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    苦參堿對豚鼠離體膽囊平滑肌條收縮功能的影響*

    2010-09-08 12:11:56蘇麗梅戴貴東聶黎虹寧夏醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院銀川750004
    陜西中醫(yī) 2010年7期
    關(guān)鍵詞:苦參堿豚鼠離體

    蘇麗梅 戴貴東 聶黎虹 丁 娟 周 旭△ 寧夏醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院(銀川 750004)

    苦參堿(Matrine)是從豆科槐屬植物苦豆子中提取的單一生物堿,化學(xué)分子式為 C15H24N20。近年來研究發(fā)現(xiàn)其有廣泛的藥理作用和臨床功能,其主要藥理作用有抗病毒、抗炎、抗腫瘤及對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛解熱降溫和強(qiáng)心、降壓、抗心率失常等作用[1]。

    文獻(xiàn)報(bào)道[2]苦豆子水煎劑可增高豚鼠膽囊肌條的張力,加快收縮頻率及減少收縮波平均振幅且酚妥拉明、異搏定可部分阻斷苦豆子對膽囊肌條的作用,表明其對膽囊肌條的作用與2受體、Ca2+有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討苦參堿對豚鼠離體膽囊平滑肌的作用。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選普通級(jí)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物三色毛豚鼠(由寧夏醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供),32只,體重 300~450g,雌雄不限。

    1.2 藥品 (1)苦參堿(寧夏博爾泰力藥業(yè)股份有限公司提供 ,批號(hào):20030501),系白色結(jié)晶樣粉末,純度 99.5%,實(shí)驗(yàn)系列濃度為 1.00× 10-5、 1.10× 10-4、 2.10× 10-4、 (mmol/L),(2)Krebs液:每次實(shí)驗(yàn)時(shí)配制新鮮溶液 3L,成分(mmol/L):NaCl 120.6,KCl5.9,NaH2PO41.2,CaCl22.5,Mg Cl21.2,NaHCO315.4,C6H12O611.5。試劑均為市售試劑。(3)拮抗劑:阿托品(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司,批號(hào):0804201),濃度 10-6mmol/L,苯海拉明(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司,批號(hào):0804121),濃度 10-6mmol/L,異搏定(上海禾豐制藥有限公司,批號(hào) 071201),濃度 10-7mmol/L,酚妥拉明 (Sigma公司 ,批號(hào)98k4081)濃度 10-6mmol/L,六烴季銨 (Sigma公司,批號(hào)25k1028)濃度 10-5mmol/L,消炎痛 (Sigma公司,批號(hào)88k0666),濃度 10-6mmol/L。

    1.3 實(shí)驗(yàn)器材 BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟電子有限公司),FT-100生物張力傳感器(成都泰盟電子有限公司),PHS-25實(shí)驗(yàn)室 PH計(jì)(上海理達(dá)儀器廠)。高級(jí)恒溫水浴泵(上海市實(shí)驗(yàn)儀器廠),精密移液器(上海求精生化試劑儀器有限公司),方正電腦。

    1.4 方 法

    1.4.1 實(shí)驗(yàn)方法:猛擊豚鼠頭部致昏,迅速摘取膽囊,用 Krebs液漂洗干凈。將膽囊固定在盛有石蠟并充滿 Krebs液的培養(yǎng)皿中,向培養(yǎng)皿中持續(xù)供給 95%O2和 5%CO2混合氣體。用鋒利手術(shù)刀沿膽囊縱軸切取肌條,每個(gè)膽囊制備 3個(gè)肌條,共 96條,觀察苦參堿對膽囊肌條張力、收縮頻率及收縮幅度的影響;觀察不同拮抗劑對苦參堿的影響。將肌條置于 5mL灌流肌槽中,記錄肌條的等長收縮活動(dòng)。藥物采用累積加藥法,加藥間隔 2min,容量 50uL,加入拮抗劑后 2min再依次加入苦參堿溶液。以給藥前膽囊張力(g)和收縮波平均振幅(mm)、收縮頻率(c/min)作為對照值 ,給藥后的數(shù)值作為效應(yīng)值。藥物濃度是指溶于肌槽內(nèi) 5mL Krebs液之后的最終濃度。

    2 結(jié) 果

    2.1 苦參堿對豚鼠離體膽囊肌條的作用肌條自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后,每相隔 2min累積加入苦參堿溶液,累積濃度為 1.00× 10-5、 1.10× 10-4、 2.10× 10-4(mmol/L),膽囊肌條張力增高,收縮頻率減慢、收縮波平均振幅增高。 (表 1)

    表1 苦參堿對豚鼠離體膽囊平滑肌肌條收縮活動(dòng)的影響(,n=12)

    表1 苦參堿對豚鼠離體膽囊平滑肌肌條收縮活動(dòng)的影響(,n=12)

