子宮頸腺癌中ILK與E-Cadherin蛋白表達(dá)的關(guān)系

葛風(fēng)芹 江澤 劉春在 李勝水 許華 翟瓊莉 劉海霞 高秀敏

(1.河北省滄州市傳染病醫(yī)院 河北 滄州 061001; 2.河北省滄州市中心醫(yī)院 河北 滄州 061001; 3.河北省南大港醫(yī)院 河北滄州 061103; 4.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 河北 滄州 061001; 5.天津市腫瘤醫(yī)院 天津 300060; 6.河北省滄州市婦幼醫(yī)院 河北 滄州 061001)

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一,在發(fā)展中國(guó)家婦女中其發(fā)病率居第一位。有資料顯示,年輕婦女的宮頸腺癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì),其比例已占宮頸癌病例總數(shù)的19.4%[1]。但由于病理特點(diǎn)和生物學(xué)行為不同于宮頸鱗癌,致使其5年和10年生存率低于鱗癌,這主要是與其侵襲性強(qiáng)和易發(fā)生轉(zhuǎn)移有關(guān)。因此,尋找敏感而特異的腫瘤標(biāo)志物對(duì)宮頸腺癌的早期診斷、治療方法的合理選擇和患者的遠(yuǎn)期生存率的提高至關(guān)重要。作者采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)了宮頸腺癌、和正常宮頸腺上皮中ILK與E-Cadherin的表達(dá)情況,以幫助揭示宮頸腺癌的發(fā)病機(jī)制,并探討其與宮頸腺癌的組織學(xué)分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

表1 ILK與E-Cadherin在子宮頸腺癌不同病理分級(jí)和組織學(xué)類型中的表達(dá)

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取5家醫(yī)院病理科1999～2009年保存的子宮頸腺癌石蠟標(biāo)本106例,患者年齡27～77歲,平均51.6歲,全部病例均經(jīng)病理專家復(fù)診證實(shí)。組織學(xué)類型:子宮頸內(nèi)膜腺癌65例,子宮內(nèi)膜樣腺癌16例,透明細(xì)胞腺癌19例,腸型腺癌6例。病理分級(jí):1級(jí)34例,2級(jí)41例,3級(jí)31例。另取22例慢性子宮頸炎組織作為正常對(duì)照。所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定,石蠟包埋,4μm厚切片。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

SP法抗ILK單克隆抗體(美國(guó)Upstate Biotechnology Lake Placid NY公司)、抗E-Cadherin單克隆抗體(Santa Cruze)和SP免疫組化試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。染色步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行?？笽LK(1:100)和E-Cadherin(1:50)經(jīng)高壓修復(fù)預(yù)處理,抗原修復(fù)液為PH6.0檸檬酸緩沖液。經(jīng)DAB染色后,蘇木素對(duì)比染色,中性樹膠封片。以已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照,以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

ILK蛋白陽(yáng)性染色位于細(xì)胞質(zhì),偶見于細(xì)胞核,以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性信號(hào)。E-Cadherin以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有棕色顆粒為陽(yáng)性;每例均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(x400),用半定量積分法判斷結(jié)果,陽(yáng)性細(xì)胞率5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,>75%為4分;陽(yáng)性強(qiáng)度黃色為1分,棕黃為2分,棕褐色為3分。兩者積分相乘,0分為陰性(-),1～4分為弱陽(yáng)性(+),5～8分為中度陽(yáng)性(++),9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。以中度陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性為過表達(dá)(++～+++)。(+～+++)均為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,用χ2檢驗(yàn)或四格表確切概率檢驗(yàn),兩者相關(guān)性用非參數(shù)Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 不同子宮頸組織中ILK與E-Cadherin的表達(dá)

106例子宮頸腺癌組織,ILK陽(yáng)性表達(dá)率為86.8%(92/106),高于慢性子宮頸炎組織31.8%(7/22),2者比較差異有顯著性(P<0.01);106例子宮頸腺癌組織,E-Cadherin陽(yáng)性表達(dá)率為58.5%(62/106),低于慢性子宮頸炎組織81.8%(18/22),2者比較差異有顯著性(P<0.05)。ILK、E-Cadherin陽(yáng)性顆粒均呈棕黃色,主要位于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)或細(xì)胞膜,陽(yáng)性表達(dá)呈彌漫或灶性分布。

