HKC細胞損傷前后對草酸鈣晶體吞噬能力的差異

談 金 鄧穗平 歐陽健明

(暨南大學生物礦化與結石病防治研究所，暨南大學化學系,廣州 510632)

HKC細胞損傷前后對草酸鈣晶體吞噬能力的差異

談 金 鄧穗平 歐陽健明＊

(暨南大學生物礦化與結石病防治研究所，暨南大學化學系,廣州 510632)

采用人類腎臟近端小管上皮細胞系(HKC)建立氧化性損傷模型，研究損傷前后HKC調(diào)控草酸鈣(CaOxa)結晶的差異。采用CCK-8法檢測HKC的細胞活性；利用激光共聚焦顯微鏡觀察HKC損傷后表達的晶體粘附分子骨橋蛋白(OPN)；采用倒置顯微鏡觀察HKC的形態(tài)變化；采用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察HKC微結構及其誘導的晶體；采用X射線衍射分析(XRD)表征晶體的組分。在CaOxa過飽和溶液中，正常HKC主要誘導形成二水草酸鈣(COD)晶體，而損傷HKC則同時誘導了COD和一水草酸鈣(COM)晶體。正常HKC對COD晶體有較強的吞噬能力，而損傷HKC的這種能力較弱；HKC損傷后表達OPN，促進CaOxa晶體的成核和聚集，從而增加了腎結石形成的危險性。

草酸鈣；細胞調(diào)控；腎結石；生物礦化

對腎結石礦物與腎小管上皮細胞之間相互作用的研究已經(jīng)較為廣泛[1-2]。盡管普遍認為晶體對腎小管上皮細胞具有損傷作用，但是也有一些研究結果表明晶體對腎小管上皮細胞影響不大[3]。

McMartin等[1]報導，一水草酸鈣(COM)晶體可引起人近端腎小管細胞、大鼠近端腎小管細胞的壞死。Schepers等[3]認為，COM晶體對豬和犬的近端腎小管細胞(LLC-PK1和MDCK-Ⅱ)具有毒害作用，但是對鼠和犬的集合管細胞 (RCCD1與MDCK-Ⅰ)沒有毒害作用。近端腎小管細胞能迅速粘附晶體，隨后內(nèi)吞晶體，1 d后內(nèi)吞晶體的細胞從細胞層中脫落；但是，集合管細胞與COM晶體共同孵育一段時間后，既沒有粘附也不會內(nèi)吞COM晶體，集合管細胞的形貌也沒有發(fā)生改變。上述結果說明，COM晶體對腎臟中不同部位或不同類型腎小管細胞的作用不同。

例如，對于犬腎小管上皮細胞(MDCK)，實際上還可細分為兩種細胞株：MDCK-Ⅰ和MDCK-Ⅱ，這兩種細胞的性質(zhì)互不相同；而在早期的研究中，并沒有對此加以區(qū)分，因此導致以MDCK作為研究對象所得到的結論不一致。Verkoelen等[4]報導，MDCK與COM晶體作用后沒有檢測到細胞的損傷，COM晶體粘附到MDCK后被細胞內(nèi)吞，隨后從細胞層中被除去；而Thongboonkerd等[5]報導，COM晶體能夠損傷MDCK；Khan等[6]亦報導了COM晶體可以損傷MDCK，導致20%～30%的細胞脫落，且部分脫落細胞中內(nèi)吞有晶體。

另外，由于不同的研究小組采用不同類型或不同來源的晶體進行研究，亦導致所得到的結論不一致。例如，Aihara等[2]研究了不同濃度的磷酸鈣與LLC-PK1和MDCK-Ⅰ的相互作用，發(fā)現(xiàn)兩類細胞與磷酸鈣晶體接觸后都產(chǎn)生細胞損傷現(xiàn)象，從而促進了晶體的粘附和結石的發(fā)展。Escobar等[7]發(fā)現(xiàn)，來自腎結石中的草酸鈣(CaOxa)晶體、磷酸鈣晶體對大鼠腎小管上皮細胞(NRK-52E)的損傷程度較小，而人工合成的上述晶體對細胞的損傷程度較大。

