母犬發(fā)情和適時(shí)配種鑒定技術(shù)研究現(xiàn)狀

潘壽文 方建強(qiáng)

母犬發(fā)情和適時(shí)配種鑒定技術(shù)研究現(xiàn)狀

潘壽文 方建強(qiáng)

研究現(xiàn)狀

母犬發(fā)情周期平均為6個(gè)月，發(fā)情周期的特點(diǎn)與其它家畜有較大區(qū)別。尤其是排卵時(shí)間在發(fā)情期間的變化范圍較大，因而確定其準(zhǔn)確的配種時(shí)間比較困難。對(duì)此國(guó)內(nèi)外曾有大量研究，Evans等（1933）認(rèn)為，陰道上皮細(xì)胞角質(zhì)化的變化程度不能說(shuō)明母犬的排卵時(shí)間。Bouchard等 (1991)在正常母犬發(fā)情周期中，在檢測(cè)陰道上皮細(xì)胞角化動(dòng)態(tài)的同時(shí)連續(xù)進(jìn)行了血漿孕酮、LH的RIA和ELISA法測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩者的變化是一致的，接受交配前4 天，角化上皮細(xì)胞比例達(dá)到80%，LH達(dá)到峰值，陰道上皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化與母犬發(fā)情周期中激素內(nèi)分泌變化呈線性關(guān)系。依據(jù)這種相關(guān)關(guān)系進(jìn)行適時(shí)交配，取得了滿意的結(jié)果。

Newberry（1952）研究結(jié)果得知，當(dāng)角質(zhì)上皮細(xì)胞達(dá)到高峰，缺乏嗜中性白細(xì)胞，有核上皮細(xì)胞難以看到，紅細(xì)胞也很少時(shí)，母犬進(jìn)入發(fā)情期，開(kāi)始排卵。此階段母犬的外部行為表現(xiàn)為接受公犬爬跨或配種，表明已真正進(jìn)入發(fā)情旺期，此時(shí)配種受胎率就高。公安部南京警犬研究所董君艷等人2004年研究指出，犬的排卵發(fā)生于發(fā)情期初期，排卵后發(fā)情還持續(xù)很長(zhǎng)一段時(shí)間，這是犬不同于其他家畜的特征。每次排卵數(shù)可根據(jù)產(chǎn)仔數(shù)來(lái)推測(cè)，排出的卵約89%可受精妊娠，犬的排卵是從允許交配第48小時(shí)開(kāi)始，最遲于第72小時(shí)全部結(jié)束（12小時(shí)之內(nèi)）。石河子警犬研究所的試驗(yàn)結(jié)果表明，自然發(fā)情母犬的陰道上皮細(xì)胞角質(zhì)化變化與Bouchard的報(bào)道相似，根據(jù)他的試驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為，母犬發(fā)情出血時(shí)間和“立定反射”以及陰道涂片相結(jié)合的發(fā)情鑒定，可以用于預(yù)測(cè)和確定母犬最適交配時(shí)間。通過(guò)對(duì)10頭母犬的陰道細(xì)胞檢查發(fā)現(xiàn)，在發(fā)情前期向發(fā)情期過(guò)渡時(shí)，淺層細(xì)胞增多，且逐漸角質(zhì)化。在接近排卵時(shí)，看到的幾乎都是角質(zhì)化的表皮細(xì)胞（80%～90%）。最大角質(zhì)化程度持續(xù)1天～6 天，平均為2.6天，這期間陰道粘膜為白色、干燥、浮冰樣堆積非常明顯，陰道分泌物非常少，主動(dòng)接近公犬，接受交配。自然發(fā)情的中型母犬在發(fā)情出血后的第11天～13天角化上皮細(xì)胞比例均超過(guò)80%，可依據(jù)陰道涂片法輔助確定母犬發(fā)情的適配時(shí)間。Grunnert（1995）還研究指出，陰道上皮的組織學(xué)結(jié)構(gòu)受雌激素的影響很大。在間情期，陰道粘膜由2層～3層非角質(zhì)化的扁平細(xì)胞覆蓋。進(jìn)入發(fā)情前期，在雌激素的影響下，細(xì)胞層開(kāi)始增生，且表層細(xì)胞逐漸角質(zhì)化，最大程度的細(xì)胞增生可以達(dá)到20層。角質(zhì)化的過(guò)程主要發(fā)生在發(fā)情期。從發(fā)情后期開(kāi)始，陰道上皮逐漸退化。陰道細(xì)胞學(xué)檢查的目的，即在此基礎(chǔ)上達(dá)到認(rèn)識(shí)發(fā)情周期的時(shí)間、輔助鑒定排卵時(shí)間及卵巢病變等 。

