白術(shù)、莪術(shù)、連翹混合油β-環(huán)糊精包合前后性質(zhì)研究

趙東洋，李先榮，倪艷，陳藝文，李林

(山西省中醫(yī)藥研究院，山西太原 030012)

白術(shù)、莪術(shù)、連翹混合油β-環(huán)糊精包合前后性質(zhì)研究

趙東洋，李先榮*，倪艷，陳藝文，李林

(山西省中醫(yī)藥研究院，山西太原 030012)

混合揮發(fā)油;β－環(huán)糊精;GC－MS

目的:對β－環(huán)糊精包合前后的白術(shù)、莪術(shù)、連翹總混合油的化學(xué)成分及各油比例變化進(jìn)行研究分析。方法:采用薄層色譜法對包合物進(jìn)行定性鑒別，GC－MS對化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定。結(jié)果:薄層鑒別試驗(yàn)，說明包合物已形成;經(jīng)GCMS分析，包合前后混合油主要成分基本一致，但白術(shù)、莪術(shù)、連翹各比例發(fā)生變化。結(jié)論:白術(shù)、莪術(shù)、連翹總混合油經(jīng)β－環(huán)糊精包合后化學(xué)成分基本沒變，但比例發(fā)生了一定的改變。

揮發(fā)油是一類具有芳香氣味、在常溫下能揮發(fā)的油狀液體的總稱?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油具有抗腫瘤、抗菌、驅(qū)蟲及抗過敏作用，同時對中樞神經(jīng)、呼吸系統(tǒng)以及平滑肌等都有廣泛的藥理作用［1］。但揮發(fā)油性質(zhì)不穩(wěn)定，水溶性差，給臨床用藥帶來很大的不便，采用β－環(huán)糊精包合技術(shù)使揮發(fā)油在β－環(huán)糊精分子中形成一種可釋放的固體粉末，防止揮發(fā)性成分損失，便于提高穩(wěn)定性和制劑生物利用度。

據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，可獲知白術(shù)、莪術(shù)油具較強(qiáng)的抗腫瘤作用［2，3］，而連翹對抗腫瘤有一定的輔助作用［4］。將此三味藥按一定比例組成復(fù)方，其抗腫瘤效果明顯優(yōu)于各單味藥的抑瘤效果。筆者采用β－環(huán)糊精包合技術(shù)制備總揮發(fā)油包合物，能更大程度保留有效成分，并通過薄層色譜和GC－MS對混合揮發(fā)油包合前后的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行的研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器BP211D 十萬分之一電子天平，德國賽多利斯公司;CX－150型超聲波清洗機(jī)，北京天海雙龍醫(yī)療設(shè)備公司;SH－4型磁力攪拌器，北京北德科學(xué)器材有限公司;80－2臺式低速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠;Agilent5973MS－6890GC氣相質(zhì)聯(lián)用儀，美國安捷倫公司。

1.2 試藥中藥白術(shù)、莪術(shù)、連翹均符合《中國藥典》2005年版法定標(biāo)準(zhǔn)(購于山西省中醫(yī)藥研究院中藥房);β－環(huán)糊精(購于廣東省郁南縣環(huán)糊精廠，純度98%以上);莪術(shù)醇對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號10185－0104);其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 包合物制備工藝研究

2.1.1 揮發(fā)油的提取取白術(shù)、莪術(shù)、連翹三味藥材分別粉碎置于圓底燒瓶中;加入相應(yīng)倍量的水，浸泡，振搖混勻。按照藥典方法［5］分別提取8 h、6 h、5.5 h，收集揮發(fā)油，用乙醚萃取數(shù)次，合并乙醚提取液，低溫?fù)]凈乙醚，即得到3種藥材的揮發(fā)油，密封保存。根據(jù)前期藥理試驗(yàn)最佳抑瘤效果配方比例即白術(shù)油－莪術(shù)油－連翹油為10∶4∶1，配置混合油溶液，避光保存，備用。