此外，在以往的文獻里，大多數(shù)情況是采用預先制備好的COM種晶與細胞作用，對二水草酸鈣(COD)晶種與細胞作用的研究很少，目前僅見Lieske等[8]的報道，他們采用非洲綠猴腎上皮細胞(BSC-1)與COD晶體相互作用，發(fā)現(xiàn)COD晶體的(100)晶面能夠選擇地快速粘附在BSC-1細胞上。

因此，研究細胞與尿石晶體的相互作用時，必須確定細胞的種類、晶體類型、晶體來源、以及體系中CaOxa溶液的過飽和度等。

HKC是分化良好的人類腎臟近端小管上皮細胞，存活時間長、易于傳代培養(yǎng)，是研究腎毒性的一種有重要價值的體外細胞模型。HKC細胞具有腎小管上皮細胞特有的結構和功能，能表達近端腎小管特異性標志酶如堿性磷酸酶 (AP)、γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)及上皮細胞分化的標志物細胞角蛋白。

基于此，本文研究了HKC與CaOxa飽和溶液的相互作用，觀察了CaOxa晶體在正常HKC與損傷HKC上的成核、生長以及與HKC的相互作用，期望為進一步了解結石形成的細胞機制提供新的啟示。

1 實驗部分

1.1 試 劑

人類近端腎小管上皮細胞系(HKC)來自Johns Hopkins大學醫(yī)學院Racusen博士，由第二軍醫(yī)大學上海長征醫(yī)院腎內(nèi)科梅長林教授惠贈。培養(yǎng)液DMEM-F12(Gibco，美國)，新生牛血清(Gibco，新西蘭)，青霉素(華北制藥股份有限公司)，鏈霉素(大連美羅大藥廠)，細胞増生分析試劑盒(CCK-8)(日本同仁化學研究所)，細胞培養(yǎng)板(Iwaki，日本)。丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。其它試劑如 NaCl、KCl、Na2HPO4·2H2O、KH2PO4、NaHCO3均為分析純。

在D-Hanks平衡液中制備草酸鉀儲液(20 mmol·L-1)、氯化鈣儲液 (20 mmol·L-1)，pH 值調(diào)至7.4。使用前配制 cCa2+=c=0.3 mmol·L-1的CaOxa 飽和溶液。

1.2 儀 器

XL-30型環(huán)境掃描電子顯微鏡 (ESEM,Philips公司)，樣品噴金處理，測量電壓為20 kV。酶標儀(Safire2,Tecan，瑞士)，在酶標儀上測量吸光度值，測試波長為 450 nm(檢測 CCK-8)或者 532 nm(檢測MDA)。日本理學D/max 2400(Rigaku)X射線衍射儀，Cu靶，Kα 射線，石墨單色器，40 kV，30 mA，掃描范圍5°～60°。倒置顯微鏡為倒置熒光顯微鏡(IX51)(日本奧林巴斯公司)。激光共聚焦熒光顯微鏡(510 META DUO SCAN，CARL ZEISS，德國)。

1.3 HKC培養(yǎng)

HKC用含10%新生小牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)液培養(yǎng)，同時加入 100 U·mL-1青霉素和 100 μg·mL-1鏈霉素。培養(yǎng)條件為37℃、5%CO2、飽和濕度。HKC傳代采用胰蛋白酶消化法。細胞達80%融合后，吸除培養(yǎng)液，用D-Hanks平衡液洗滌HKC 2次，加入0.25%胰酶消化液，置于37℃培養(yǎng)箱中3～5 min后，在倒置顯微鏡下觀察HKC的消化程度，當細胞變圓，細胞之間出現(xiàn)孔隙且不再連接成片，表明此時細胞消化適度，加入含10%新生小牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)液終止消化，并吹打細胞脫離瓶壁形成單細胞懸液；離心3 min(1 000 r·min-1)，棄去上清液，再加入含10%新生牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)液，吹打細胞形成單細胞懸液，備用。

