藍(lán)莓等10種果蔬提取物體外抗氧化活性的比較

楊紅澎，蔣與剛，崔玉山，龐偉，盧豪，盧士軍，程義勇

（1軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，天津300050；2天津農(nóng)學(xué)院，天津300384；3天津醫(yī)科大學(xué)，天津300070）

藍(lán)莓等10種果蔬提取物體外抗氧化活性的比較

楊紅澎1,2，蔣與剛1，崔玉山3，龐偉1，盧豪1，盧士軍1，程義勇1

（1軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，天津300050；2天津農(nóng)學(xué)院，天津300384；3天津醫(yī)科大學(xué)，天津300070）

采用鐵離子還原/抗氧化力測定法(ferric reducing/antioxidant power assay,FRAP)、鄰苯三酚法、水楊酸法，比較獼猴桃、龍眼、藍(lán)莓、大棗、南瓜、冬瓜、菠菜、芹菜、苦瓜、木耳10種果蔬提取物的總抗氧化力、清除超氧陰離子(O2-·)及清除羥自由基(·OH)能力。結(jié)果顯示，上述10種果蔬提取物的總抗氧化力按由強到弱的排序依次為：藍(lán)莓＞大棗＞龍眼＞南瓜＞苦瓜＞木耳＞獼猴桃＞芹菜＞菠菜＞冬瓜；清除超氧陰離子(O2-·)的能力依次為：龍眼＞南瓜＞菠菜＞藍(lán)莓＞大棗＞芹菜＞冬瓜＞苦瓜＞木耳＞獼猴桃；清除羥自由基(·OH)的能力依次為：獼猴桃＞藍(lán)莓＞芹菜＞菠菜＞木耳＞大棗＞龍眼＞冬瓜＞苦瓜＞南瓜。

果蔬提取物；總抗氧化力；超氧陰離子自由基；羥基自由基

Abstract:FRAP method,pyrogallol autoxidation method and salicylic acid method were used to determine the antioxidant activities of ten kinds of fruits and vegetables extracts including kiwifruit,longan,blueberry,jujube,pumpkin,wax gourd,spinach,celery,balsam pear and auricularia auricula.The results suggested that the total antioxidant capacity order from strong to weak was as followes：blueberry＞jujube＞longan＞pumpkin＞balsam pear＞auricularia auricula＞kiwifruit＞celery＞spinach＞wax gourd.The scavenging activities on superoxide anion free radical were as followes：longan＞pumpkin＞spinach＞blueberry＞jujube＞celery＞wax gourd＞balsam pear＞auricularia auricula ＞kiwifruit.The scavenging activities on hydroxyl radical were as followes：kiwifruit＞blueberry＞celery＞spinach＞auricularia auricula＞jujube＞longan＞wax gourd＞balsam pear＞pumpkin.

Key words：fruits and vegetables;total antioxidant capacity;superoxide anion free radical;hydroxyl radical

2007年《中國居民膳食指南》推薦多食入蔬菜水果，可增進(jìn)健康[1]。隨著植物化學(xué)成分研究的進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)許多蔬菜水果對自由基有很強的清除作用[2-3]。但由于水果蔬菜的種類較多，成分有所差別，因此，它們對機體抗氧化防御體系功能的影響也有所不同[4]。研究發(fā)現(xiàn)許多水果蔬菜含有許多人體所需的抗氧化物質(zhì),除了眾所周知的VC、VE、類胡蘿卜素以外,還含有豐富的多酚類等物質(zhì),包括類黃酮、花色素等,這些物質(zhì)在體外具有較強的抗氧化活性[4]。本研究選取獼猴桃、龍眼（俗稱桂園）、藍(lán)莓、大棗、南瓜、冬瓜、菠菜、芹菜、苦瓜、木耳等10種常見水果蔬菜提取物為研究材料，分別采用FRAP法、鄰苯三酚法及水楊酸法來比較其總抗氧化能力、清除超氧陰離子自由基(O2-·)能力及清除羥自由基(·OH)能力，為果蔬提取物抗衰老、抗腫瘤等領(lǐng)域的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料

獼猴桃、龍眼（俗稱桂圓）、大棗、南瓜、冬瓜、菠菜、芹菜、苦瓜、木耳：購自天津，藍(lán)莓：購自大連。

1.1.2 主要試劑

三吡啶三吖嗪 (tripyridyl-triazine,TPTZ,Sigma)，F(xiàn)eCl3，F(xiàn)eSO4，無水乙酸鈉，乙酸，鄰苯三酚，水楊酸，過氧化氫均為國產(chǎn)分析純。

1.1.3 主要儀器

UV-8500紫外可見分光光度計：日本島津，AEZ00電子天平：瑞士METTLER公司，HH-W21-600水浴箱：中國東方公司，F(xiàn)D-I冷凍干燥機：美國。