2.1.2 包合物的制備精密稱取取2.1.1項(xiàng)下混合油1.5 g，加入無水乙醇1.5 mL，超聲至清亮，制成混合揮發(fā)油的無水乙醇溶液，備用。稱取β－環(huán)糊精15 g，按其5倍量比例加入蒸餾水，加熱使溶解制成過飽和溶液，置磁力攪拌器上至規(guī)定溫度55℃，緩慢滴加混合揮發(fā)油無水乙醇溶液，邊加熱邊攪拌1.5 h，放冷，置冰箱冷藏24 h，抽濾，30～60℃石油醚洗至無揮發(fā)油氣味，低溫真空干燥后研磨，即得白色粉末狀的混合揮發(fā)油β－環(huán)糊精包合物。

2.2 薄層定性鑒別

稱取包合物1 g，置離心管中，加乙酸乙酯5 mL，超聲處理15 min，離心，傾出上清液為乙酸乙酯提取液。殘?jiān)訜o水乙醇5 mL，超聲處理15 min，放置24 h，離心，傾出上清液為無水乙醇提取液。再精密稱取2.1.1項(xiàng)下混合揮發(fā)油0.375 g于5 mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，作為對照品溶液。吸取上述3種溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯(9∶1)為展開劑展開，取出晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在110℃烘至斑點(diǎn)顯色［6］，結(jié)果，混合揮發(fā)油包合物的乙酸乙酯提取液無相應(yīng)斑點(diǎn)。包合物無水乙醇提取液與混合揮發(fā)油的乙酸乙酯對照液有相應(yīng)斑點(diǎn)，且包合前后混合油斑點(diǎn)個數(shù)一致，而且斑點(diǎn)色澤、大小基本一致，可以推斷包合前后混合油化學(xué)成分基本沒變。

2.3 揮發(fā)油包合前后GC－MS研究

2.3.1 色譜條件GC條件:HP－5(0.25 mm×30 m，0.25 μm)石英彈性毛細(xì)管柱色譜柱;采用程序升溫，初始60℃，保持3 min，以5℃/min升至120℃，然后以3℃/min升至225℃;進(jìn)樣口溫度為200℃;載氣為高純氦氣;進(jìn)樣量1.0 μL;分流比為20∶1;MS條件:EI離子源;電子能量70eV;接口溫度280℃;離子源溫度為230℃;回極桿溫度150℃;電子倍增電壓2300V;質(zhì)量掃描范圍29～350amu。

2.3.2 供試品的制備

2.3.2.1 包合物混合油溶液的制備稱取包合物1 g 4份，分置4個15 mL具塞離心管中，加入無水乙醇10 mL，混勻，密封，超聲15 min后放置過夜。次日離心(2 500 r/min/10 min)，傾取上清液合并，置于50 mL圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1 mL，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，三氯甲烷定容，作為供試品［7］。2.3.2.2白術(shù)、莪術(shù)、連翹總混合油溶液制備精密稱取2.1.1項(xiàng)下白術(shù)－莪術(shù)－連翹(10∶4∶1)混合油0.75 g，用三氯甲烷定容于10 mL量瓶中，精密吸取1 mL于5 mL量瓶中定容，作為供試品。

2.3.3 陰性樣品溶液制備

a)缺連翹混合油溶液:按比例精密稱取白術(shù)－莪術(shù)(10∶4)0.7 g，用三氯甲烷定容于10 mL量瓶中，精密吸取1 mL于5 mL量瓶中定容，作為陰性白術(shù)、莪術(shù)混合油。

b)缺莪術(shù)混合油溶液:按比例精密稱取白術(shù)－連翹(10∶1)0.55 g，同上法制備，作為陰性白術(shù)、連翹混合油。

c)缺白術(shù)混合油溶液:按比例精密稱取莪術(shù)－連翹(4∶1)0.25 g，同上法制備，作為陰性莪術(shù)、連翹混合油。

2.3.4 對照藥材揮發(fā)油溶液制備分別精密稱取白術(shù)油、莪術(shù)油、連翹油0.5 g、0.2 g、0.05 g于10 mL量瓶中，三氯甲烷定容。分別精密吸取1 mL于5 mL量瓶中定容，作為對照白術(shù)油、莪術(shù)油和連翹油。

