副溶血性弧菌ERIC-PCR分型及毒力基因檢測(cè)研究

丁久法，潘迎捷，陳洪友，唐明未，秦紅友，*，趙 勇，*，陳 敏，*

（1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海201306;2.上海生物芯片有限公司，上海201203; 3.上海疾病預(yù)防控制中心，上海 200336）

副溶血性弧菌ERIC-PCR分型及毒力基因檢測(cè)研究

丁久法1，潘迎捷1，陳洪友3，唐明未2，秦紅友2，*，趙 勇1，*，陳 敏3，*

（1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海201306;2.上海生物芯片有限公司，上海201203; 3.上海疾病預(yù)防控制中心，上海 200336）

目的:建立副溶血性弧菌ERIC－PCR分子分型技術(shù)，分析副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株及分離株基因組DNA ERICPCR指紋圖譜，并對(duì)副溶血性弧菌毒力基因進(jìn)行檢測(cè)，以了解不同來(lái)源副溶血性弧菌毒力基因攜帶情況。方法:提取副溶血性弧菌基因組DNA，以腸桿菌基因間共有重復(fù)序列（ERIC）為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后用凝膠成像分析儀對(duì)圖譜進(jìn)行觀察分析，并以相似性系數(shù)構(gòu)建聚類(lèi)圖;通過(guò)PCR方法對(duì)直接耐熱溶血素（TDH）和耐熱直接相關(guān)溶血素（TRH）進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:26株副溶血性弧菌均可擴(kuò)增產(chǎn)生可重復(fù)的DNA指紋圖譜，ERIC－PCR可將26株菌分為12個(gè)型，分辨力指數(shù)為0.926;只在臨床分離株中檢測(cè)到TDH基因，而除一株標(biāo)準(zhǔn)菌株外，所有菌株都未檢測(cè)到TRH基因。結(jié)論:研究顯示ERIC－PCR可從分子水平對(duì)副溶血性弧菌基因組DNA進(jìn)行快速指紋圖譜分析，同時(shí)結(jié)合毒力基因檢測(cè)，能夠?yàn)楦比苎曰【澄镏卸炯膊〉念A(yù)防和流行病學(xué)調(diào)查提供科學(xué)依據(jù)。

副溶血性弧菌，腸桿菌基因間共有重復(fù)序列－PCR，基因分型，流行病學(xué)

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，Vp）是一種廣泛分布于沿海地區(qū)的嗜鹽菌，它是引起食源性疾病的主要病原之一，1988年以來(lái)的報(bào)道顯示，副溶血性弧菌引發(fā)的食物中毒的發(fā)生規(guī)模及人群暴露規(guī)模呈明顯上升趨勢(shì)，均已超過(guò)沙門(mén)氏菌，躍居首位［1］。為了便于進(jìn)行臨床診斷、流行病學(xué)調(diào)查、食品中微生物檢測(cè)及醫(yī)院感染監(jiān)控，微生物的分型與檢測(cè)研究是必不可少的內(nèi)容。ERIC序列（Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus）是首先在腸道細(xì)菌基因組中發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)為126bp的非編碼保守重復(fù)序列［2］，Versalovic［3］等利用ERIC保守序列設(shè)計(jì)的引物對(duì)細(xì)菌基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到反映細(xì)菌基因組結(jié)構(gòu)特征的譜帶。此后，ERIC－PCR指紋圖譜就被廣泛應(yīng)用于種內(nèi)或種間各類(lèi)微生物鑒定。目前，對(duì)于Vp的致病機(jī)制的初步研究發(fā)現(xiàn)，其致病因子主要為溶血素類(lèi)，包括耐熱直接溶血素（thermostable direct hemolysin，TDH）、不 耐 熱 直 接 溶 血 素（thermolabile hemolysin，TLH）和耐熱直接相關(guān)溶血素（TDH－related hemolysin，TRH）［4］，分別由相關(guān)的tdh、tlh和trh基因編碼。TDH和TRH與副溶血弧菌的致病能力關(guān)系密切，因此，對(duì)這兩種基因的檢測(cè)研究對(duì)于了解副溶血性弧菌的流行趨勢(shì)、預(yù)防與治療食物中毒具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)ERIC－PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，建立副溶血性弧菌ERIC－PCR分子分型方法，并運(yùn)用該方法得到副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)株和分離株的參考指紋圖譜。同時(shí)，通過(guò)對(duì)tdh和trh基因的檢測(cè)，以分析毒力菌株的分布，達(dá)到預(yù)防與治療食物中毒的目的。另外通過(guò)對(duì)不同血清群、型及不同來(lái)源的副溶血性弧菌流行分離株的分析，初步探討了該技術(shù)在副溶血性弧菌流行病學(xué)調(diào)查和同源性追蹤上的應(yīng)用價(jià)值。