1.4 細胞的損傷和損傷程度檢測

(1)損傷HKC的活性檢測：采用CCK-8法檢測HKC的損傷[9]，以細胞活性反映HKC的損傷程度。

按細胞濃度為 1×104cell·mL-1、100 μL·hole-1接種于96孔培養(yǎng)板，加入含10%新生牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)液孵育24 h，改用無血清DMEMF12培養(yǎng)液孵育12 h，使細胞同步化。將HKC分兩組，每組均設3個平行復孔。①對照組：只加入無血清培養(yǎng)液；② 損傷組：加入含有 0.5 mmol·L-1H2O2的無血清培養(yǎng)液，分別作用 HKC 細胞 0、0.5、1、1.5、2 h。然后，兩組細胞改用新鮮的無血清培養(yǎng)液，每孔加入 10 μL的 CCK-8，于 37℃下孵育 4 h后，用酶標儀在450 nm處測量吸光度 (A)，各個條件下的HKC平行測定3個重復孔，求A值的平均值。

(2)HKC損傷前后丙二醛(MDA)含量檢測：按照上面方法損傷細胞后，將細胞懸浮液移入EP管內(nèi)，在4℃離心10 min。取上清液，采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒，用硫代巴比妥酸(TBA)法測量MDA的含量，嚴格按照試劑盒說明書操作，比色法測定。

(3)HKC損傷前后表達的骨橋蛋白(OPN)檢測：將培養(yǎng)瓶中70%～80%融合生長的HKC經(jīng)胰酶消化后，取 1 mL(濃度 1×105cell·mL-1)細胞懸浮液接種于預先鋪有蓋玻片的6孔細胞培養(yǎng)板中，在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng) 24 h后，改用無血清DMEM/F12培養(yǎng)液孵育12 h，使細胞同步化。按照上面方法損傷細胞后，從孔板中取出蓋玻片，用0.01 mol·L-1的 PBS洗 3 次，每次 5 min。4%甲醛/0.1%戊二醛固定 10 min，PBS 洗 3 次(5 min×3)。加入含有羊血清的1%牛血清白蛋白(BSA)封閉液，在37℃條件下孵育20 min。甩掉多余血清，滴加OPN抗體(sc-20788，Santa Cruz)(1∶150)，于 37℃下孵育 1 h，PBS洗3次(5 min×3)。滴加FITC標記羊抗兔IgG抗體(sc-2012，Santa Cruz)(1∶100)，放于暗處，在 37 ℃下孵育30 min，PBS充分沖洗3次(5 min×3)。使用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI) 封閉液(sc-24941，Santa Cruz)封片。對照組以兔血清代替OPN抗體。于激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察并拍攝照片。

1.5 HKC誘導CaOxa晶體生長及晶體的SEM和XRD檢測

按細胞濃度為 1×105cells·mL-1、1000 μL·hole-1接種于12孔培養(yǎng)板內(nèi)，孔板底部預先平鋪有大小合適的蓋玻片。用含10%新生牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)液孵育24 h后，改用無血清DMEM-F12培養(yǎng)液孵育12 h，使細胞同步化。將HKC分為4組，每組均設3個平行復孔。①空白對照組：加入無血清培養(yǎng)液；② H2O2組：每孔加入含 0.5 mmol·L-1H2O2的無血清培養(yǎng)液，作用1 h；③ CaOxa組：加入含0.3 mmol·L-1CaOxa過飽和溶液的無血清培養(yǎng)液，置于37 ℃下分別孵育 0、0.33、3、6、12、24 h； ④ H2O2+CaOxa 組： 加入含 0.5 mmol·L-1H2O2的無血清培養(yǎng)液，37℃下孵育1 h后，吸除培養(yǎng)液，用D-Hanks清洗細胞2次，加入含0.3 mmol·L-1CaOxa過飽和溶液的無血清培養(yǎng)液，置于37℃下分別孵育0、0.33、3、12、24 h。

達到預定的結晶時間后，取出蓋玻片，用DHanks沖洗細胞2次，加入2.5%戊二醛固定細胞2 h，再用1%OsO4對細胞進行后固定，D-Hanks沖洗3次，梯度乙醇(30%、50%、70%、90%、100%)脫水，CO2臨界點干燥，裝樣并將樣品噴鍍包被，在SEM下觀察細胞形態(tài)和晶體生長情況。同時對蓋玻片上的晶體進行XRD檢測，確定晶體的組分。