2.3.5 GC－MS結(jié)果與分析按上述條件對上述樣品進(jìn)行GC－MS分析，并用質(zhì)譜圖庫進(jìn)行計(jì)算機(jī)檢索和面積歸一化法計(jì)算，結(jié)果見圖1～8和表1。利用GC－MS對白術(shù)、莪術(shù)、連翹總混合油及其包合物混合油進(jìn)行分析，分離鑒定了11個化合物，包合前后化學(xué)成分基本沒變。通過對圖1～圖8的混合油、包合油、對照藥材揮發(fā)油及其陰性樣品混合油液GC－MS圖分析比對，可知1、2、3號峰代表連翹;5、8、10代表莪術(shù);4、6、7、9、11代表白術(shù)。也可以得出連翹油包合后相對含量有比較明顯地下降;莪術(shù)油含量有所增加;白術(shù)油的相對含量增加幅度較大。通過β－環(huán)糊精包合前后，混合油中白術(shù)、莪術(shù)和連翹各油的比例發(fā)生了一定程度的改變。

圖1 白術(shù)、莪術(shù)、連翹混合油

圖2 包合物混合油

圖3 連翹油

圖4 白術(shù)、莪術(shù)油

3 討論

3.1 薄層定性鑒別試驗(yàn)證明了包合物已形成，包合前后無論是斑點(diǎn)的個數(shù)、位置，還是大小和色澤基本沒有改變，可以推斷混合油包合前后主要成分無明顯變化。

圖5 莪術(shù)油

圖6 白術(shù)、連翹油

圖7 白術(shù)油

圖8 莪術(shù)、連翹油

表1 包合前后保留時間和相對百分含量

3.2 經(jīng)GC－MS分析，更進(jìn)一步證明包合前后的混合油化學(xué)成分基本沒變，但混合油中白術(shù)、莪術(shù)、連翹油組成比例發(fā)生了改變。白術(shù)、莪術(shù)、連翹混合油是多組分組成的復(fù)方，化學(xué)成分復(fù)雜，各組分化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)差別較大，因此，β－環(huán)糊精對混合油中不同成分包合能力可能有所差異。經(jīng)β－環(huán)糊精后，莪術(shù)油相對含量增加，白術(shù)油含量增加較明顯，而連翹油下降比例較大。這種變化也不排除是由于混合油復(fù)方中連翹含量很低，相同分析方法，連翹誤差較大所引起。再者，文章分離鑒定了大約混合油中85%的主要成分，而其余成分包合前后的變化情況及其對混合油的比例是否有影響此文章還未做研究，有待進(jìn)一步考察。而經(jīng)β－環(huán)糊精包合，白術(shù)、莪術(shù)、連翹混合油中各油比例的改變是否會對混合油包合物抑瘤率有顯著影響則是下一步研究的目標(biāo)。

［1］滑艷，鄧雁如，汪漢卿.各種揮發(fā)油的藥理活性及在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，14(5):467－470.

［2］張宗，張鴻翔，史天良，等.白術(shù)揮發(fā)油抗腫瘤作用的研究［J］.腫瘤研究與臨床，2006，18(12):799－800.

［3］朱善成，黃品芳，王友芳.莪術(shù)的藥理作用研究進(jìn)展［J］.海峽藥學(xué)，2007;19(4):9－10.

［4］肖會敏，王四旺，王劍波，等.連翹揮發(fā)油的成分分析及其藥理作用的研究進(jìn)展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19(8):2047－2048.

［5］中國藥典［S］.2005:附錄:Ⅹ，57－58.

［6］宋洪濤，郭濤，顏秀濤，等.肉桂揮發(fā)油β－環(huán)糊精包合物的制備工藝研究［J］.中草藥，2000，31(11):818－840.

［7］秦冬彥，宋洪濤，郭濤，等.冰片β－環(huán)糊精包合物的穩(wěn)定性考察［J］.中草藥，2000，31(4):255.

R944

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1001－1528(2010)07－1243－04

2009－10－14

山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(20080311054－2)

趙東洋(1985－)，女，在讀研究生，研究方向:從事中藥物質(zhì)基礎(chǔ)與新劑型研究。Tel:15834075155 E－maiL:zhaodongyang0626@ 126.com

*通訊作者:李先榮(1953－)，教授，博士生導(dǎo)師。Tel:(0351)4668040 E－maiL:XRLi－01@163.com