蜂膠中總黃酮的含量測定

李彩霞，班桂榮，董 玉

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院附屬人民醫(yī)院藥劑科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020; 2.內(nèi)蒙古錫林郭勒盟白旗醫(yī)院，內(nèi)蒙古錫林郭勒 013800; 3.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059)

蜂膠(propolis)是蜜蜂采集植物芽孢和樹脂，并混入蜂蠟等自身分泌物而形成的一種棕色黏性固體物質(zhì)，其中含蜂膠(55%)、蜂蠟(30%)、花粉和芳香油(15%)及少量雜質(zhì)[1]。目前蜂膠產(chǎn)品多為蜂膠的醇提取物，其醇提取物中的黃酮類、酚類具有生理和藥理活性。臨床證明，黃酮和酚類具有抗菌、抗癌、促進(jìn)組織再生和提高肌體免疫力等功效[2-3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，蜂膠具有抗病毒、抗菌消炎、抗腫瘤、抗氧化、調(diào)血脂、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等多種生物活性作用[4]，在藥品、保健品及化妝品等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。蜂膠總黃酮的含量已成為判定蜂膠產(chǎn)品質(zhì)量的標(biāo)志性物質(zhì)之一。筆者以蘆丁為對照品[5-6]，采用紫外分光光度法測定蜂膠醇提物中總黃酮含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

752N型紫外分光光度計，電子分析天平。蜂膠(市購);蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所);95%乙醇(市購)，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

精密稱取蘆丁對照品適量，加無水甲醇制備成200 μg/mL的對照品溶液。稱取蜂膠原藥材150 g，加95%乙醇1 500 mL，加熱回流2 h，濾過，殘渣再加熱回流2 h，合并濾液，回收溶劑;精密吸取上述溶液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加95%乙醇稀釋至刻度;再從此液中精密吸取10 mL，稀釋至25 mL，即得供試品溶液。

2.2 測定波長選擇

采用Al(NO3)3-NaNO2-NaOH顯色法[7-8]，精密吸取蘆丁對照品溶液2 mL，蜂膠供試品溶液1 mL，蜂膠膠囊供試品溶液5 mL，分別加入5%NaNO21.0 mL，放置6 min，然后加入10%Al(NO3)31.0 mL，混勻，放置 6 min，再加入 10%NaOH 10 mL，用水稀釋至25 mL，放置15 min。在200～800 nm波長范圍內(nèi)掃描測定吸收光譜。用上述方法顯色后，蘆丁對照品、樣品的最大吸收波長基本一致，均在525～530 nm范圍內(nèi)，且重現(xiàn)性好。故選擇在528 nm波長處測定蜂膠中總黃酮含量。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取蘆丁對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置25 mL量瓶中，分別加入NaNO21.0 mL，放置6 min，然后加入10%Al(NO3)31.0 mL，混勻，放置6 min，再加入10%NaOH 10 mL，用水稀釋至25 mL，放置15 min。在528 nm波長處測定其吸光度。以蘆丁對照品質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=8.312 4X+0.021 7，r=0.9996(n=5)。結(jié)果表明，蘆丁質(zhì)量濃度在 7.952～39.76 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取蜂膠醇提物供試品溶液1.0 mL，蜂膠膠囊供試品溶液5.0 mL，依法連續(xù)6次測定吸光度。結(jié)果的 RSD分別為2.18%和1.63%(n=6)，表明該方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取蜂膠醇提物供試品溶液1.0 mL和膠囊供試品溶液 5.0 mL，分別于配置溶液后 0，5，10，15，25，30 min 時依法測定吸光度。結(jié)果 RSD分別為2.95%和2.89%(n=6)，表明蜂膠醇提物和膠囊供試品溶液分別在25 min和30 min內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:精密吸取蜂膠醇提物供試品溶液1.0 mL，共6份，依法測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量。結(jié)果平均含量為76.63μg，RSD=1.73%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:精密吸取蜂膠醇提物供試品溶液0.5mL各6份，置25 mL量瓶中，分別加入質(zhì)量濃度為38.20 μg/mL的蘆丁對照品溶液1 mL，然后加95%乙醇稀釋至刻度。依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出蘆丁的含量，并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 蘆丁加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

精密吸取蜂膠醇提物樣品各1.0 mL，置10 mL量瓶中，均用95%乙醇稀釋至刻度;再從此樣品溶液中吸取10 mL，稀釋至25 mL，各3份。依法測定其吸光度，并計算樣品中的總黃酮含量，結(jié)果蜂膠醇提取物中總黃酮平均含量為11.619%，RSD=0.53%(n=3)。

3 討論

天然蜂膠中絕大部分有效成分能很好地溶于乙醇溶液，本試驗用95%乙醇通過加熱回流提取蜂膠，所得制劑在室溫下有效成分的溶解性不會有明顯的改變。

蘆丁的甲醇溶液與蜂膠的乙醇溶液在525～530 nm波長處有共同的最大吸收峰，且溶液質(zhì)量濃度與吸光度具有良好的線性關(guān)系，故以528 nm波長測定蜂膠中總黃酮含量的方法可行。以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定蜂膠醇提取物中總黃酮含量，其操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，精密度、重現(xiàn)性好，可以作為蜂膠質(zhì)量檢測的一種方法。

[1]王殆節(jié).蜂產(chǎn)品學(xué)[M].北京:北京農(nóng)業(yè)出版社，1994:5.

[2]王宗偉，黃兆勝.蜂膠的藥理作用[J].國外醫(yī)藥·植物藥分冊，1997，12(4):151-153.

[3]張 悅，韓銀淑，王麗敏.蜂膠——21世紀(jì)的新藥源[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，21(4):462.

[4]胡福良，玄紅專.蜂膠的生物學(xué)活性及毒性和過敏反應(yīng)[J].科技通報，2003，19(2):166-169.

[5]曹 瑤，凌 姬.蜂膠中黃酮類化合物含量測定方法的改進(jìn)[J].蜂膠雜志，1997(12):3.

[6]賈茹冰.咳特靈膠囊中小榕樹膏總黃酮的含量測定[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，17(4):65-66.

[7]黃永林，趙志國，文永新.不同部位艾那香中總黃酮的含量測定[J].廣西植物，2006，26(4):453-455.

[8]黃永林，阮 俊，文永新，等.不同部位紫玉盤總黃酮的含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2006，17(10):1 900-1 901.