目前，國(guó)內(nèi)外常用的確定母犬配種時(shí)間的方法主要有以下幾種：根據(jù)母犬陰道出血時(shí)間、接受交配情況、陰道檢查、陰道細(xì)胞學(xué)檢查、陰唇的腫脹程度、血液的孕酮測(cè)定、通過(guò)B超對(duì)卵泡發(fā)育情況的檢查等。以上方法均很難把握母犬的準(zhǔn)確排卵時(shí)間，我們通常根據(jù)母犬陰道出血的時(shí)間，并在發(fā)情期增加配種次數(shù)的方法解決犬的繁殖問(wèn)題。國(guó)外確定母犬的排卵時(shí)間更多的是把陰道細(xì)胞學(xué)檢查、B超檢查和孕酮檢測(cè)方法結(jié)合起來(lái)，以便較準(zhǔn)確地確定母犬的排卵時(shí)間。但后兩種方法所需儀器設(shè)備值較高，一般的單位部門(mén)目前還很難滿足。

研究與展望

一、陰道細(xì)胞學(xué)變化規(guī)律的運(yùn)用及其意義

綜合國(guó)內(nèi)外研究表明，在母犬繁殖生理正常的情況下，陰道垢物細(xì)胞種類及比率，隨不同生理階段而呈明顯的規(guī)律性變化，是一個(gè)重要的生理指標(biāo)?？梢宰鳛殍b定發(fā)情旺期和確定配種適期的重要參考依據(jù)。

同時(shí)，根據(jù)陰道細(xì)胞學(xué)的變化，還可以診斷母犬發(fā)情是否正常。按細(xì)胞學(xué)的變化規(guī)律，可以減少只憑外陰部變化決定輸精的誤差。

當(dāng)母犬陰道或子宮發(fā)生炎癥時(shí)，陰道垢物涂片則出現(xiàn)有大量的嗜中性白細(xì)胞，當(dāng)非角質(zhì)化的上皮細(xì)胞有結(jié)成團(tuán)塊時(shí)，區(qū)別炎癥和發(fā)情前期或發(fā)情后期是困難的。但是，若嗜中性白細(xì)胞和角質(zhì)化上皮細(xì)胞同時(shí)出現(xiàn)，則表明有炎癥。因?yàn)樵谡Ｇ闆r下，這兩種細(xì)胞類型不會(huì)一起出現(xiàn)。國(guó)內(nèi)外陰道垢物涂片研究結(jié)果比較見(jiàn)下表。

表 國(guó)內(nèi)外陰道垢物涂片研究結(jié)果比較

二、陰道垢物的采樣及制片應(yīng)當(dāng)注意的幾個(gè)問(wèn)題

（一）陰道垢物采樣前，應(yīng)對(duì)母犬外陰部及其采樣器具進(jìn)行消毒，以防將塵埃和致病菌帶入母犬陰道內(nèi)。

（二）采樣時(shí)，應(yīng)盡量減少刺激量，器具輕進(jìn)、輕出，不損傷外陰及陰道壁。

（三）采樣器具插入陰道內(nèi)10厘米左右處，不得或深或淺，以免引起垢物性狀和細(xì)胞成分的改變，影響分析結(jié)果；制片應(yīng)均勻一致，減少細(xì)胞堆集，以免影響對(duì)細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)。

