原卟啉二鈉對HCC細(xì)胞株體外放射增敏作用的研究

梁 勇 楊菊月 汪 耀

1 淮南聯(lián)合大學(xué)醫(yī)學(xué)系（232001）

2 南陽市第一人民醫(yī)院（473065）

肝細(xì)胞癌（hepatocelluar carcinoma，HCC）是我國一種常見的消化道惡性腫瘤，其占原發(fā)性肝癌的90%，發(fā)病率僅次于胃癌和食道癌。目前治療首選方法是手術(shù)切除，但術(shù)后的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率是制約肝癌療效進(jìn)一步提高的重要因素之一；HCC對放療并不敏感；其對化療藥物容易產(chǎn)生多藥耐性（multidrug resistance，MDR）而降低治療效果[1,2]。因此尋求新型的HCC分子靶向治療藥物成為當(dāng)務(wù)之急。本研究對NAPP（Protoporphyrin Disodium，NAPP）在體外對HCC細(xì)胞系的毒性及其輻照增敏作用進(jìn)行了探討。

1 材料與方法

1.1 材料

藥物及細(xì)胞：NAPP系安徽理工大學(xué)劉群紅副教授惠贈（純度97.3%），Chang肝細(xì)胞和SMMC-7721為本室保存。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞毒性實驗

復(fù)蘇SMMC-7721及Chang細(xì)胞，取對數(shù)生長期細(xì)胞調(diào)整濃度為1× 105cell /mL，接種96孔板（100 μL/孔）。加入含有藥物的完全培養(yǎng)基100μL。置細(xì)胞于37℃，5% CO2培養(yǎng)3d，每種濃度設(shè)5個復(fù)孔。實驗設(shè)藥物處理組、細(xì)胞對照組和空白對照組，加入NAPP終濃度分別為0、4.8、24、120、600、3000μg/mL，藥物作用72h后用MTT法測OD值。每孔加入MTT（5mg/mL）20μL，37℃孵育4h后，每孔加入DMSO溶液150μL，570nm處測定其OD值。求出細(xì)胞抑制率及藥物半數(shù)抑制濃度（IC50）。細(xì)胞抑制率（%）=（1-實驗孔OD/對照組OD）×100%。

1.2.2 體外細(xì)胞抑制及放射增敏實驗

取對數(shù)生長期SMMC-7721細(xì)胞，用含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞數(shù)為105個/mL，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100μL。同時加入藥物NAPP（終濃度0～600μg/mL）100μL。置5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)預(yù)培養(yǎng)4h后分兩組：一組繼續(xù)培養(yǎng)，另外一組用CO60射線照射，照射劑量分別為2、4和6Gy，照射后繼續(xù)培養(yǎng)，于72h后MTT法測各組細(xì)胞OD值，方法同上。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 11.0進(jìn)行ANOVA方差分析P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 NAPP細(xì)胞抑制實驗結(jié)果

見表1。

表1 NAPP對SMMC-7721和Chang細(xì)胞活性的影響(±s)

表1 NAPP對SMMC-7721和Chang細(xì)胞活性的影響(±s)

IC50：SMMC-7721=523.3μg/mL，Chang=8710.9μg/mL

組別 NAPP濃度(μg/mL)SMMC-7721OD值 Chang OD值對照 0 0.801±0.062 0.768±0.082 1 4.8 0.783±0.007 0.764±0.108 2 24 0.602±0.114 0.754±0.058 3 120 0.516±0.086 0.662±0.085 4 600 0.367±0.098 0.610±0.098 5 3000 0.260±0.008 0.576±0.054

2.2 NAPP輻照增敏實驗結(jié)果

見表2。

表2 不同NAPP濃度在不同輻照劑量下對SMMC-7721的增敏作用(±s)

表2 不同NAPP濃度在不同輻照劑量下對SMMC-7721的增敏作用(±s)

*與未照射組比較 P＜0.05～0.01，▲●▼與單純照射組比較P＜0.05～0.01

組別 0Gy 2Gy 4Gy 6Gy未照射組 0.801±0.062單純照射組 0.810±0.083 0.780±0.069 0.554±0.102 24 0.602±0.114*0.623±0.127▲ 0.552±0.052● 0.501±0.043 120 0.516±0.086*0.492±0.068▲ 0.459±0.023● 0.404±0.059▼600 0.367±0.098*0.346±0.105▲ 0.301±0.059● 0.269±0.039▼

3 討 論

NAPP可作為肝臟機(jī)能改善劑，以往對NAPP的研究都側(cè)重其在保肝、護(hù)肝方面[3]，近年來主要在抗病毒方面，研究[4,5]發(fā)現(xiàn)NAPP可以在體外有效的抑制HBV和HCV復(fù)制。本文從NAPP對HCC細(xì)胞株輻照增敏角度研究了其新的藥效作用。研究選取SMMC-7721和Chang細(xì)胞為對象，發(fā)現(xiàn)相同濃度NAPP對正常肝細(xì)胞Chang細(xì)胞毒性較小，而對HCC細(xì)胞毒性較大。根據(jù)毒性實驗結(jié)果選取輻照增敏的濃度范圍為24～600μg/mL，發(fā)現(xiàn)在此范圍內(nèi)照射與藥物可協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞增殖；且其抑制作用呈現(xiàn)出輻照劑量和藥物濃度依賴性。但NAPP對SMMC-7721的增敏效果更明顯，范圍更寬，濃度為24～600μmol。

本實驗初步證明在一定濃度范圍內(nèi)NAPP體外對HCC 細(xì)胞其既有抑制肝癌細(xì)胞增敏作用，又具備對肝癌細(xì)胞體外放射增敏的作用，此為治療HCC提供了新的途徑；但其抑制HCC細(xì)胞系的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。雖體外實驗顯示其有很好的應(yīng)用前景，但其最終效果仍需要動物實驗及臨床驗證。

[1]鐘崇一,郭榮平,陳敏山,等.以手術(shù)為主治療108例IIIA期肝細(xì)胞癌的療效分析[J].癌癥,2009,28(3)：274-278.

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[3]張存春,蔡錫海.原卟啉鈉治療膽囊炎和膽石癥100例[J].新藥與臨床,1989,6(2)：101-102.

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[5]梁勇,王克霞,王健.原卟啉鈉抑制丙型肝炎病毒的體外實驗研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2006,33(12)： 2248-2251.