蒽酮-硫酸法測定參芪注射液中糖含量△

孫博航，張偉，龍志敏，李楠，吳立軍，高慧媛*

(1.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016；2.中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，遼寧 沈陽 110001)

遼寧省教育廳科學(xué)研究項目(20060879)

*高慧媛，E-mail：gaohuiyuan1997@yahoo.com.cn

蒽酮-硫酸法測定參芪注射液中糖含量△

孫博航1，張偉2，龍志敏1，李楠1，吳立軍1，高慧媛1*

(1.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽110016；2.中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，遼寧 沈陽110001)

目的對參芪注射液中糖含量進行測定，提供可行的糖檢測方法。方法采用蒽酮-硫酸法,以葡萄糖為對照品，測定總糖的含量。結(jié)果葡萄糖的濃度0.02～0.2mg·mL-1(r=0.9996)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為93.1%(RSD=1.4%)(n=6)。5批供試品測定，折合原藥材總糖平均含量參芪為0.45g·g-1，黃芪為0.19g·g-1，黨參為0.69g·g-1，參芪注射液為22.5mg·mL-1。結(jié)論本研究建立的方法可用于參芪注射液糖含量的測定，并為質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

參芪注射液；蒽酮-硫酸法；糖含量

參芪注射液采用我國傳統(tǒng)的補氣藥物黨參、黃芪為主要原料,經(jīng)高新技術(shù)提取有效成分,精制而成的純中藥大輸液,具有益氣扶正的功效,與化療藥物合用有助于提高療效,保護血象，可以改善患者免疫功能、氣虛癥狀及生存質(zhì)量,對抗癌藥物有顯著的增效減毒作用。本文采用蒽酮-濃硫酸法[1]對參芪注射液中總糖含量進行測定，為其質(zhì)量控制研究提供一定參考。

1 儀器與試藥

UV-1700紫外分光光度計(日本島津公司)，離心機(北京醫(yī)用離心機廠)。D-無水葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110833-200302，供含量測定用)，硫酸，蒽酮，重蒸水，其他試劑均為分析純。黃芪、黨參樣品分別購于同仁堂藥店，經(jīng)沈陽藥科大學(xué)孫啟時教授鑒定為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1對照品母液及對照品溶液的制備

精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品0.025 0g，置25mL量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得對照品母液(1.0mg·mL-1)。

精密量取對照品母液1mL，定溶至10mL容量瓶中，即得對照品溶液(0.1mg·mL-1)。

2.2供試品溶液的制備

按參芪注射液制備方法[2]，取黃芪、黨參粉末各約2.5g，以及參芪5g(黃芪、黨參粉末各約2.5g)精密稱定，置煎煮器中，加水適量，煎煮2次，第1次為2h，第2次為1.5h，合并煎煮液，過濾，濾液濃縮至約1mL，然后加入乙醇至含醇量為60%，靜置24h，過濾，回收乙醇后，再加乙醇至含醇量為70%，靜置24h，過濾，回收乙醇，又加入乙醇至含醇量為80%，靜置24h，過濾，回收乙醇至無醇味，加蒸餾水至8mL，加入0.1g活性碳，100℃加熱30min，過濾，濾液中加入1%濾紙漿。冷存12h，過濾，用NaOH溶液調(diào)pH至7，將溶液轉(zhuǎn)移至250mL量瓶中，加水稀釋至刻度，從中吸取1mL定容至100mL，即得。

2.3蒽酮-硫酸溶液的配制

稱取蒽酮50mg，置于錐形瓶中，加蒸餾水25mL溶解，然后加入硫酸75mL，即得。臨用新配。

2.4檢測波長的確定

對照品與供試品的蒽酮-硫酸溶液均在624nm處出現(xiàn)最大吸收，因此選擇該波長作為含量測定的檢測波長。

2.5測定法

取無水葡萄糖對照品約0.025g、黃芪、黨參粉末各約2.5g，以及參芪5g(黃芪、黨參粉末各約2.5g)，精密稱定，并按照2.1和2.2項下制備對照品和供試品溶液。分別精密吸取對照品、供試品溶液1mL置于10mL具塞試管中，加入4mL蒽酮-硫酸溶液，搖勻，用蒸餾水定容至10mL。置沸水浴中加熱15min，取出，放入冰浴中冷卻15min，以相應(yīng)的試劑為空白，在624nm處測定吸光度。并使用外標(biāo)一點法計算含量。