表1 副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)株和分離株來(lái)源及血清型

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

菌株及來(lái)源 3株副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)株購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，12株副溶血性弧菌臨床分離株是2008年3～5月上海市疾病預(yù)防控制中心從上海地區(qū)醫(yī)院腹瀉患者糞便中分離得到，其余副溶血性弧菌11株（16～26）均為本實(shí)驗(yàn)室分離保存菌株，所有菌株都經(jīng)過(guò)生化鑒定和血清分群，見(jiàn)表1; ATCC 美國(guó)菌種保藏中心（American Type Culture Collection）;Taq酶及其緩沖液、10mmol/L dNTPs、25mmol/L MgCl2均購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司;DNA提取試劑盒 購(gòu)自上海生工;3.5%氯化鈉營(yíng)養(yǎng)肉湯。

PCR儀（PTC－100）、梯度PCR儀（PTC－200）美國(guó)Bio－rad;電泳儀 Tanon EPS 308，上海天能科技有限公司;凝膠成像分析系統(tǒng) GIS2010，上海天能科學(xué)儀器公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 DNA提取 酚－氯仿法:將副溶血性弧菌菌種接種于3.5%氯化鈉營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)過(guò)夜。采用文獻(xiàn)［5］的酚－氯仿方法提取DNA，略做修改。a.1.5m L菌液，13000 r/m in，去上清;b.加入TE485μL，20%SDS 15μL，煮沸10m in;c.用等體積的酚氯仿抽提，充分振蕩混勻，13000 r/m in離心5min，將上清移至干凈離心管;d.加 1m L冰無(wú)水乙醇，－20℃放30m in以上，沉淀DNA;e.以13000 r/min離心10m in，棄上清，冰無(wú)水乙醇洗滌1次，75%乙醇洗滌2次，溶解于100μL ddH2O，－20℃保存。

DNA提取試劑盒法:按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2 ERIC－PCR引物及反應(yīng)條件 ERIC－PCR引物由上海生工合成，引物序列為:ERIC 1:5'－ATGTAAGCTCCTGGGG ATTCAC－3'，ERIC 2:5'－AAGTAAGTG ACTGGGGTG AGCG－3'。參照文獻(xiàn)［3］初步確定反應(yīng)體系和反應(yīng)條件。在25μL反應(yīng)體系中含有10×PCR緩沖液2.5μL，1.5mmol/L MgCl2，0.2mmol/L dNTPs，1.5U Taq DNA聚合酶，模板DNA 2.5μL，5μmol/L的引物各1μL，其余用超純水補(bǔ)齊。

反應(yīng)程序:95℃預(yù)變性7m in;92℃變性45s，52℃退火1m in，70℃延伸10m in，35個(gè)循環(huán);70℃，15min; 16℃保存。

針對(duì)影響PCR反應(yīng)較大的因素，如Mg2+濃度、引物濃度和退火溫度等進(jìn)行優(yōu)化研究。

1.2.3 ERIC－PCR重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 選取2個(gè)菌株樣品（標(biāo)記為A和B），采用酚氯仿抽提法和DNA提取試劑盒兩種方式提取DNA模板，同一反應(yīng)體系及反應(yīng)條件下每個(gè)模板重復(fù)2次ERIC－PCR擴(kuò)增。

