黃芪治療蕁麻疹機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

吳玲霞，甄 莉

（山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院皮膚科，山西太原 030001）

黃芪（Astragacus，AS）是多年生豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根[1]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，以補(bǔ)中益氣、升舉清陽為主要功效，是補(bǔ)氣的要藥[2]。我科運(yùn)用黃芪治療蕁麻疹療效確切，但其作用機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在進(jìn)一步觀察黃芪對(duì)大鼠被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)（PCA）的抑制作用，初步探討其可能的機(jī)制，從而為臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠 35 只，體重（160±20） g，雌雄兼用，購自山西醫(yī)科大學(xué)生理實(shí)驗(yàn)室，分籠飼養(yǎng)于山西醫(yī)科大學(xué)生理實(shí)驗(yàn)室。

1.2 藥物與試劑

卵清蛋白（Sigma公司，批號(hào)A5253），白百破疫苗（武漢生物制品研究所，批號(hào)20080516-4），黃芪（豪州市萬珍中藥飲片廠，批號(hào)081226），富馬酸酮替酚片（海南制藥廠有限公司制藥一廠，批號(hào)081101），伊文思藍(lán)，甲苯胺藍(lán)。

1.3 儀器

低速離心機(jī)SC-3610（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司），721型分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物分組 Wistar大鼠30只，隨機(jī)分為模型組、酮替酚組、黃芪組。模型組:生理鹽水2 ml/只；酮替酚組:0.7 mg/kg；黃芪組:5 g/kg。

1.4.2 大鼠同種PCA模型的構(gòu)建及處理 各組藥物均配制成2 ml溶液，灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7 d，第5天給藥后在大鼠背中線兩側(cè)選取致敏點(diǎn)。取卵蛋白IgE抗血清生理鹽水溶液（1∶1），于皮內(nèi)注射0.1 ml/點(diǎn)。末次給藥后1 h進(jìn)行抗原攻擊:即尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)溶液1 ml（內(nèi)含卵清蛋白30 mg）。30 min后將動(dòng)物處死，分離背部皮膚。

1.4.3 藍(lán)色反應(yīng)斑光密度值測定 將藍(lán)斑剪下，剪碎，加入丙酮-生理鹽水（7∶3）混合液 4 ml，浸泡，離心，取上清液于 721型分光光度計(jì)610 nm處測定光密度值（OD值），取各組的平均光密度值，計(jì)算出抑制率。

抑制率=（1-用藥組平均光密度值/模型組平均光密度值）×100%

1.4.4 病理組織學(xué)變化 標(biāo)本固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，蘇木素-伊紅染色，光鏡下觀察皮膚組織病理學(xué)變化。

1.4.5 脫顆粒肥大細(xì)胞計(jì)數(shù) 組織切片常規(guī)脫蠟，1%甲苯胺藍(lán)染色，0.5%冰醋酸分化，顯微鏡下觀察控制呈色，透明，封片。每張切片選取3個(gè)肥大細(xì)胞分布相對(duì)較多的視野，高倍鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)肥大細(xì)胞中的脫顆粒細(xì)胞數(shù)，計(jì)算脫顆粒百分率及抑制率。

肥大細(xì)胞脫顆粒率（%）=脫顆粒細(xì)胞數(shù)/肥大細(xì)胞總數(shù)×100%

肥大細(xì)胞脫顆粒抑制率（%）=（1-用藥組脫顆粒率/模型組脫顆粒率）×100%

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 病理組織學(xué)變化

光鏡下模型組主要表現(xiàn)為真皮水腫，皮膚毛細(xì)血管及小血管擴(kuò)張充血，淋巴管擴(kuò)張及炎癥細(xì)胞輕度浸潤，水腫在真皮上部最明顯。黃芪組及酮替酚組炎癥程度均有改善。

2.2 黃芪對(duì)大鼠PCA的抑制作用（表1）

由表1可知，黃芪能夠抑制大鼠同種PCA，與酮替酚比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 黃芪對(duì)大鼠PCA OD值的影響（±s）

表1 黃芪對(duì)大鼠PCA OD值的影響（±s）

與模型組比較，*P＜0.05

劑量（mg/kg 或 g/kg） 抑制率（%）正常組模型組酮替酚組黃芪組組別 只數(shù)1010101000-00.75 OD值0.051±0.0210.340±0.0320.101±0.034*0.203±0.047*70.2940.29

