染，應盡量做到自繁自養(yǎng)，并對不同飼養(yǎng)階段的豬要全進全出，至少要做到產(chǎn)房和保育舍全進全出。如必需引種，要慎重選擇，對引入的種豬進行定期監(jiān)測，待檢測確無豬瘟病毒感染方可與其他豬混養(yǎng)。

3.8 綜合防制，依法免疫

對我國進行豬瘟分子流行病學分析充分說明我國許多地方豬瘟流行有不同的傳染源，或者說多種傳染源引發(fā)了多起豬瘟在同一地方流行。所以我國豬瘟流行態(tài)勢十分復雜，加上沒有認真貫徹疫情報告制度，很難追蹤某起豬瘟發(fā)生的來源及去向，為防制工作帶來困難。我國建立了一系列控制豬瘟的綜合防治方案，制定了國家標準《豬瘟檢疫技術(shù)規(guī)范》，發(fā)布了《動物防疫法》和《豬瘟防治技術(shù)規(guī)范》和重大動物疫病的免疫監(jiān)測方案。認真貫徹相關技術(shù)規(guī)范，提高防疫人員素質(zhì)，進一步普及豬瘟防疫知識，使獸醫(yī)防疫、檢疫等防制豬瘟工作走向法制管理的軌道。對基層防疫人員要定期或不定期組織技術(shù)培訓，促進知識更新，提高業(yè)務素質(zhì)，同時可利用廣播、報刊、電視等宣傳工具，廣泛宣傳豬瘟防疫知識和重要性，使群眾受到科普教育。從大局出發(fā)，遵守和執(zhí)行國家有關動物防疫、檢疫等各方面的法律和規(guī)定，要逐步實現(xiàn)依法防疫。