1.2.4 ERIC－PCR反應(yīng)產(chǎn)物分析 取6μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與2μL溴酚藍(lán)混勻，以1kb DNA Marker作相對(duì)分子質(zhì)量指示，用1.0%瓊脂糖凝膠（含EB 0.5μg/m L）在電壓100V下電泳20m in，之后在75V下電泳45min，置凝膠成像系統(tǒng)中進(jìn)行結(jié)果分析。

1.2.5 副溶血性弧菌ERIC－PCR指紋圖譜分析 按照最佳反應(yīng)條件下ERIC－PCR擴(kuò)增DNA凝膠電泳的結(jié)果，顯帶的記錄方法為:針對(duì)某一條帶而言“有”記做“1”，“無(wú)”記做“0”，只記載清晰易辨的條帶。樣品間的遺傳相似性的計(jì)算采用Jaccard的相似系數(shù)分析方法進(jìn)行，公式如下［6］:F=2Nxy/（Nx+Ny） （公式中，Nxy為兩個(gè)菌株x和y之間共有的DNA擴(kuò)增帶數(shù)目，Nx和Ny是指每個(gè)菌株所具有的DNA擴(kuò)增帶數(shù)目）。采用 NTSYSpc2.1計(jì)算軟件，得到Jaccard的遺傳相似性系數(shù)矩陣和遺傳距離矩陣，利用遺傳距離矩陣，采用UPGMA（非加權(quán)配對(duì)算術(shù)平均法）做遺傳分析的聚類(lèi)圖，最后使用 Hunter和Gaston的方法計(jì)算出此分型方法的分辨力指數(shù)［7］。

1.2.6 tdh和trh基因的PCR擴(kuò)增 參考文獻(xiàn)［8］所用引物，由上海生工合成，各基因擴(kuò)增產(chǎn)物大小分別為:tdh:270bp，trh:500bp。PCR反應(yīng)體積為25μL，含10×PCR buffer 2.5μL，1.5mmol/L MgCl2，0.2mmol/L dNTPs，1UTaq DNA聚合酶，模板DNA 2μL，5μmol/L的引物各1μL，其余用超純水補(bǔ)齊。反應(yīng)程序:95℃預(yù)變性5m in后進(jìn)入循環(huán)程序;95℃變性30s，53℃退火30s，72℃延伸1m in，35個(gè)循環(huán);72℃復(fù)性10m in，16℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物用含0.5μg/m L EB的1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，在凝膠成像系統(tǒng)下拍照記錄結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 ERIC－PCR反應(yīng)條件優(yōu)化

通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系中Mg2+濃度、引物濃度和退火溫度3個(gè)對(duì)實(shí)驗(yàn)影響較大的重要參數(shù)進(jìn)行探索和優(yōu)化，最后確定了反應(yīng)體系中Mg2+濃度為1.5mmol/L，引物濃度為0.4μmol/L，退火溫度為52℃，在此條件下ERIC－PCR可以擴(kuò)增產(chǎn)生清晰的條帶。

2.2 ERIC－PCR的重復(fù)性

取兩株菌按前述兩種不同方法提取的模板DNA進(jìn)行ERIC－PCR擴(kuò)增，結(jié)果顯示這兩種方法所提取模板DNA對(duì)PCR反應(yīng)結(jié)果沒(méi)有影響，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 ERIC－PCR實(shí)驗(yàn)重復(fù)性

