復肝寧對實驗性肝纖維化大鼠血清標志物和肝功能的影響

梁治學，胡燕，周語平，李蓮英，李其忠

（1．上海中醫(yī)藥大學，上海 201203；2．平?jīng)鲠t(yī)學高等專科學校，甘肅平?jīng)?744000；3．甘肅中醫(yī)學院，甘肅蘭州 730000）

復肝寧對實驗性肝纖維化大鼠血清標志物和肝功能的影響

梁治學1，2，胡燕2，周語平3，李蓮英2，李其忠1

（1．上海中醫(yī)藥大學，上海 201203；2．平?jīng)鲠t(yī)學高等?？茖W校，甘肅平?jīng)?744000；3．甘肅中醫(yī)學院，甘肅蘭州 730000）

目的觀察中藥復肝寧對肝纖維化的預防效果，探討其作用機理。方法采用豬血清腹腔注射法制成大鼠免疫性肝纖維化模型，觀察復肝寧對實驗性肝纖維化大鼠血清ALT、AST和血清標志物HA、LN、C-Ⅳ含量的影響。結果實驗性肝纖維化大鼠在應用復肝寧后，血清ALT、AST和血清標志物HA、LN、C-Ⅳ含量明顯降低，與病理模型組比較有顯著性差異（P＜0．05）。結論復肝寧能有效防止免疫性肝纖維化模型大鼠血清ALT、AST和血清標志物HA、LN、CⅣ含量的升高，具有保護肝細胞、抑制肝纖維化形成、促進膠原降解的作用，從而對肝纖維化具有一定的預防作用。

復肝寧；肝纖維化；血清標志物；肝功能

隨著對肝纖維化發(fā)生機制認識的不斷深化，現(xiàn)已證實肝纖維化是可逆性病變[1]。減緩、阻止肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展，逆轉、降解已經(jīng)形成的肝纖維化，對于治療慢性肝炎和預防肝硬化、肝癌的發(fā)生，有著重要的實用價值和社會意義。復肝寧在治療慢性乙型肝炎及肝纖維化的臨床實驗中已取得明顯療效[2]。本實驗主要從檢測肝纖維化大鼠血清標志物和血清ALT、AST方面來進一步驗證復肝寧預防肝纖維化的藥效，并探索其作用機理。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗動物及飼料

合格成年SPF級Wistar大鼠70只，雌雄各半，體重（200± 20）g，動物合格證號:SCXK（甘）2004-007-0001512;飼料為普通大顆粒飼料。大鼠及飼料均由甘肅中醫(yī)學院SPF級動物實驗中心提供。

1.2 主要藥品及試劑

復肝寧由黃芪、丹參、當歸、苦參、桃仁、川芎、赤芍、莪術、三棱、柴胡、漢防己、垂盆草組成，其藥量比例為3∶2∶1．2∶1．2∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1，以上藥物購自甘肅中醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥劑科。中藥水提醇沉處理后1 ml含生藥1．54 g（黃芪、當歸用涼水浸泡15分鐘，煎2次，將藥液濃縮至每毫升含生藥1 g。其余藥材用同法水提濃縮后，加無水乙醇醇沉處理，將藥液與黃芪、當歸藥液混勻濃縮至每毫升含生藥1．54 g）。秋水仙堿由昆明制藥集團公司生產，批號為20031149。豬血清由中美合資民海生物工程公司生產，批號為20041122。ALT、AST試劑盒由北京中生公司生產，批號為010081。HA、LN、C-Ⅳ放免試劑盒由北京北方生物技術研究所生產，批號為20051020。

1.3 動物分組

將大鼠適應性飼養(yǎng)1周后，隨機分為6組:空白對照組10只，病理模型，秋水仙堿，復肝寧低、中、高劑量組各12只，每組均雌雄各半。

1.4 造模方法

采用豬血清腹腔注射法制成大鼠免疫性肝纖維化模型。除空白對照組外，其余各組均用豬血清白蛋白按文獻方法進行造模[3]，每只動物腹腔注射豬血清0．5 ml，每周2次，連續(xù)6周。

1.5 給藥

各用藥組在造模同時給藥，每天1次，至6周結束。實驗期間各組動物自由飼食，飲用蒸餾水。大鼠用藥量按文獻方法折算[4]。復肝寧低、中、高劑量組每日分別以復肝寧3．85g/kg、7．7g/kg、15．4 g/kg靜脈注射給藥；秋水仙堿組每日以秋水仙堿0．1 mg/kg靜脈注射給藥；空白對照組、病理模型組同一時間靜脈注射蒸餾水，劑量為10 ml/kg。

1.6 標本采集與處理

實驗結束時，各組大鼠均摘眼球取全血測定血清ALT、AST和血清標志物HA、LN、C-Ⅳ。

1.7 檢測指標和方法

血清ALT、AST用自動分析法測定，血清標志物HA、LN、CⅣ用放射免疫分析法測定。

1.8 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件進行處理，用均值±標準差（±s）表示，2組均數(shù)比較進行t檢驗。