1.6 統(tǒng)計學方法

2 結果與討論

2.1 H2O2對HKC的損傷及損傷程度檢測

2.1.1 H2O2對 HKC 的損傷及損傷程度檢測

通過檢測H2O2對HKC的增殖抑制作用，來衡量H2O2對HKC的損傷程度，結果如圖1所示。用0.5 mmol·L-1的 H2O2作用細胞 0.5 h 后，細胞的活性為(82.1±3.1)%，表明 HKC 已經(jīng)發(fā)生明顯的損傷(P＜0.05)；作用 1 h 后，細胞活性顯著下降到(45.0±0.9)%；增加H2O2作用時間，對HKC的損傷進一步加劇，細胞活性進一步降低；作用2 h后，HKC活性為(35.1±0.6)%(P＜0.05)。

2.1.2 HKC 損傷后的丙二醛含量增加

在生物體內(nèi)，腎上皮細胞在病理情況下通過非酶反應與酶促反應產(chǎn)生大量的氧自由基。而生物膜的主要成分磷脂含有不飽和脂肪酸，氧自由基對這些不飽和脂肪酸中的不飽和鍵具有很高的親和力，從而產(chǎn)生過氧化反應，導致細胞損傷，并因此形成脂質(zhì)過氧化物[10]，如醛基、酮基、羥基、羰基、氫過氧基等，其中醛類所占比例較大。丙二醛(MDA)是細胞脂質(zhì)過氧化反應的終產(chǎn)物，其含量的多少可反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，也間接地反映出細胞受損傷的程度[11]。

表1為 0.5 mmol·L-1H2O2作用于 HKC 不同時間后MDA含量的變化?？梢钥闯觯篐2O2作用HKC細胞 0.5 h 后，MDA 含量從對照組的 (0.38±0.03)μmol·L-1明顯上升到 (0.86±0.06)μmol·L-1，說明H2O2對細胞膜造成了損傷，導致MDA水平上升(P＜0.05)。隨著作用時間增加，MDA含量增加；當作用2 h 時，MDA 含量達到(1.23±0.03)μmol·L-1，表明此時對細胞膜的損傷進一步加劇。

表1 用0.5 mmol·L-1H2O2作用HKC不同時間后細胞釋放的MDA含量變化(±s)Table 1 Content change of MDA released by HKC after exposure to 0.5 mmol·L-1H2O2for different time(±s)

表1 用0.5 mmol·L-1H2O2作用HKC不同時間后細胞釋放的MDA含量變化(±s)Table 1 Content change of MDA released by HKC after exposure to 0.5 mmol·L-1H2O2for different time(±s)

*Data are mean±standard deviation of three independent experiments;*P＜0.05 compared with control without addition of H2O2at 0 h.

Time/h 0 0.5 1 1.5 2 Content of MDA/(μmol·L-1) (0.38±0.03) (0.86±0.06)* (1.063±0.06)* (1.11±0.08)* (1.23±0.03)*

2.1.3 細胞損傷后骨橋蛋白(OPN)分子檢測

HKC損傷后，會表達晶體粘附分子骨橋蛋白(OPN)。圖2為反映HKC損傷前后OPN分子表達量變化的激光共聚焦顯微鏡圖片?？煽闯?，對照組HKC周圍沒有或只有少量的綠色熒光(圖2a)，說明沒有損傷的HKC不表達或只表達少量的OPN分子。

經(jīng) 0.5 mmol·L-1H2O2損傷 0.5 h 后，HKC 周圍出現(xiàn)明顯的綠光熒光 (圖2b)，說明HKC被損傷之后，表達了OPN分子。當損傷時間增加至1.5 h后，綠色熒光強度增強(圖2c)，說明HKC損傷加劇后，導致大量OPN分子的表達。

正常腎上皮細胞表面具有抵抗晶體粘附的性質(zhì)；但當細胞受損傷后，細胞表面的微結構發(fā)生改變，并表達大量帶負電荷的物質(zhì)，如透明質(zhì)酸、膠原蛋白和OPN等[12-13]，這些負電荷的物質(zhì)能夠吸引鈣離子和草酸鈣晶體，是潛在的晶體粘附位點，被稱為晶體粘附物質(zhì)。圖2結果表明，HKC被損傷后，表達了OPN；從其綠色熒光強度可以看出，隨著損傷強度增加，OPN的表達量也增多。

