黃桂顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

牛獲山 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)（150025） 吳悅濤 黑龍江省呼蘭區(qū)中醫(yī)醫(yī)院（150500）韓 雪 哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠（150088） 劉 穎 北京新創(chuàng)生物工程有限公司（102209）

黃桂顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

牛獲山 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)（150025） 吳悅濤 黑龍江省呼蘭區(qū)中醫(yī)醫(yī)院（150500）
韓 雪 哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠（150088） 劉 穎 北京新創(chuàng)生物工程有限公司（102209）

目的 建立黃桂顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用TLC對(duì)芍藥苷、桂皮醛進(jìn)行鑒別，采用HPLC測(cè)定黃芪甲苷的含量。結(jié)果 薄層色譜鑒別分離度好，專屬性強(qiáng)；黃芪甲苷對(duì)照品在125～1 000 ng呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為98.9 %，RSD 為1.37 %。結(jié)論 該法簡(jiǎn)單方便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于黃桂顆粒的質(zhì)量控制。

質(zhì)量控制；黃芪甲苷；芍藥苷；桂皮醛；高效液相色譜

黃桂顆粒是由傳統(tǒng)經(jīng)方黃芪桂枝五物湯經(jīng)現(xiàn)代工藝提取改良而成。黃芪桂枝五物湯出自《金匱要略》，由黃芪、桂枝、白芍、大棗和生姜組成，具有益氣溫經(jīng)，合營(yíng)通痹之功效。早期用于治療血痹證，癥見(jiàn)肢體麻木，肌肉關(guān)節(jié)酸痛，中風(fēng)后半生不遂等癥。現(xiàn)代多用于末梢神經(jīng)炎，原發(fā)性低血壓，產(chǎn)后身痛等癥。還可用于雷諾氏病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肩周炎、慢性滑膜炎等證屬營(yíng)衛(wèi)不足，寒克血脈者。為更好的控制制劑質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC，TLC法對(duì)其進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀；510 型泵；490E型多功能紫外檢測(cè)器；745 型數(shù)據(jù)處理儀；80-2型離心沉淀器：上海手術(shù)器械廠。

1.2 試藥與試劑 對(duì)照品：桂皮醛、芍藥甙、黃芪甲甙對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；樣品：黃桂顆粒（自制，批號(hào)：090803，090804，090805）；試劑：乙腈為色譜純，甲醇、正丁醇、乙醚均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 芍藥苷的薄層色譜鑒別 取本品5g，加水20ml溶解，用乙醚提取3次，每次30ml，棄去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40ml，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2005年版一部附錄Ⅵb）試驗(yàn)。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠g薄層板上，以氯仿－醋酸乙酯－甲醇－甲酸（40:5:10:0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。2.1.2 桂皮醛的薄層色譜鑒別 取本品5g，置于離心管中，加10ml石油醚(60～90℃)，輕輕振搖1min，離心2min(2 500r/min)，取石油醚層作為供試品溶液。另取桂皮醛對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17:3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 YWG C18柱(3.9mm×250mm，10μm)，流動(dòng)相為乙腈-水（1:2.3），流速為 1.1ml/ min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 203nm，靈敏度為 0.08AUFS。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含50μg的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品適量研細(xì)，精密稱取5g，至于索氏提取器中，加甲醇適量，加熱回流1h，甲醇提取液減壓濃縮至干，殘?jiān)?0ml水溶解后，用30ml乙醚洗滌，取水層加水飽和正丁醇萃取3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加40ml氨試液洗滌，取正丁醇層蒸干，殘?jiān)?0ml甲醇定容，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品5.10mg，以甲醇溶解并定容于50ml 容量瓶中。分別吸取此溶液2.5，5，10，15ml，用甲醇稀釋并定容于20mL 容量瓶中，分別精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度及峰面積的對(duì)數(shù)求回歸方程為：Y=10 102.89 X-211.67，r=0.999 2，線性范圍為 125～1000ng。

2.2.5 專屬性試驗(yàn) 取缺少黃芪的其它藥材，按照制法制備成陰性品，再按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液各10 μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果為供試品溶液在與對(duì)照品溶液相同位置的地方出峰，且分離效果較好，陰性樣品溶液無(wú)干擾。見(jiàn)圖1、2、3。2.2.6 精密度試驗(yàn) 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品5.00mg，用甲醇溶解并定容于100ml容量瓶中，吸取10μl 進(jìn)樣，連續(xù)6次，測(cè)定峰面積，其RSD 為0.98 %。

圖1 對(duì)照品HPLC色譜

圖2 供試品HPLC色譜

圖3 陰性樣品HPLC色譜

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣10μl，測(cè)定黃芪甲苷峰面積，其RSD為1.02%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，測(cè)定其含量。結(jié)果平均含量為0.15mg／g，RSD為0.74%。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量（0.15mg／g）的黃桂顆粒6 份，每份2.50g，分別加入黃芪甲苷對(duì)照品0.375mg，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，按上述方法測(cè)定含量，測(cè)定回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2.10 樣品含量測(cè)定 取090803，090804，090805 3批供試品，分別按對(duì)照品溶液、供試品溶液制備方法制備對(duì)照品溶液及供試品溶液，并按上述色譜條件與系統(tǒng)適用性、測(cè)定法測(cè)定樣品中黃芪甲苷含量，結(jié)果分別為0.14、0.15、0.14 mg/g。

表1 黃芪甲苷加樣回收率

[1] 何娟,何秀英.黃芪四物湯顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2009,16(3):217.

[2] 杜迎翔.薄層色譜法分離鑒定復(fù)方葛根合劑中桂皮醛、芍藥甙和甘草次酸[J].化工時(shí)刻,2000,7:30.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄X Ⅶ.

[4] 徐玖環(huán),徐秀麗,米振清.高效渡色譜法制定黃芪精中黃芪甲苷含量[J].中國(guó)藥事,2002,11(15):701.

Quality Control of Huanggui Granula

Niu Huoshan Wu yuetao Han Xue Liu Ying

Objective To establish a quality standard for Huanggui granula. Methed Adopting TLC method to make a qualitative determination of peony glucoside and cinnamic aldehyde and using HPLC method to determine the content of astragaloside in Radix scutellariae. Result TLC has a high identification and separating degree，strong specificity. The reference substance of astragaloside has a good linear relationship in 125ng ～ 1000ng range . The average recovery is 98.9 %，RSD=1.37 %. Conclusion The method is proved to be simple and specialized with a good reproductivity and can be used to control the quality of Huanggui granula.

Quality control；Astragaloside；Peony glucoside；Cinnamic aldehyde；HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.24.010

1672-2779（2010）-24-0016-02

2010-09-29）