    注:與對照組比,△P<0.05,▲P<0.01

    苦參堿濃度(mmol/L)項(xiàng) 目 對照1.00× 10-5 1.10× 10-4 2.10× 10-4張力(g) 1.00±0.05 1.04±0.04△ 1.19±0.05▲ 1.34±0.05▲振幅 (mm) 5.70± 1.14 5.67± 1.15 6.70± 1.36 7.67± 1.83▲頻率 (c/min) 3.00± 0.74 2.83± 0.71 2.58± 0.67 2.25± 0.75△

    2.2 拮抗劑對苦參堿效應(yīng)的影響 消炎痛、阿托品、異搏定等均可阻斷苦參堿增高膽囊肌條張力作用,酚妥拉明可阻斷苦參堿升高收縮波平均振幅的作用,六烴季銨和苯海拉明對膽囊肌條活動(dòng)無明顯影響。 (表 2和表 3)

    表2 拮抗劑加苦參堿(1.10×10-4mmol/L)對豚鼠離體膽囊平滑肌條收縮活動(dòng)的影響(,n=12)

    表2 拮抗劑加苦參堿(1.10×10-4mmol/L)對豚鼠離體膽囊平滑肌條收縮活動(dòng)的影響(,n=12)

    注:與苦參堿組比,△P<0.05,▲P<0.01

    組 別 張力(g) 振幅(mm) 頻率(c/min)苦參堿 1.19± 0.05 6.70± 1.36 2.58± 0.66阿托品+苦參堿 1.12±0.07 7.25±1.92 2.83± 0.93酚妥拉明+苦參堿 1.20±0.06 4.91±2.10△ 3.41±1.24異搏定+苦參堿 1.16±0.06 5.83±2.03 3.25± 1.48六烴季銨+苦參堿 1.14±0.05 6.08±2.93 2.91±0.99苯海拉明+苦參堿 1.16±0.07 5.08±2.53 3.16±0.71消炎痛+苦參堿 1.10±0.07▲ 6.67±2.60 2.58±0.79

    表3 拮抗劑加苦參堿(2.10×10-4mmol/L)對豚鼠離體膽囊平滑肌條收縮活動(dòng)的影響(,n=12)

    表3 拮抗劑加苦參堿(2.10×10-4mmol/L)對豚鼠離體膽囊平滑肌條收縮活動(dòng)的影響(,n=12)

    注:與苦參堿組比,△P<0.05,▲P<0.01

    組 別 張力(g) 振幅(mm) 頻率(c/min)苦參堿 1.34± 0.05 7.67± 1.83 2.25± 0.75阿托品+苦參堿 1.27±0.07△ 7.33±2.05 2.83±1.03酚妥拉明+苦參堿 1.34±0.06 4.75±2.41▲ 3.25±1.60異搏定+苦參堿 1.27±0.06△ 5.67±2.57 3.25±1.65六烴季銨+苦參堿 1.31±0.05 6.00±2.21 2.91±1.37苯海拉明+苦參堿 1.32±0.07 6.00±2.33 2.58±1.79消炎痛+苦參堿 1.25±0.09▲ 6.83±2.32 2.17±1.26

    3 討 論 膽囊呈節(jié)律性收縮和舒張,以儲(chǔ)存、濃縮和排出膽汁。目前關(guān)于膽石癥的病因和發(fā)病機(jī)制仍不清楚,但普遍認(rèn)為膽囊運(yùn)動(dòng)功能的減弱在膽石癥疾病中起非常重要的作用[3]。膽囊收縮功能異常 ,排空延遲,使得膽囊內(nèi)過飽和膽汁形成的膽固醇結(jié)晶不能被及時(shí)的排入腸道,聚集成石,這是膽石形成機(jī)制的經(jīng)典學(xué)說。 Jazrawi[4]等證實(shí):肝膽汁在進(jìn)入小腸前大部分先進(jìn)入膽囊并很快離開膽囊,即使在消化間期依然存在,膽囊內(nèi)這種膽汁成分的不斷更換洗刷作用,不利于膽石形成,而膽石癥患者的這種運(yùn)動(dòng)明顯減弱。丁夷峰等[5]通過對無痛性膽囊結(jié)石患者脂餐前后的膽囊容積變化研究發(fā)現(xiàn),研究組空腹膽囊容積和脂餐后剩余容積均較正常組增大,且排空率下降,隨餐后時(shí)間延長 ,正常組 80%為持續(xù)排空,而研究組 48.9%進(jìn)入再充盈期,說明存在明顯的膽囊排空功能障礙。