2.2 損傷前后HKC與CaOxa過飽和溶液的作用

2.2.1 損傷前后HKC與CaOxa過飽和溶液作用后的活性變化

經(jīng)0.5 mmol·L-1H2O2損傷1 h后的HKC細胞，其活性為(45.0±0.9)%(圖1)；將此損傷的HKC再用0.3 mmol·L-1CaOxa過飽和溶液孵育后，其活性繼續(xù)降低，如圖3所示。隨著孵育時間增加到24 h，損傷HKC的活性從剛開始時的(45.0±0.9)%繼續(xù)降低至(33.5±0.6)%。

相比之下，正常HKC用0.3 mmol·L-1CaOxa過飽和溶液孵育后，細胞的活性略有增加；如分別孵育3 h和24 h后，其活性分別為 (105.61.2)%和(114.12.1)%(圖3)，說明細胞仍在繼續(xù)生長。

2.2.2 正常HKC對COD晶體的內(nèi)吞作用

圖4為正常 HKC與 0.3 mmol·L-1的 CaOxa過飽和溶液孵育不同時間后誘導生成的晶體的SEM。可以看出，孵育0.33 h后，CaOxa晶體就已經(jīng)在HKC表面成核生長(圖4a)，這些晶體具有COD的典型形貌四角雙錐形。

倒置顯微鏡觀察表明，孵育3 h后，HKC開始覆蓋在其誘導的COD晶體表面上，表明此時HKC已經(jīng)開始內(nèi)吞晶體。SEM進一步顯示，被HKC覆蓋后的COD晶體，會在HKC的不斷作用下逐漸分解成尺寸較小的微晶(圖4b中箭頭所示)；且隨著孵育時間的增加，越來越多的COD晶體被分解形成尺寸更小的微晶(圖4c、4d中箭頭所示)。在此過程中，正常HKC的活性變化不大。該結果與Lieske等[8]研究BSC-1細胞與COD晶體相互作用的結果相似。

盡管有一些文獻報導[14-15]，CaOxa晶體對培養(yǎng)的腎小管上皮細胞產(chǎn)生損傷作用。但是，在這些文獻里采用的CaOxa晶體均為COM晶體。COM晶體與COD晶體對腎細胞的病理學行為不同，COD晶體是腎結石成分的另外一種礦物相，其含量比COM晶體少[16]；加上HKC還可以內(nèi)吞一部分COD晶體，因此，總體來看，COD晶體對腎細胞生長的影響不大。即：相比COM晶體，在尿液中形成較多的COD晶體被認為有利于減少形成結石的風險[17]。

正常HKC能夠抵御由一定量CaOxa晶體所造成的損傷，這可能是由于正常HKC誘導生成的主要為COD晶體、且晶體尺寸較小、數(shù)量較少所致。Lieske等[18-20]報導，COM晶體在15 s內(nèi)即可粘附在BSC-1細胞上面，隨后被BSC-1細胞內(nèi)吞，且被內(nèi)吞的COM晶體沒有對BSC-1細胞的生長產(chǎn)生不利影響，反而促進BSC-1細胞的增殖。

一般認為，與遠端腎小管上皮細胞 (如MDCKⅠ)和集合管細胞(如RCCD1)相比，近端腎小管上皮細胞(如LLC-PK1)對粘附在其表面的晶體的內(nèi)吞能力較強，且是一種主動攝取的過程，因此，沒有觀察到MDCKⅠ與RCCD1對晶體的內(nèi)吞現(xiàn)象。這是腎臟上皮細胞的一種保護性機制，可以除去細胞表面潛在的晶體成核和生長位點。從圖4c和圖4d可以看到，COD晶體被HKC內(nèi)吞，這正是HKC對腎結石形成的防御機制[21]。

2.3 損傷的HKC對COD晶體的內(nèi)吞能力減弱

損傷的HKC與0.3 mmol·L-1的CaOxa過飽和溶液孵育不同時間后，其誘導生成的晶體形貌如圖5所示。可以看出，在0.33 h內(nèi)，便有較多的草酸鈣晶體在損傷的HKC表面形成(圖5a)；但一直孵育到24 h(圖5d)，均很少發(fā)現(xiàn)損傷HKC內(nèi)吞晶體的現(xiàn)象。這與細胞內(nèi)蛋白激酶的活性有關。蛋白激酶在細胞的內(nèi)吞作用中起著重要調(diào)控作用[22]，細胞受到損傷后，蛋白激酶的活性降低，從而減弱了細胞的內(nèi)吞作用。