三、適時(shí)配種鑒定技術(shù)方法比較

外陰檢查方法簡(jiǎn)單易行，操作方便，幾乎不需要投入儀器設(shè)備，實(shí)踐中多用此法，但對(duì)操作人員的經(jīng)驗(yàn)水平要求較高，一般需要有多年的繁育工作經(jīng)驗(yàn)才能較準(zhǔn)確把握，但即使如此，因犬的個(gè)體差異性和生理機(jī)能的不同，該方法的準(zhǔn)確性、科學(xué)性有待進(jìn)一步提高。陰道檢查法是在專用光源的幫助下，觀察陰道黏膜顏色及分泌物等。判定母犬發(fā)情期的不同時(shí)期主要根據(jù)陰道黏膜的顏色變化、黏膜的腫脹情況及分泌物的多少。發(fā)情期：陰道粘膜顏色趨白色，陰道粘膜腫脹皺褶增生，分泌物少、呈肉水樣，對(duì)于確定母犬的發(fā)情具有一定的說(shuō)服力，而且不需投入更多的儀器設(shè)備。但此鑒定方法，多憑經(jīng)驗(yàn)積累，少量化、主觀性強(qiáng)。陰道細(xì)胞學(xué)檢查借助普通顯微鏡，觀察陰道分泌物的細(xì)胞構(gòu)成比率。在母犬發(fā)情期的前期，有核上皮細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞幾乎完全消失，紅細(xì)胞約有30%左右；大量的主要是角質(zhì)化細(xì)胞，約有80%左右；母犬發(fā)情期的后期，大量的仍然是角質(zhì)化細(xì)胞。與前期比較略許見(jiàn)少，紅細(xì)胞減少大半，有核上皮細(xì)胞逐漸增多，亦見(jiàn)有少量的嗜中性白細(xì)胞。其結(jié)果具有快速簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確易行等特點(diǎn)，國(guó)內(nèi)目前也多有運(yùn)用，應(yīng)該注意，陰道細(xì)胞學(xué)檢查并不能判定出現(xiàn)促黃體素峰和排卵時(shí)間，但據(jù)此可推斷周期階段。通過(guò)實(shí)踐，腹腔鏡檢查法很難實(shí)現(xiàn)，因?yàn)槿穆殉膊煌谄渌倚竽芸匆?jiàn)，多數(shù)母犬的卵巢被厚厚的脂肪所包圍，很難看到卵泡的發(fā)育情況。在實(shí)踐中，此方法是否可行，還有待于在以后的工作中作進(jìn)一步研究論證。孕酮測(cè)定是到目前為止確定母犬排卵時(shí)間的范圍最可靠的方法，可以比較準(zhǔn)確地確定排卵時(shí)間，從而提高配種受胎率。但孕酮測(cè)定工作量大、成本較高，多運(yùn)用于個(gè)體研究，實(shí)際工作中的運(yùn)用相對(duì)較少。通過(guò)口腔液鏡檢來(lái)鑒定母犬最佳配種時(shí)間的方法，可以在一定程度上提高母犬的受孕率和產(chǎn)仔數(shù)，是目前在母犬發(fā)情配種鑒定上的一種較為簡(jiǎn)便實(shí)用易掌握的方法，與平時(shí)的經(jīng)驗(yàn)判斷基本是相吻合的，可以作為經(jīng)驗(yàn)判斷法的補(bǔ)充和確定。B超檢查方法能夠較為準(zhǔn)確的確定母犬的發(fā)情排卵，但因?qū)超儀器的質(zhì)量要求及操作人員的技術(shù)要求均很高，因而也較多的運(yùn)用于個(gè)體研究，實(shí)際工作中很難普及運(yùn)用。

（作者單位：公安部南京警犬研究所，210012）

（編輯：李 冰）