2.3 副溶血性弧菌ERIC－PCR擴(kuò)增結(jié)果

在上述條件下，對(duì)3株副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)株及23株分離株進(jìn)行擴(kuò)增，均有擴(kuò)增產(chǎn)物并呈現(xiàn)不同程度的多態(tài)性，擴(kuò)增產(chǎn)物大小約在200bp～3.0kb之間，擴(kuò)增條帶數(shù)為 4～13條，其中 400、500、700、900、1500bp擴(kuò)增帶為大部分菌株的主帶，尤其是1500bp擴(kuò)增帶最亮。同一醫(yī)院同一時(shí)間所得副溶血性弧菌臨床分離株（例如6、7、8均是2008年4月14日嘉定中心醫(yī)院腹瀉患者糞便中分離得到）呈現(xiàn)幾乎完全一致的指紋圖譜，說(shuō)明這幾株菌是同一爆發(fā)中的菌株，血清型測(cè)試顯示6～10以及12、13均為O3:K6型，而與在同一醫(yī)院分離的一株 O4:K8型菌株與O3:K6型存在800bp和2500bp兩個(gè)位置的區(qū)別（見(jiàn)圖2）。

圖2 副溶血性弧菌ERIC－PCR指紋圖譜

2.4 副溶血性弧菌ERIC－PCR指紋圖譜的分析

運(yùn)用NTSYS pc2.1軟件對(duì)上述指紋圖譜進(jìn)行聚類(lèi)分析（圖3），結(jié)果主要分為12個(gè)型，從圖上可以看到，具有同樣血清型的幾株臨床分離株親緣關(guān)系極其相近，同一血清群不同來(lái)源的副溶血性弧菌（例如同屬O3群的臨床分離株6～10與分離自蛤蜊的24）的親緣關(guān)系也非常相近。同時(shí)，我們可以看出，ERIC－PCR分型結(jié)果與血清型并不完全一致，這與金莉莉報(bào)道的對(duì)沈陽(yáng)市副溶血性弧菌臨床分離株的分型結(jié)果類(lèi)似［9］。使用Hunter和Gaston的方法計(jì)算出此分型方法的分辨力指數(shù)為0.926，表示ERIC－PCR對(duì)副溶血性弧菌具有較好的分型能力。

圖3 副溶血性弧菌ERIC－PCR聚類(lèi)分析樹(shù)狀圖

2.5 tdh和trh基因檢測(cè)結(jié)果

利用tdh和trh基因的特異性引物進(jìn)行PCR鑒定顯示，在26株副溶血性弧菌中，所有致病性臨床分離株都檢測(cè)到tdh基因，而環(huán)境及海產(chǎn)品分離株均未能檢出tdh基因，這些結(jié)果與國(guó)外報(bào)道基本一致［10－11］，即副溶血性弧菌臨床分離株中tdh基因的檢出率顯著高于環(huán)境和食品分離株。除標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC17802檢出trh基因外，包括臨床分離株在內(nèi)的所有菌株都未檢測(cè)到trh基因，結(jié)果見(jiàn)圖4、圖5及表2。

圖4 副溶血性弧菌tdh基因檢測(cè)結(jié)果

圖5 副溶血性弧菌trh基因檢測(cè)結(jié)果

表2 副溶血性弧菌毒力基因監(jiān)測(cè)情況

3 結(jié)論

在原核與真核生物中普遍存在著散布的重復(fù)DNA序列，這些序列由于發(fā)揮著生物體基本的功能作用，因此在進(jìn)化中呈高度保守的狀態(tài)，ERIC就屬于這樣的序列，主要分布于腸桿菌（Enterobacteriaceae）家族中。由于不同的細(xì)菌基因組上的ERIC重復(fù)序列的數(shù)目和分布不同，同時(shí)ERIC－PCR是在隨機(jī)引物PCR （Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD）的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的對(duì)細(xì)菌DNA進(jìn)行指紋圖譜分析的一種方法，其實(shí)質(zhì)是一種半隨機(jī)性質(zhì)的PCR，因此PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后得到由一系列大小不同片段組成的DNA指紋圖譜。這種鑒定方法集簡(jiǎn)單、快速、敏感和分辨率高的優(yōu)點(diǎn)于一身，普遍應(yīng)用于流行病學(xué)中的致病菌株鑒定和確定細(xì)菌間的親緣關(guān)系。金莉莉等［12］對(duì)從62份樣品中分離的單增李斯特氏菌運(yùn)用ERIC－PCR技術(shù)進(jìn)行鑒定，結(jié)果與國(guó)標(biāo)生化方法檢測(cè)結(jié)果完全一致，該技術(shù)可用于李斯特氏菌種、菌株的鑒定以及進(jìn)一步分型研究。賈寧等［13］采用PFGE、RAPD、Rep－PCR和ERIC－PCR 4種基因分型方法對(duì)變形桿菌進(jìn)行分型，PFGE分辨率最高，ERIC－PCR分辨率略低于PFGE，但高于其他兩種分型方法，而且重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定，不需要昂貴設(shè)備，可用于多種菌屬，不需重復(fù)設(shè)計(jì)引物，易于實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化。