2.3 黃芪對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒的影響（表2）

正常的肥大細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，圓形，顯藍(lán)色，邊緣光滑，胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大的紫紅色顆粒。模型組肥大細(xì)胞腫脹、變形，邊緣不齊，胞膜破裂，顆粒脫出。由表2可知，與模型組比較，酮替酚組與黃芪組肥大細(xì)胞脫顆粒數(shù)明顯減少（P＜0.05），黃芪組與酮替酚組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 黃芪對(duì)大鼠皮膚組織肥大細(xì)胞脫顆粒的影響（±s）

表2 黃芪對(duì)大鼠皮膚組織肥大細(xì)胞脫顆粒的影響（±s）

與模型組比較，*P＜0.05

劑量（mg/kg 或 g/kg） 抑制率（%）組別 只數(shù)10101010正常組模型組酮替酚組黃芪組---00.710脫顆粒率（%）11.20±3.6562.80±4.3419.70±4.1630.70±3.8968.63*51.11*

3 討論

蕁麻疹是由于皮膚黏膜小血管擴(kuò)張及通透性增加而出現(xiàn)的一種局限性的水腫反應(yīng)，15%～20%的人一生中至少發(fā)作一次[3]，且易反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響了患者的身心健康。蕁麻疹的病因復(fù)雜，約3/4的患者找不到原因，故很難達(dá)到病因治療。中醫(yī)藥治療蕁麻疹的療效越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的充分肯定，但目前文獻(xiàn)報(bào)道大多限于臨床經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，而在機(jī)制闡述方面尚需進(jìn)一步發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)通過大鼠同種被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，證明黃芪對(duì)蕁麻疹有抑制作用。

蕁麻疹的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，目前主要分為免疫性和非免疫性。免疫機(jī)制多為Ⅰ型超敏反應(yīng)。Ⅰ型超敏反應(yīng)的基本機(jī)制為:變應(yīng)原進(jìn)入機(jī)體后，即可誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體，IgE抗體與MC或（和）嗜堿粒細(xì)胞等靶細(xì)胞結(jié)合，使機(jī)體處于致敏狀態(tài)。相同的抗原再次進(jìn)入機(jī)體，與已結(jié)合在靶細(xì)胞上的IgE發(fā)生特異性橋連，促使肥大細(xì)胞脫顆粒釋放組胺等化學(xué)介質(zhì)[4]，引起毛細(xì)血管擴(kuò)張、血管通透性增加、平滑肌收縮、腺體分泌增加，產(chǎn)生一系列臨床癥狀。非免疫機(jī)制是一些物質(zhì)促使補(bǔ)體激活或直接刺激肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放介質(zhì)。最近的實(shí)驗(yàn)與臨床研究表明，該機(jī)制還可能涉及特異性抗體和T細(xì)胞[5-7]。無論免疫因素或非免疫因素，肥大細(xì)胞是蕁麻疹發(fā)病過程中的主要效應(yīng)細(xì)胞，其活化脫顆粒釋放血管活性介質(zhì)是蕁麻疹發(fā)病的中心環(huán)節(jié)[8]。故通過修飾肥大細(xì)胞的生物學(xué)作用來緩和變態(tài)反應(yīng)性疾病是目前變態(tài)反應(yīng)性疾病的研究熱點(diǎn)之一。酮替酚是臨床上公認(rèn)的介質(zhì)釋放抑制劑，能穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜，抑制肥大細(xì)胞脫顆粒。以酮替酚作為陽性對(duì)照組，通過大鼠皮膚肥大細(xì)胞脫顆粒實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):黃芪可明顯減少由卵蛋白被動(dòng)致敏的大鼠皮膚組織肥大細(xì)胞脫顆粒，所用劑量的作用效果較酮替酚弱。本實(shí)驗(yàn)論證了黃芪具有穩(wěn)定肥大細(xì)胞的作用，可以通過減少被動(dòng)致敏的肥大細(xì)胞脫顆粒而發(fā)揮抗Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用。

綜上所述，黃芪治療蕁麻疹的主要作用機(jī)制可能是穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜，抑制肥大細(xì)胞脫顆粒釋放炎癥介質(zhì)，為該藥的臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)及良好的應(yīng)用前景。

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