1.2 方法

1.2.1 果蔬提取物的制備

將果實或蔬菜剪碎，在50℃～60℃用75%乙醇加熱回流3 h，重復(fù)提取3次，提取液合并濃縮冷凍干燥備用。

1.2.2 果蔬提取物抗氧化活性的測定

1.2.2.1 總抗氧化能力的測定

采用FRAP法[5-6]。操作步驟：①標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定：取10 μL不同濃度FeSO4溶液，加入1.8 mL的FRAP工作液（pH3.6的醋酸鈉溶液、10 mmol/L的TPTZ甲醇溶液和20 mmol/L的FeCl3溶液按10∶1∶1比例配制），37℃水浴10 min，以醋酸鈉調(diào)零，在593 nm下測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。②分別取10 μL濃度為10 mg/mL上述10種果蔬提取物樣品，處理方法同上，測定吸光度。③根據(jù)FeSO4標(biāo)準(zhǔn)曲線，以1.0 mmol/L FeSO4為標(biāo)準(zhǔn),樣品抗氧化活性以達(dá)到同樣吸光度所需的FeSO4的毫摩爾數(shù)表示。每份樣品重復(fù)測定5次。

1.2.2.2 清除超氧陰離子(O2-·)能力的測定

采用鄰苯三酚法[7]。操作步驟：①分別取10 μL濃度為10mg/mL上述10種果蔬提取物樣品，加入3mLpH為8.2的tris-HCl緩沖液，25℃水浴20 min。②水浴結(jié)束時，各樣品中加入7 mmol/L的鄰苯三酚溶液，反應(yīng)4 min后加入28 μL 10 mol/L的鹽酸終止反應(yīng)，以tris-HCl緩沖液調(diào)零在420 nm處測吸光度值，根據(jù)抑制率判斷樣品對清除的能力。每份樣品重復(fù)測定5次。

式中：A對照為不加樣品的反應(yīng)體系；A樣品為加入樣品的反應(yīng)體系；A樣品空白為不加鄰苯三酚的反應(yīng)體系。

1.2.2.3 清除羥自由基(·OH)能力的測定（水楊酸法）

采用水楊酸法[8]。操作步驟：①分別取10 μL濃度為10 mg/mL上述10種果蔬提取物樣品，分別加入8.8 mmol/L H2O21 mL,10 mmol/L FeSO41 mL,10 mmol/L水楊酸1 mL。②加H2O2啟動反應(yīng)，37℃反應(yīng)0.5 h。③以蒸餾水作參比，在510 nm下測吸光度。每份樣品重復(fù)測定5次。

式中：其中A0為對照液的吸光度，A1為加入樣品后的吸光度，A2為不加顯色劑H2O2樣品溶液的吸光度。

1.3 數(shù)據(jù)分析

用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,組間比較采用方差分析,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 10種果蔬提取物總抗氧化能力測定結(jié)果

10種果蔬提取物總抗氧化能力測定結(jié)果見表1。

表1 10種果蔬提取物總抗氧化能力的比較（x±s，n=5）Table 1 The total antioxidant capacity from ten kinds of fruits and vegetables

檢測結(jié)果表明，593 nm處FeSO4濃度與吸光度在一定范圍內(nèi)呈線性劑量關(guān)系，y=0.0327x，R2=0.9965。

10種果蔬提取物體外總抗氧化活性高低順序依次是，藍(lán)莓＞大棗＞龍眼＞南瓜＞苦瓜＞木耳＞獼猴桃＞芹菜＞菠菜＞冬瓜?？梢娝{(lán)莓提取物總抗氧化能力最強，為 88.63±0.50（表 1）。

2.2 10種果蔬提取物清除超氧陰離子(O2-·)能力測定結(jié)果

10種果蔬提取物清除超氧陰離子(O2-·)能力測定結(jié)果見表2。

10種果蔬提取物中，清除超氧陰離子(O2-·)能力龍眼＞南瓜＞菠菜＞藍(lán)莓＞大棗＞芹菜＞冬瓜＞苦瓜＞木耳＞獼猴桃（表2）。

表2 10種果蔬提取物清除超氧陰離子()能力的比較（x±s，n=5）Table 2 The scavenging activities of ten kinds of fruits and vegetables on superoxide anion

2.3 10種果蔬提取物清除羥自由基(·OH)能力測定結(jié)果

10種果蔬提取物清除羥自由基(·OH)能力測定結(jié)果見表3。

表 310 種果蔬提取物清除羥自由基(·OH)能力的比較（x±s，n=5）Table 3 The scavenging activities of ten kinds of fruits and vegetables on·OH hydroxyl radical

10種果蔬提取物清除羥自由基（·OH）能力高低順序依次是：獼猴桃＞藍(lán)莓＞芹菜＞菠菜＞木耳＞大棗＞龍眼＞冬瓜＞苦瓜＞南瓜。獼猴桃提取物清除羥自由基能力最強。