ERIC－PCR反應(yīng)體系和循環(huán)條件可能影響圖譜穩(wěn)定性以及清晰性，故對(duì)其反應(yīng)體系及反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化處理并進(jìn)行相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化是非常必要的。經(jīng)過(guò)本文研究建立了副溶血性弧菌ERIC－PCR最佳反應(yīng)體系和循環(huán)條件，可擴(kuò)增產(chǎn)生清晰且可重復(fù)的指紋圖譜，將為相應(yīng)方法的建立提供寶貴數(shù)據(jù)。

本文結(jié)果表明，ERIC－PCR可以將26株副溶血性弧菌分為12個(gè)型，分辨力指數(shù)為0.926，具有較好的分型能力，并能提供探索Vp親緣關(guān)系進(jìn)化的方法。在我們研究的菌株中，O3群占38.5%，O4群占34.6%，O11占15.4%，在近年來(lái)的食物中毒副溶菌株中，O3:K6血清型菌株成為最常見(jiàn)的中毒株，且無(wú)明顯的地域差別。在我們對(duì)副溶血性弧菌的重要致病基因tdh和trh進(jìn)行檢測(cè)以后發(fā)現(xiàn)，在所有致病性臨床分離株都檢測(cè)到tdh基因，提示tdh毒素基因編碼的直接耐熱溶血素與該菌的致病性存在高度的相關(guān)性。同時(shí)結(jié)合ERIC－PCR分型結(jié)果，可以發(fā)現(xiàn)，同屬O3群的tdh陽(yáng)性的臨床分離株6～10與分離自蛤蜊的tdh陰性的24的親緣關(guān)系卻非常相近，同樣，同屬O4群的tdh陽(yáng)性的臨床分離株15與分離自蛤蜊的tdh陰性的22、23的親緣關(guān)系也非常相近，因此tdh陰性的食品分離株與副溶血性弧菌食物中毒之間或許存在某種關(guān)系，值得繼續(xù)探討。

［1］劉秀梅.食源性疾病監(jiān)控技術(shù)的研究［J］.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2004，16（1）:3－9.

［2］Hulton CSJ，Higgins CF，Sharp PM.ERIC sequences:a novel family of repetitive elements in the genomes of Escherichia coli，Salmonella typhimurium and other Enterobacteria［J］.Mol Microbiol，1991，5（4）:825－834.

［3］Versalovic J，Koeuth T，Lup ski JR.Distribution of repetitive DNA sequences in eubacteria and application to finerprinting of bacterial genomes［J］.Nucleic Acid Res，1991，19（24）:6823－6831.

［4］金周浩，宋達(dá)鋒，顧青.副溶血弧菌毒力基因的檢測(cè)研究［J］.中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2008，8（3）:143－146.

［5］黃珮珺，石超，潘世揚(yáng)，等.金黃色葡萄球菌DNA提取方法的改良［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2002，20（2）:106.

［6］Tseng YT，Lo HF，Hwang SY.Genotyping and assessment of genetic relationships in elite polycross breeding cultivars of sweet potato in Taiwan based on SAMPL polymorphisms［J］.Botanical Bulletin of Academia Sinica，2002，43:99－105.