2 實驗結果

2.1 復肝寧對大鼠血清ALT、AST含量的影響（見表1）

表1 各組大鼠血清ALT、AST含量比較（，U/L）

表1 各組大鼠血清ALT、AST含量比較（，U/L）

注：與病理模型組比較，1）P＜0．05，2）P＜0．01；與秋水仙堿組比較，3）P＜0．01

10 12 12 12 12 12 42．57±5．202）84．94±9．33 58．95±5．522）60．30±6．052）57．94±5．892）47．65±9．672，3）135．40±20．042）307．40±48．90 192．93±38．312）210．04±41．601）195．54±38．322）151．07±22．922，3）組別例數(shù)（例）ALTAST空白對照組病理模型組秋水仙堿組復肝寧低劑量組復肝寧中劑量組復肝寧高劑量組

由表1可見，各用藥組大鼠血清ALT、AST含量均有所降低，與病理模型組比較均有顯著性差異（P＜0．05，P＜0．01）；復肝寧高劑量組與秋水仙堿組比較有極顯著性差異（P＜0．01）。

2.2 復肝寧對大鼠血清標志物HA、LN、C-Ⅳ含量的影響（見表2）

表2 各組大鼠血清標志物HA、LN、C-Ⅳ測定值比較（，ng/ml）

表2 各組大鼠血清標志物HA、LN、C-Ⅳ測定值比較（，ng/ml）

注：與病理模型組比較，1）P＜0．05，2）P＜0．01；與秋水仙堿組比較，3）P＜0．01

組別例數(shù)（只）HALNC-Ⅳ空白對照組病理模型組秋水仙堿組復肝寧低劑量組復肝寧中劑量組復肝寧高劑量組10 12 12 12 12 12 163．34±32．332）341．42±39．35 233．56±24．432）242．93±21．972）224．18±30．202）166．23±25．252）24．74±4．542）42．86±4．57 33．90±2．762）34．51±3．472）31．34±3．582）27．71±4．362，3）14．23±2．542）26．36±4．85 20．83±4．801）19．89±4．092）19．42±2．422）15．89±2．202，3）

由表2可見，各用藥組大鼠肝組織中血清標志物HA、LN、C-Ⅳ含量均有所降低，與病理模型組比較均有顯著性差異（P＜0．05，P＜0．01）；復肝寧高劑量組與秋水仙堿組比較有極顯著性差異（P＜0．01）。

3 討論

肝纖維化是多種慢性肝病的共同病理基礎，早期阻斷和逆轉肝纖維化是防治各種慢性肝病的關鍵。周語平教授認為肝纖維化總屬本虛標實，根據(jù)氣血淤滯、濕淤互結的病機特點提出以活血化淤為主，兼益氣養(yǎng)血、柔肝除濕的治療原則，確立復肝寧為防治肝纖維化的主方。在肝纖維化發(fā)生的過程中，肝細胞的變性、壞死及炎癥是肝纖維化發(fā)生的前提。血清ALT、AST活性能夠敏感地提示肝細胞的損傷及其損傷程度，其是反映肝功能的相關指標，其都不同程度地與肝纖維化相關，其對于判斷疾病的嚴重性、藥物療效評價及預后檢測都具有重要意義[5]。ECM（細胞外基質）的沉積和降解失衡是肝纖維化形成的本質，恢復兩者的平衡是治療的根本目的。血清標志物HA、LN、C-Ⅳ皆屬于ECM成分，血清標志物HA、LN、C-Ⅳ的聯(lián)合檢測是反映肝纖維化的良好指標，其對判斷慢性肝炎炎癥程度、肝纖維化程度有重要意義[6]。

本實驗結果表明:復肝寧能明顯降低血清ALT、AST和血清標志物HA、LN、C-Ⅳ的含量，且與病理模型組比較有顯著性差異，提示該方可通過保護肝細胞、減輕炎癥反應、抑制膠原合成及膠原分泌細胞的繁殖、促進膠原的降解、減輕膠原的過度沉積，從而直接或間接抑制肝纖維化的形成，起到預防、逆轉肝纖維化的作用，且在一定范圍內，劑量越大，效果越好，這也提示如果能進一步調整劑量可望獲得更好的療效。在肝纖維化尚未完全形成之前就開始使用復肝寧，可以預防肝纖維化的形成，阻斷肝纖維化的發(fā)展，達到逆轉肝纖維化的目的。

[1]賈克明．加強對乙型病毒性肝炎治療的研究[J]．中華內科雜志，2000，39（12）:797．

[2]周語平，劉光煒，楊志軍．復肝寧對肝炎后肝纖維化患者肝功能及血清標志物的影響[J]．甘肅科技，2004，20（5）：125～126．

[3]徐叔云．藥理實驗方法學[M]．第3版．北京:人民衛(wèi)生出版社，2002．

[4]施新猷．現(xiàn)代醫(yī)學實驗動物學[M]．北京：人民軍醫(yī)出版社，2000．

[5]高春芳，孔憲濤．肝纖維化生化診斷指標的選擇和評價[J]．現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2004，20（16）:1571～1574．

[6]張萍．血清LN、CⅣ、PCⅢ、HA對肝纖維化及肝硬化的診斷價值[J]．中國療養(yǎng)醫(yī)學，2002，11（1）:50．

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1671-1246（2010）08-0125-02

本文系甘肅省科學事業(yè)費資助科研項目（QS022-C33-007）