2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密量取對照品母液(1.0mg·mL-1)1，3，5，8，10mL，分別置于50mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，配置成0.02，0.06，0.1，0.16，0.2mg·mL-1的葡萄糖對照品溶液。按照2.5項下,自“置10mL具塞試管中”起，依法測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吸光度Y與質(zhì)量濃度X(mg·mL-1)的回歸方程為：Y=6.182 5X+0.002 7,r=0.999 6。葡萄糖對照品溶液濃度在0.02～0.2mg·mL-1線性關(guān)系良好。

2.7精密度試驗

精密量取對照品溶液，照2.5項下，自“置10mL具塞試管中”起，依法測定吸光度。重復(fù)測定5次，記錄吸光度值，計算儀器精密度RSD=0.3%。

2.8重復(fù)性試驗

取黃芪、黨參粉末各約2.5g，以及參芪5g(黃芪、黨參粉末各約2.5g),平行稱取5份，精密稱定，照2.2項下方法制備供試品溶液，照2.5項下進行顯色和測定，記錄吸光度值。經(jīng)計算，折合原藥材，黃芪平均糖含量為0.19g·g-1，RSD=2.0%。黨參平均糖含量為0.69g·g-1，RSD=1.8%，參芪平均糖含量為0.45g·g-1(參芪注射液22.5mg·mL-1)，RSD=2.3%。表明該法重復(fù)性良好。

2.9穩(wěn)定性試驗

精密量取黃芪、黨參和參芪供試品溶液，在0，10，15，20，25，30min內(nèi)進行測定，照2.5項下進行顯色和測定，記錄吸光度值并計算含量，其RSD分別為2.1%，1.9%，1.8%，表明供試品溶液在30min內(nèi)穩(wěn)定。

2.10回收率試驗

稱取已知含量(0.45g·g-1)的參芪粉末約2.5g，共6份，精密稱定，加入葡萄糖對照品適量，照2.2項下方法制備供試品溶液，照2.5項下進行顯色和測定，記錄吸光度值，計算回收率，結(jié)果見表1。

2.11樣品測定

取黃芪、黨參粉末各約2.5g，以及參芪5g(黃芪、黨參粉末各約2.5g)精密稱定，照2.2項下方法制備樣品溶液，精密量取對照品溶液,照2.5項下進行顯色和測定，顯色后測定吸光度值，計算含量，結(jié)果見表2。

表1 參芪粉中糖加樣回收率試驗

表2 參芪注射液中糖含量測定 /g·g-1

注：(1)n=5；(2)*折合參芪注射液中總糖含量為22.5mg·mL-1

3 結(jié)論與討論

蒽酮-硫酸溶液的顯色原理是多糖在濃硫酸的作用下，水解成單糖分子，并迅速脫水生成糖醛，然后糖醛與蒽酮縮合成糖醛衍生物，呈藍綠色。另外，在使用硫酸-蒽酮顯色劑時，由于蒽酮見光易分解，因此，所用試劑必須現(xiàn)用現(xiàn)配。

作者首次建立了參芪注射液中糖含量測定方法，并考察了參芪注射液制備方法的可行性。測定結(jié)果表明單煎黃芪、黨參測得的糖含量大致等于合煎的糖含量。折合原藥材中參芪總糖的含量為0.45g·g-1，參芪注射液中總糖含量為22.5mg·mL-1。測定結(jié)果可為參芪注射液的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

[1] 駱蘇芳，彭樹靈，劉國章，等.蒽酮硫酸法測定益元口服液中總多糖的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報，2007，23(1)：3-5.

[2] 文瑞良，郭振良，劉月亮.參芪注射液的研制[J].中藥材，1996，19(1)：35-36.

TheSugarContentAnalysisofCodonopsis-AstragalusRootInjectionwithAnthrone-sulfuricAcidMethod

Sun Bohang1, Zhang Wei2, Long Zhimin1, Li Nan1, Wu Lijun1, Gao Huiyuan1

(1.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,ShenyangLiaoning110016,China;2.TheFirstHospitalofChinaMedicalUniversity,ShenyangLiaoning110001,China)

Objective: To establish a method to analysis the sugar content in the Codonopsis-Astragalus root injection.MethodsPerform the analysis with anthrone-sulfuric acid method using glucose as the standard sample.ResultsThere were good linear relation between the0.02mg and0.2mg·mL-1(r=0.9996)of glucose and the average recoveries was93.1%(RSD=1.4%)(n=6). The average sugar contents in the astragalus, codonopsis, astragalus-codonopsis and injection were0.19g·g-1,0.69g·g-1,0.45g·g-1and22.5mg·mL-1respectively.ConclusionThis research gives a useful method for the analysis of the sugar content in the Codonopsis-Astragalus root injection.

Codonopsis-Astragalus root injection; Anthrone-sulfuric acid method; Sugar content

2009-09-03)