［7］Hunter PR，Gaston MA.Numerical index of the discriminatory ability of typing systems an application of Simpson's index of diversity［J］.Clin Microbial，1988，26（11）:2465－2466.

［8］J－K LEE，D－W JUNG，S－Y EOM，etal.Occurrence of Vibrio parahaemolyticus in oysters from Korean retail outlets［J］.Food Control，2008，19（10）:990－994.

［9］金莉莉，董雪，王秋雨，等.副溶血性弧菌重復(fù)序列－PCR分型研究［J］.微生物學(xué)通報(bào)，2008，35（3）:389－394.

［10］Annick RP，Alain G，Jean L，etal.Occurence of the tdh and trh genes in Vibrio parahaemolyticus isolates from waters and raw shellfish collected in two French coastal areas and from seafood imported into France［J］.Intl JFood Microbiol，2004，91（3）:319－325.

［11］DePaola A，Kaysner CA，Bowers J，et al.Environmental investigations of Vibrio parahaemolyticus in oysters after outbreaks in Washington，Texas and New York（1997 and 1998）［J］.Appl Environ Microbiol，2000，66（11）:4649－4654.

［12］金莉莉，王秋雨，侯瀟.ERIC－PCR技術(shù)在李斯特氏菌種、菌株鑒定中的應(yīng)用［J］.遺傳，2003，25（2）:195－197.

［13］賈寧，林茂虎，陳世平，等.變形桿菌基因分型方法的評(píng)價(jià)［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2002，12（9）:652－654.

Genotyping of Vibrio parahaemolyticus by ERIC－PCR and virulence gene detection

DING Jiu－fa1，PAN Ying－jie1，CHEN Hong－you3，TANG M ing－wei2，QIN Hong－you2，*，ZHAO Yong1，*，CHEN M in3，*
（1.College of Food Science and Technology，Shanghai Ocean University，Shanghai201306，China; 2.Shanghai Biochip Co.，Ltd.，Shanghai201203，China; 3.ShanghaiMunicipal Center for Disease Control＆Prevention，Shanghai200336，China）

Ob jective:To estab lish the ERIC－PCR technique for genotyp ing Vib rio parahaemolyticus，study the genom ic DNA ERIC－PCR fingerp rinting of Vib rio parahaemolyticus standard strains and ep idem ic isolates，investigate the positive rate of virulence genes of Vib rio parahaemolyticus from d ifferent sources.Methods: Genom ic DNA of Vib rio parahaemolyticus was abstrac ted and used as the tem p late for PCR.Enterobac teial repetitive intergenic consensus sequences were used as p rimers to amp lify the target sequences in Vibrio parahaemolyticus genom ic DNA，am p lification p roduc ts were separated by agarose gel elec trophoresis，and elec trophoresis maps were analyzed by gel image analysis system，the c luster dend rograms weremade according to the coefficient of sim ilarity;thermostab le d irect hemolysin（TDH）gene and TDH－related hemolysin（TRH）gene were detec ted by PCR.Results:Twenty－six Vib rio parahaem olyticus strains were g rouped into 12 patterns w ith discrim inative index of 0.926;The tdh gene was positive in all c linical strains but no trh gene was in all strains excep t one standard strain.Conc lusion:ERIC－PCR could be used for analysing fingerp rinting of genom ic DNA from Vib rio parahaemolyticus quickly，combining w ith virulence genes detection，it could be used in p reventing food poisoning caused by Vib rio parahaem olyticus，and p rovided scientific basis for Vib rio parahaemolyticus epidem iology investigation.

Vib rio parahaemolyticus;ERIC－PCR;genotyp ing;ep idem iology

Q789

A

1002－0306（2010）08－0137－05

2009－08－17 *通訊聯(lián)系人

丁久法（1984－），男，碩士研究生，研究方向:食品安全。

上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（滬農(nóng)科攻字2006第10－5號(hào)）;江蘇檢驗(yàn)檢疫局科技項(xiàng)目（2008KJ25）。