在損傷HKC誘導生成的CaOxa晶體中，不但形成聚集的晶體簇，而且COM晶體的比例顯著增加。圖6為損傷HKC誘導生成的CaOxa晶體的XRD圖?？梢钥吹?，XRD圖中同時出現(xiàn)了歸屬于COM和COD晶體的衍射峰，且COM晶體的衍射峰強度高于COD晶體，圖中晶面間距d=0.618、0.309和0.224 nm分別歸屬于COD晶體的 (200)、(400)和(213)晶面，d=0.593、0.365和0.297 nm分別歸屬于COM 的(101)、(020)和(202)晶面。

從圖2可以看出，HKC受損傷后，在其表面表達OPN。OPN是一種帶負電的分泌型的糖基化磷酸化蛋白，廣泛分布于多種組織和細胞中，其相對分子質(zhì)量約為44 kDa[23]，含有約300個氨基酸殘基，其中酸性氨基酸如天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基和絲氨酸殘基約占總氨基酸量的一半。因此，OPN分子中含有豐富的酸性結構域，這些酸性結構域能與游離的Ca2+相結合，并可以粘附表面帶正電荷的COM晶體，促進晶體在細胞表面的滯留[24-25]。因此，細胞受到損傷后，細胞吞噬晶體的能力顯著減弱(圖5)，導致大量晶體滯留在腎小管內(nèi)，引起晶體的聚集，甚至堵塞腎小管。

相比表面具有較高正電荷密度的COM晶體，COD晶體表面電荷密度很低，COD表面負電荷密度較高的部位僅處在其錐體的2個頂端[26-27]，在這兩個頂端上由于草酸根的突出而帶負電。損傷的HKC表面由于表達了OPN等酸性分子而帶負電，因此，COD晶體與損傷HKC的作用較弱。

上述結果提示，通過研究不同晶相的CaOxa晶體與不同性質(zhì)的細胞作用，有助于闡明腎石病復雜的病理學過程。

3 結 論

以氧化性損傷的HKC體系為模型，研究了CaOxa過飽和溶液與HKC的相互作用。結果表明，CaOxa晶體在正常HKC和受損傷HKC表面的成核和聚集行為存在差異。正常HKC主要誘導COD晶體形成，并對COD晶體的內(nèi)吞能力較強，而損傷HKC的內(nèi)吞能力減弱。損傷HKC促進COM的成核和聚集，因此，HKC受損傷后，增加了草酸鈣結石形成的危險性。

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Difference of Endocytosis to Calcium Oxalate Crystals by HKC Cells before and after Injury

TAN Jin DENG Sui-Ping OUYANG Jian-Ming＊
(Institute of Biomineralization and Lithiasis Research,Jinan University,Guangzhou 510632)

An oxidative injury model of human kidney proximal tubule epithelial cell line (HKC)was used to investigate the difference of crystallization of calcium oxalate(CaOxa)modulated by HKC before and after injury.Cell viability was examined by using Cell Counting Kit (CCK-8)assay;the change of expression of crystal adherent molecule osteopontin (OPN)on HKC after injury was observed by laser confocal microscope;the morphological change of HKC was observed by inverted microscope;the microstructure of HKC and the crystals induced by HKC were observed by means of scanning electron microscopy (SEM);the crystal component was characterized by X-ray diffraction (XRD).Calcium oxalate dihydrate (COD)crystals were mainly induced from CaOxa supersaturated solution by normal HKC,while COD crystals and calcium oxalate monohydrate(COM)crystals were simultaneously induced by injured HKC.The endocytosis of normal HKC to COD crystals was strong,but weak for injured HKC.After expression of OPN,the injured HKC can promote nucleation and aggregation of CaOxa crystals.It increases the risk of urolithiasis formation.

calcium oxalate;cell modulation;kidney stones;biomineralization

R69；R329；O614.23+1

A

1001-4861(2010)12-2131-07

2010-07-12。收修改稿日期：2010-08-17。

國家自然科學基金資助項目(No.20971057)。

＊通訊聯(lián)系人。E-mail：toyjm@jnu.edu.cn，Tel：020-85223353

談 金，男，26歲，碩士研究生；研究方向：生物無機化學。