高效液相色譜法同時測定氨咖黃敏膠囊中對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的含量

陳玉璞，張 毅，董智攀

（焦作市食品藥品檢驗所，河南焦作 454000）

氨咖黃敏膠囊為感冒類非處方藥品，適用于緩解普通感冒及流行性感冒引起的發(fā)熱、頭痛、四肢酸痛、流鼻涕、鼻塞、咽痛等疾病，臨床應(yīng)用廣泛，生產(chǎn)廠家眾多。本實驗建立同時測定對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏兩種成分含量的高效液相色譜法，為控制藥品質(zhì)量，提供了一種簡單、靈敏、快速準(zhǔn)確的檢測方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UVIKONXL型紫外分光光度計；AE-240雙量程電子天平（瑞士梅特勒公司）；島津高效液相色譜儀（LC-10ADVP泵、SPD-10AVP紫外檢測器、CS-Light Potrun Analysis數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)）。

1.2 試藥

對乙酰氨基酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100018-200408，供HPLC含量測定、比色檢查用）；馬來酸氯苯那敏對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號：100047-200606，供含量測定用）；氨咖黃敏膠囊（河南天工藥業(yè)有限公司，批號：090505；河南興源制藥有限公司，批號：0903390；鄭州康立制藥有限公司，批號：090501）；三乙胺為分析純，水為純凈水，甲醇為一級色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-Paok CLC ODS C18（6.0 mm×200 mm，5 μm）色譜柱；流動相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液-三乙胺（10∶90∶0.02）（用磷酸調(diào)節(jié) pH 至 3.4）； 檢測波長：215 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：30℃；進樣量：20 μl。

2.2 檢測波長的選擇

取對照品溶液，在180～300 nm的波長范圍內(nèi)進行掃描。結(jié)果在215 nm的波長處有最大吸收，故選用215 nm為檢測波長。

2.3 對照品溶液的制備

取105℃干燥3 h的馬來酸氯苯那敏對照品0.026 0 g，置100 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。另精密稱取對乙酰氨基酚對照品0.115 1 g，置50 ml量瓶中，同時精密加入馬來酸氯苯那敏對照品溶液2 ml，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 供試品溶液的制備

取本品10粒，除去膠囊后，精密稱取細粉適量（約相當(dāng)于對乙酰氨基酚120 mg），置50 ml量瓶中，用流動相充分溶解，并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.5 陰性對照試驗

按氨咖黃敏膠囊的處方工藝，不加對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏，制成陰性對照品，同“2.4”項下方法制成陰性溶液。在選定的色譜條件下，進樣20 μl，從色譜上看出，在該色譜條件下，在保留時間（tR）4.6 min與 18.9 min處，供試品和對照品溶液中出現(xiàn)兩個色譜峰，而陰性對照溶液未見此色譜峰，表明在本實驗條件下，對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏的測定不受其他雜質(zhì)峰干擾。見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察

精密量取對照品溶液 5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 ml分別置于25 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。分別準(zhǔn)確進樣20 μl，按色譜條件測定其峰面積，以對照品進樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，計算回歸方程，結(jié)果表明對乙酰氨基酚在0.092～4.604 μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為 Y=40 999.75X+2 258 190（r=0.999 8）；馬來酸氯苯那敏在4.160～20.800 μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為 Y=50 007.36X+89.20（r=0.999 7）。

2.7 精密度試驗

取濃度為0.92 mg/ml的對乙酰氨基酚對照品與濃度為4.16 μg/ml的馬來酸氯苯那敏對照品混合溶液重復(fù)進樣5次，分別測定峰面積，結(jié)果顯示，對乙酰氨基酚RSD=0.83%，馬來酸氯苯那敏RSD=0.62%，結(jié)果表明該法精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取精密度試驗項下的對照品溶液每間隔1 h進樣1次，共8次，結(jié)果對乙酰氨基酚RSD=1.57%，馬來酸氯苯那敏RSD=1.72%。結(jié)果表明樣品在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗

取樣品（批號：090505，河南省天工藥業(yè)有限公司）適量，按“2.4”項下方法制備樣品溶液，依法平行測定6次，結(jié)果對乙酰氨基酚RSD=1.62%；馬來酸氯苯那敏RSD=1.67%。結(jié)果表明該法的重現(xiàn)性較好。

2.10 加樣回收率試驗

取樣品 （批號：090505，河南省天工藥業(yè)有限公司）約0.14 g，共6份，精密稱定，加入對乙酰氨基酚對照品36.8 mg、馬來酸氯苯那敏對照品166.4 μg，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，按色譜條件測定，結(jié)果見表1、2。

表1 對乙酰胺基酚加樣回收率（n=6）Tab.1 Recovery test of paracetamol(n=6)

表2 馬來酸氯苯那敏加樣回收率（n=6）Tab.2 Recovery test of chlorphenamine maleate(n=6)

2.11 樣品含量測定

取3批樣品各10粒，除去膠囊后，各精取細粉適量（約相當(dāng)于對乙酰氨基酚120 mg），分別置于50 ml量瓶中，用流動相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏對照品適量，用流動相制成每毫升中含對乙酰氨基酚1.15 mg/ml和馬來酸氯苯那敏5.20 μg/ml的溶液。分別進樣20 μl，按上述色譜條件，測定色譜峰面積，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果Tab.3 Content determination results of samples

3 討論

氨咖黃敏膠囊，臨床應(yīng)用廣泛，生產(chǎn)廠家眾多，而《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)第三冊》中沒有馬來酸氯苯那敏的含量測定方法，無法保證藥品質(zhì)量；而對乙酰氨基酚的檢測方法為亞硝酸鈉滴定法，終點不易控制，常常誤差偏大。本實驗經(jīng)過對多批次樣品中馬來酸氯苯那敏、對乙酰氨基酚的含量測定表明，該方法簡單、靈敏、準(zhǔn)確，可以控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

從氨咖黃敏膠囊的配方可以看出，對乙酰氨基酚含量遠遠高出馬來酸氯苯那敏的含量，所以進樣量濃度一定要控制好。若濃度過高，則對乙酰氨基酚的峰形易出現(xiàn)平頭峰，無法計算，若濃度過低，則馬來酸氯苯那敏不易檢測到，且誤差偏大。

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