    對于膽石癥的治療,內(nèi)外科均有療效,其中中藥治療有其獨(dú)到之處。按照中醫(yī)辨證論治的理論,采用中醫(yī)藥對癥治療膽石癥,各種方法都取得了良好的療效[6]。實(shí)驗(yàn)證明:芒硝的主要成分可使膽管括約肌松弛,膽囊收縮 ,利于膽汁、結(jié)石排出[7];單味中藥金錢草、木香、郁金能促進(jìn)膽囊收縮,膽汁流量增加[8];威靈仙能促進(jìn)肝內(nèi)膽汁分泌,松弛 Oddi括約肌[9]。

    西北特色藥物苦豆子是傳統(tǒng)中藥,具有清熱解毒、祛風(fēng)燥濕、止痛殺蟲等作用,臨床用來治療濕疹[10]及放射性皮膚[11]損傷等??喽棺又泻卸喾N生物堿,苦參堿是苦豆子中含有的生物堿之一。研究證明[12]:高膽紅素血癥小鼠經(jīng)灌胃口服苦參堿75mg/kg和 100mg/kg后,血清總膽紅素 (TBIL)、結(jié)合膽紅素(DBIL)和對照組比較均有顯著下降;血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(SGOT)也均有顯著降低。證明口服苦參堿具有明顯的降酶退黃作用??鄥A還能明顯對抗組胺、乙酰膽堿和氯化鋇興奮豚鼠、大鼠離體氣管平滑肌的作用[13]。

    本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)[2]:苦豆子水煎劑可明顯改善豚鼠離體膽囊平滑肌的收縮功能,苦豆子水煎劑對豚鼠膽囊平滑肌的作用是通過阻斷平滑肌細(xì)胞膜上的 M受體和腎上腺素能α受體。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:苦參堿可使豚鼠離體膽囊平滑肌條收縮張力增高,頻率減少,收縮波平均振幅升高,其作用可被阿托品、異搏定、酚妥拉明、消炎痛部分阻斷,苦參堿對平滑肌條的作用,可能與膽囊平滑肌細(xì)胞膜上的 M受體、腎上腺素能α受體、Ca2+通道和前列腺素受體有關(guān);六烴季銨和苯海拉明不阻斷苦參堿的作用,表明其作用與壁內(nèi)神經(jīng)節(jié)受體和組胺 H1受體無關(guān)。有關(guān)苦參堿對豚鼠膽囊平滑肌的作用機(jī)理尚需進(jìn)一步的研究。

    [1]張鳳玲,唐 永,張景梅.苦參堿、氧化苦參堿的藥理作用及其制劑的研究進(jìn)展 [J].河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004(3):84-85.

    [2]周 旭,蘆寧清,訾秀娟,等.柴胡與苦豆子對豚鼠離體膽囊肌條收縮活動(dòng)影響的實(shí)驗(yàn)研究 [J].四川中醫(yī),2003,21(11):26-27.

    [3]Portincasa P,Di CA,vanBerge-Henegouwen GP.Smooth muscle function and dysfunction in gallbladder disease.Curr Gastroenterol Rep 2004 Apr;6(2):151-62.

    [4]Jazrawi RP,Pazzi P,Perroni M L,et al.Postprandial gallbladder motor function:refilling and turnover of bile in health and in choleLithiasis.Gastroenterology,1995,109:582.

    [5]丁夷峰,蔡建庭,蔡小蕓,等.無癥狀膽石癥患者膽囊運(yùn)動(dòng)功能及阿司匹林的作用 [J].臨床肝膽病雜志,2002,18(1):53.

    [6]索 娟,陳 軍,劉志承,等.中醫(yī)藥治療膽石癥的研究進(jìn)展[J].中國藥房,2009,20(6):470-471.

    [7]李長春.硝石礬石散治療肝膽結(jié)石 128例 [J].湖北中醫(yī)雜志,1996,18(2):4-6.

    [8]鄭長青,李宇權(quán),趙素云.利膽排石湯的單味藥對健康人膽囊運(yùn)動(dòng)功能的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,1997,17(3):159-159.

    [9]陸煥清,李瑞之,孫明愛.威靈仙治療膽石癥臨床療效和實(shí)驗(yàn)觀察 [J].河南中醫(yī),1987(6):22-23.

    [10]顧科峰苦豆子油外用治療濕疹臨床觀察[J].中華實(shí)用中西醫(yī)雜志,2008,21(6):493-494.

    [11]夏文斌,翟所迪,徐文采,等.苦豆子總生物堿制劑治療放射性皮膚損傷的臨床觀察 [J].中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志,1999,191(1):46-47.

    [12]周 慧,辛順妹,馬竹卿.口服苦參堿的降酶退黃藥效學(xué)研究[J].中成藥,2001,23(12):891-894.

    [13]查 力,楊哲慧,曾慶卓,等.苦參堿對豚鼠離體氣管的影響[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)[J].1983,8(2):27-28.

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