2.2 子宮頸腺癌不同病理分級(jí)和組織學(xué)類型中ILK與E-Cadherin的表達(dá)(表1)ILK在子宮頸腺癌中的表達(dá)隨腫瘤惡性程度的增加而增強(qiáng),在G3組陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于G1組(P<0.05)。E-Cadherin在子宮頸腺癌中的表達(dá)隨腫瘤惡性程度的增加而不斷減弱,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ILK在不同子宮頸腺癌組織中的表達(dá)有差異,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 子宮頸腺癌中ILK與E-Cadherin表達(dá)關(guān)系

2.3 子宮頸腺癌組織中ILK與E-Cadherin表達(dá)的關(guān)系(表2)

經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析示隨著ILK的陽(yáng)性表達(dá)的增強(qiáng),ECadherin的陽(yáng)性表達(dá)逐漸減弱,二者在子宮頸腺癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)

3 討論

ILK是一種59kUr的包含錨蛋白重復(fù)序列的絲/蘇氨酸蛋白激酶,ILK一方面作為分子支架與多種蛋白結(jié)合,構(gòu)成粘著斑的主要成分,為諸如整合素一類的跨膜受體與肌動(dòng)蛋白絲之間提供關(guān)鍵的物理連接,調(diào)節(jié)細(xì)胞的粘連、播散、遷移和運(yùn)動(dòng);另一方面它還作為絲/蘇氨酸蛋白激酶調(diào)節(jié)整合素、Wnt等多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑[2]。目前已有的關(guān)于ILK在多種惡性腫瘤中的研究均認(rèn)為ILK具備癌基因的性質(zhì)[3～6]。

E-cadherin基因定位于16q22.1,E-cadherin是一種介導(dǎo)同型細(xì)胞連接的鈣依賴性的跨膜糖蛋白,是上皮細(xì)胞間粘合及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能單元的重要組成分子[7～8]。腫瘤惡性程度越高,細(xì)胞分化越差,E-cadherin表達(dá)下降或缺失的比率越高,其基理可能由于E-cadherin表達(dá)下降使其不能與胞質(zhì)內(nèi)的catenin形成Cad-catenin復(fù)合物,從而不能與細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白絲相連,使腫瘤細(xì)胞喪失接觸抑制,導(dǎo)致細(xì)胞無限制增殖,失去分化,細(xì)胞間連接松散,易于局部脫落,發(fā)生局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[9～12]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),106例子宮頸腺癌組織,ILK陽(yáng)性表達(dá)率為86.8%(92/106),高于慢性子宮頸炎組織31.8%(7/22),2者比較差異有顯著性(P<0.01);E-Cadherin陽(yáng)性表達(dá)率為58.5%(62/106),低于慢性子宮頸炎組織81.8%(18/22)。ILK在子宮頸腺癌中的表達(dá)隨腫瘤惡性程度的增加而增強(qiáng),在G3組陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于G1組(P<0.05);ECadherin在子宮頸腺癌中的表達(dá)隨腫瘤惡性程度的增加而不斷減弱。筆者發(fā)現(xiàn)在宮頸腺癌組織中隨著ILK表達(dá)水平的上調(diào),E-cadherin水平反而下降,兩者在子宮頸腺癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

有學(xué)者在結(jié)腸癌細(xì)胞系的研究中也指出,ILK能激活E cadherin的抑制物S-nail,使E-cadherin下調(diào),結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞間粘連丟失、錨基不依賴性生長(zhǎng)、促進(jìn)腫瘤形成、侵襲和轉(zhuǎn)移,阻斷ILK表達(dá)則Snail水平下調(diào),E-cadherin表達(dá)回升,腫瘤細(xì)胞的惡性表型發(fā)生逆轉(zhuǎn)[10]。

總之,腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移是多種相關(guān)因子和信號(hào)通路共同作用的結(jié)果,而ILK和E-cadherin兩者在蛋白轉(zhuǎn)錄及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之間以及在宮頸腺癌進(jìn)展過程中的機(jī)制,尚有待進(jìn)一步研究。

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