3 討論

目前測定抗氧化活性的方法較多，但大多是針對某一種自由基的清除活性，不能代表樣品對其他自由基的清除能力或總抗氧化活性，由Bnezie和Starni建立的FRAP法[5]不是針對某一種自由基的清除活性，而是樣品總還原能力，因此，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為FRAP法測定的結(jié)果可用來反映樣品總的抗氧化活性。目前FRAP法已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于測定不同抗氧化物質(zhì)、食物樣品、生物樣品等的抗氧化活性。

龍眼3種方法測定的結(jié)果中，總抗氧化活性以藍(lán)莓最強，大棗、龍眼次之；清除超氧陰離子(O2-·)能力龍眼最強，清除羥自由基(·OH)能力獼猴桃最強。而從表2中可以看出獼猴桃的清除超氧陰離子(O2-·)能力在這十種果蔬中最低。表明獼猴桃清除自由基的能力主要體現(xiàn)在清除羥自由基(·OH)的能力上。同樣從上述結(jié)果中我們可看到，龍眼清除自由基的能力主要體現(xiàn)在清除超氧陰離子(O2-·)能力上。這10種果蔬提取物總抗氧化力最強的藍(lán)莓，其對超氧陰離子(O2-·)和羥自由基(·OH)的清除能力也都很高。有文獻(xiàn)[6]報道的山楂、鮮棗、龍眼和獼猴桃等水果的果肉提取物總抗氧化力高低順序是：山楂＞龍眼＞大棗＞獼猴桃，本試驗結(jié)果中龍眼提取物的總抗氧化力低于大棗提取物，有可能是我們只是測定了果肉提取物的總抗氧化力，而沒測籽提取物的原因。再則，我們的結(jié)果比文獻(xiàn)測的龍眼、大棗、獼猴桃的總抗氧化力普遍偏高，可能是提取方法不同所造成的，我們的方法提取的活性成分更多、更高些。

獼猴桃中的植物性成分主要有三萜類成分毛花獼猴桃酸A和B、熊果酸、VC等；龍眼中主要含有龍眼三萜A和B、磷脂酰膽堿、糖基鞘脂等成分。獼猴桃清除羥自由基（·OH）的作用及龍眼清除超氧陰離子（O2-·）的作用可能是它們其中的某些成分或這些成分綜合作用的結(jié)果。藍(lán)莓中主要含有花色苷和有機酸等成分，諸多文獻(xiàn)已報道花色苷和有機酸有很強的抗氧化作用，所以藍(lán)莓的抗氧化作用應(yīng)該是其所含的花色苷和有機酸在起作用。上述結(jié)果提示，今后對綜合抗氧化活性較強的藍(lán)莓、龍眼等的活性成分及生物活性有必要進(jìn)行更深入的研究。

[1]中國營養(yǎng)學(xué)會.中國居民膳食指南[M].拉薩：西藏人民出版社,2008：15-28

[2]郭長江,楊繼軍.蔬菜、水果抗氧化作用的研究進(jìn)展[J].中國公共衛(wèi)生,2001,17：87-88

[3]BravoL.Polyphenols：chemistry,dietarysources metabolism,and nutritional significance[J].Nutr Rev,1998,56：317-333

[4]徐靜.水果抗氧化活性與成分分析以及對衰老機體抗氧化功能的干預(yù)作用[D].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文,2006：11

[5]Benzie I F,Stiain J J.The ferric reducing ability of plasma as a measure of"antioxidant power"：the FRAP assay[J].Anal Biochem,1996,239：70

[6]郭長江,楊繼軍,李云峰.FRAP法測定水果不同部分抗氧化活性[J].中國公共衛(wèi)生,2003,19(17)：148,248,348

[7]李世峰，陳桂琛，畢玉蓉.兩種野生食用菌抗氧化及抗腫瘤活性研究[J].中國食用菌,2005,24(3)：58-62

[8]李穎暢,孟憲軍.藍(lán)莓葉黃酮提取物抗氧化活性的研究[J].營養(yǎng)學(xué)報,2008,30(4)：427-429

Antioxidant Activity of Ten Kinds of Fruits and Vegetables Extracts Including Blueberry in Vitro

YANG Hong-peng1,2,JIANG Yu-gang1,CUI Yu-shan3，PANG Wei1,LU Hao1,LU Shi-jun1，CHENG Yi-yong1
（1.Institute of Health and Environmental Medicine，Academy of Military Medical Sciences Tianjin 300050，China；2.Tianjin Agricultural College，Tianjin 300384，China；3.Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China）

2010-05-12

天津市應(yīng)用基礎(chǔ)及前沿技術(shù)研究計劃面上項目 (No.09JCYBJC12900)資助課題

楊紅澎（1976—），男（漢），博士后，研究方向：植物化學(xué)物與腦功能。

*通信作者：蔣與剛，男，研究員。