五加參歸芪精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李春實(shí)，韓映晨，姜茁松

（1.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2.吉林省延邊州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000）

五加參歸芪精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李春實(shí)1*，韓映晨2，姜茁松1

（1.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2.吉林省延邊州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000）

目的：建立五加參歸芪精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)制劑中的刺五加、黃芪進(jìn)行鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)制劑中刺五加進(jìn)行定量測(cè)定。結(jié)果：薄層色譜清晰，分離效果好，陰性無(wú)干擾；紫丁香苷在0.020 12～0.201 2μg與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，Y＝2 991 491.4X－10 253.3，（r＝1.000 0），平均回收率為99.7%，RSD＝1.4%。結(jié)論：本方法可靠、有效、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

五加參歸芪精；TLC；刺五加；黃芪；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

五加參歸芪精是由刺五加、黃芪、當(dāng)歸3味中藥組成，具有扶正固本，補(bǔ)氣固表，補(bǔ)血養(yǎng)血等功效。用于久病衰弱，失眠自汗，腰膝酸軟，氣短心悸［1］。本品收載于 《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第二冊(cè)，原標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有鑒別方法與含量測(cè)定方法。為有效控制其質(zhì)量，對(duì)該產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，用薄層色譜法對(duì)制劑中的刺五加、黃芪進(jìn)行定性鑒別，對(duì)刺五加中紫丁香苷的含量采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010C高效液相色譜儀；紫丁香苷對(duì)照品（批號(hào)111574-200201）、異秦皮啶對(duì)照品（批號(hào)0837-200203）、黃芪對(duì)照藥材均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所。乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

五加參歸芪精（修正藥業(yè)集團(tuán)通化市制藥有限公司，批號(hào)20060301，20060302，20060303；撫松縣中藥責(zé)任有限公司，批號(hào)20060902）。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 刺五加的鑒別 取本品25mL，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取2次，每次20mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取異秦皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（9∶4∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

2.1.2 黃芪的鑒別 取本品10mL，加水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次10mL，合并正丁醇液，加正丁醇飽和的氨試液洗滌2次，每次10mL，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對(duì)照藥材2g，加甲醇20mL，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液5μL、對(duì)照藥材溶液與對(duì)照品溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖2。

2.2 紫丁香苷的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 采用 Agilent-HC C18（4.6mm×250mm，5μm）；乙腈-水（5∶95）；流速：0.8mL·min－1；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；理論板數(shù)按紫丁香苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取紫丁香苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加水制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品10mL，加三氯甲烷20mL萃取，棄去三氯甲烷液，取水層濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例取相當(dāng)于5mL中所含群藥適量（無(wú)刺五加），按工藝制備陰性對(duì)照樣品，再按2.2.3項(xiàng)下制備方法制備陰性對(duì)照溶液。量取5μL注入液相色譜儀，結(jié)果陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 五加參歸芪精中刺五加TLC圖

圖2 五加參歸芪精中黃芪TLC圖

2.2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各5μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。HPLC圖見(jiàn)圖3～5。

圖3 紫丁香苷對(duì)照品HPLC圖

圖4 五加參歸芪精供試品HPLC圖

圖5 缺刺五加的陰性對(duì)照HPLC圖

2.2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 取紫丁香苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加水制成每1mL含20.12μg的溶液，分別精密吸取1，3，5，7，10μL測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程Y＝2 991 491.4X－10 253.3（r＝1.000 0），紫丁香苷在0.020 12～0.201 2μg與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 取紫丁香苷對(duì)照品溶液，照上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次5μL，記錄峰面積，計(jì)算RSD＝1.8%。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，分別于0，4，10，15，24h進(jìn)樣5次，每次5μL，記錄峰面積，計(jì)算RSD＝2.1%，說(shuō)明紫丁香苷的含量比較穩(wěn)定。

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品（批號(hào)20060301），照上述供試品溶液制備方法，分別配制6份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，其平均含量為0.018mg·mL－1，RSD＝2.0%。

2.2.10 加樣回收試驗(yàn) 精密量取本品（批號(hào)20060301）5mL與對(duì)照品溶液（0.020 12mg·mL－1）5mL，依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 紫丁香苷加樣回收率試驗(yàn)

2.2.11 樣品含量測(cè)定 按上述方法測(cè)定4批樣品中的紫丁香苷含量，每批平行測(cè)定2份，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品中紫丁香苷含量測(cè)定mg／粒

3 討論

本試驗(yàn)增加了刺五加、黃芪的薄層鑒別。所建立的方法斑點(diǎn)清晰，耐用性好，重現(xiàn)性好。曾考察過(guò)當(dāng)歸（水煎）的薄層鑒別方法，但沒(méi)有找到合適的方法。在含量測(cè)定項(xiàng)下，預(yù)試驗(yàn)中曾采用 《中國(guó)藥典》2005年版一部刺五加藥材項(xiàng)下流動(dòng)相［2］，但分離效果不好。采用本試驗(yàn)的色譜條件分離效果好，而且靈敏度高，調(diào)節(jié)信噪比約為3，測(cè)得的最低檢出限為1.006ng；調(diào)節(jié)信噪比約為10，測(cè)得的定量限為3.018ng，而且對(duì)不同品牌的色譜柱耐用性良好。本實(shí)驗(yàn)采取的方法可靠、有效、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

［1］衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第二冊(cè)）［S］.1990：34.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：143.

Quality Standard for Wujiashenguiqi Oral Liquid

Li Chunshi1，Han Yingchen2，Jiang Zhuosong1
（1.Jilin Provicial Institute for Food and Drug Control，Changchun Jilin130033，China；2.Jilin Provicial Yanbian Institute for Food and Drug Control，Yanji Jilin133000，China）

Objective：To set up the quality standard for Wujiashenguiqi oral liquid.Methods：Acanthopanax and membranous milkvetch in preparation were identified by TLC.The content of acanthopanax in the Wujiashenguiqi Oral liquid was determined by HPLC.Results：The spot on the thin layer plate was clear and the negative control was no disturbed.The linear range of syringoside was 0.020 12～0.201 2μg.The average recovery was 99.7%with RSD of 1.4%.Conclusion：The method is reliable，accurate and specific，It can be used for quality control of Wujiashenguiqi Oral liquid.

Wujiashenguiqi Oral liquid；TLC；Acanthopanax；Membranous milkvetch；Quality standard

*李春實(shí)，E-mail：piaozhe0007＠yahoo.com.cn

2010-02-05）